丙型肝炎病毒感染者血清細(xì)胞因子的檢測(cè)

1、    丙型肝炎病毒感染者血清細(xì)胞因子的檢測(cè)        【摘要】目的探討丙型肝炎病毒(HCV)感染慢性化的宿主免疫機(jī)制。方法用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定了18例慢性HCV感染者、11例正常對(duì)照和10例慢性HBV感染者的T輔助淋巴細(xì)胞(Th)細(xì)胞因子IFN-、IL-2、IL-4和IL-10的血清濃度。結(jié)果HCV感染者的IL-2(Th1細(xì)胞因子)、IL-4和IL-10(Th2細(xì)胞因子)較正常對(duì)照均明顯增高(P<0.05，P<0.025，P<0.001)，但以Th2

2、細(xì)胞因子(IL-4和IL-10)增加更為顯著；盡管HBV感染者亦有IL-10的明顯增加，但其幅度低于HCV感染者。結(jié)論慢性HCV感染者存在增強(qiáng)的Th2免疫應(yīng)答，這可能是HCV感染易于慢性化的重要機(jī)制之一?！局黝}詞】肝炎病毒，丙型；干擾素；白細(xì)胞介素-2；白細(xì)胞介素-4；白細(xì)胞介素-10；T淋巴細(xì)胞 Determination of serum cytokines in individuals with HCV infectionFAN XuegongLIU Wenen LI Congzhiet al（Department of Infectious Diseases, Xiangya Hosp

3、ital, Hunan Medical University, Changsha 410008,China）【Abstract】ObjectiveTo investigate the immunopathogenesis of chronic hepatitis C virus(HCV) infection.MethodsSerum T-helper lymphocyte(Th1) cytokines(IFN-,IL-2) and Th2 cytokines (IL-4,IL-10) were measured by ELISA in 18 individuals with chronic H

4、CV infection 10 persons of chronic HBV infection and 11 normal persons.ResultsIL-2 (P<0.05),IL-4 and IL-10 (P<0.025,P<0.001)were significantly increased in HCV infected hosts as compared to 11 normal controls, the production of Th2 cytokines was more predominant.ConclusionAn enhanced Th2 re

5、sponses are present in HCV infection, which may be responsible for the chronicity of HCV infection.【Key words】Hepatitis C virus;T-lymphocyte;Interferon;Interleukin-2;Interleukin-4;Interleukin-10丙型肝炎病毒(HCV)感染的重要特征之一是約50%的感染者將進(jìn)展為慢性感染。雖然有較多關(guān)于丙型肝炎的研究報(bào)道，但除了病毒變異因素外，宿主免疫應(yīng)答在HCV感染的慢性化中作用如何，了解甚少。近年T-細(xì)胞因子在丙型肝炎

6、發(fā)病機(jī)制中的作用受到了重視1。為試從宿主細(xì)胞免疫方面探討丙型肝炎的慢性化機(jī)制，我們測(cè)定了慢性HCV感染者血清中的有關(guān)細(xì)胞因子，現(xiàn)報(bào)道如下。1材料和方法1.1對(duì)象18例慢性HCV感染者系湘雅醫(yī)院傳染科1997年3月至7月的住院和門(mén)診病人，年齡2368歲；其中男性10例，女性8例；除1例之外，其余均有輸血史，HCV感染史至少在1年以上。HCV感染的診斷根據(jù)血清抗-HCV抗體和HCV RNA的測(cè)定。所有病例近3個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)劑；重疊有HBV或HGV感染者，及合并有其他嚴(yán)重疾患者從研究組中去除。11名健康的本校職工和學(xué)生作為正常對(duì)照，他們均被排除HBV和HCV感染。10例為傳染科同期住院的慢性

7、乙型肝炎病人作為病人對(duì)照，其HBV感染的診斷根據(jù)血清HBV標(biāo)志物和HBV DNA的測(cè)定，除外了HCV或HGV感染，近3個(gè)月內(nèi)無(wú)免疫調(diào)節(jié)劑使用史。1.2方法血清HBV標(biāo)志物、抗-HCV抗體和抗-HGV抗體測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，試劑盒分別購(gòu)于洛陽(yáng)華美生物工程分司和珠海生物試劑工程公司；HCV RNA檢測(cè)采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，試劑盒購(gòu)自廈門(mén)長(zhǎng)城生物工程公司；用于測(cè)定細(xì)胞因子的血清凍存于-30，細(xì)胞因子干擾素(IFN-)、白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4和IL-10的測(cè)定采用ELISA方法，每樣本均檢測(cè)雙孔取均值，試劑盒系美國(guó)Genzyme公司產(chǎn)品，由深圳晶美生物工程公司分裝。

