龍香平喘膠囊止咳平喘藥效學(xué)實驗

1、龍香平喘膠囊止咳平喘藥效學(xué)實驗    【摘要】  目的  觀察龍香平喘膠囊（LXP）鎮(zhèn)咳平喘作用及有關(guān)藥理作用。方法  用組胺-乙酰膽堿噴霧引喘法建立豚鼠哮喘模型，觀察龍香平喘膠囊（1.2、0.6、0.3g/kg）對豚鼠引喘潛伏期的影響；豚鼠肺溢流、離體氣管實驗觀察龍香平喘膠囊對組胺引起支氣管痙攣的對抗作用；氨水、SO2引咳實驗觀察龍香平喘膠囊的止咳作用；小鼠炭末廓清