8、上述實(shí)驗(yàn)均按說(shuō)明書(shū)程序操作。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)以<"01 (90 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100319190739256" 12 17>±s表示，以t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2結(jié)果HCV、HBV感染者和正常對(duì)照的血清IFN-、IL-2、IL-4和IL-10水平和分布狀態(tài)分別列于表1和1。與正常對(duì)照比較，慢性HCV感染者的IL-2、IL-4和IL-10均明顯增加，IFN-無(wú)明顯升高；慢性HBV感染者則僅IL-10明顯升高，但其升高幅度低于HCV感染者。HCV感染者的血清 細(xì)胞因子濃度與血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(

9、ALT)水平之間不存在相關(guān)性。3討論新近的研究確認(rèn)，根據(jù)所產(chǎn)生細(xì)胞因子的功能完全不同，輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)可分為T(mén)h1和Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-、IL-2和淋巴毒素(TNF)等細(xì)胞因子，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。如促進(jìn)細(xì)胞毒T細(xì)胞的殺傷作用，激活巨噬細(xì)胞殺滅細(xì)胞內(nèi)病原體等；Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等，主要功能為促進(jìn)B細(xì)胞發(fā)育和介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，如促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，抑制細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)，抑制單核-巨噬細(xì)胞的激活和活性氧產(chǎn)物的產(chǎn)生等2。一般認(rèn)為，Th1免疫應(yīng)答增強(qiáng)宿主對(duì)微生物感染，尤其是對(duì)病毒與胞內(nèi)病原體感染的免疫性和防御功能；而Th2應(yīng)答則與感染的進(jìn)展、持續(xù)

10、性和慢性化有關(guān)，對(duì)微生物感染有負(fù)性調(diào)節(jié)作用3。增強(qiáng)的Th2應(yīng)答作為病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)制近年亦受到重視1，4。本研究表明，慢性HCV感染者的Th1(IL-2)和Th2(IL-4,IL-10)細(xì)胞因子均有升高。提示由于病毒感染，T細(xì)胞已在體內(nèi)激活，這一結(jié)果與Cacciarelli等人1的報(bào)道類似。值得注意的是，Th2細(xì)胞因子的增加幅度明顯大于Th1細(xì)胞因子，說(shuō)明HCV感染者體內(nèi)存在增強(qiáng)的Th2應(yīng)答。鑒于Th2細(xì)胞因子的免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用，我們認(rèn)為，這種增強(qiáng)的Th2應(yīng)答可能是HCV感染慢性化的重要機(jī)制之一。這可能反應(yīng)了宿主的一種自身保護(hù)機(jī)制，即人體宿主試通過(guò)低調(diào)節(jié)免疫/炎癥反應(yīng)來(lái)減弱炎癥過(guò)程，從而減輕肝

11、細(xì)胞損傷，同時(shí)也使宿主不能清除HCV，導(dǎo)致感染的慢性化。     1三組研究對(duì)象血清細(xì)胞因子水平分布Fig.1The serum cytokine levels in three groups studiedA:IFN-.B:IL-2.C:IL-4.D:IL-10表1三組研究對(duì)象血清細(xì)胞因子的比較(<"01 (90 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100319190739256" 12 17>±s，pg/ml)Tab.1The comparison of serum

12、cytokines in three groups studied(<"01 (90 字節(jié))" src="/med/cano/201003/20100319190739256" 12 17>±s，pg/ml)分組GroupIFN-IL-2IL-4IL-10正常對(duì)照Normal control24.10±15.6161.57±28.7014.94±13.7317.87±9.49HBV慢性感染者Chronic HBV infection32.48±19.9956.75±20.0

13、421.44±11.2331.16±17.15*HCV慢性感染者Chronic HCV infection28.09±15.65118.53±95.23*30.49±17.55*50.30±19.59*     *，*，*：與正常對(duì)照比較，分別為P<0.05，P<0.025，P<0.001*，*，*：P<0.05,P<0.025,P<0.001 when compared with normal controls respectively 本課題由國(guó)家教委優(yōu)秀

14、年輕教師基金和衛(wèi)生部?jī)?yōu)秀青年人才基金資助作者單位：范學(xué)工（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）劉文恩（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）李聰智（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）羅良學(xué)（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）譚德明（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）胡國(guó)齡（長(zhǎng)沙，湖南醫(yī)科大學(xué)湘雅醫(yī)院傳染科410008）王智純（輸血科）參考文獻(xiàn)1，Cacciarelli TV, Martinez OM, Gish RG, et al.Immunoregulatory cytokines in chronic hepatitis C virus

15、 infection: pre- and posttreatment with interferon alfa. Hepatology, 1996,24:6-9.2，F(xiàn)an XG, Yakoob J, Fan XJ, et al. Enhanced Th2 responses:immune mechanism of H.pylori infection. Iri J Med Sci, 1996,106:37-39.3，Modlin RL, Nutman TB. Type 2 cytokines and negative immune regulation in human infections. Curr O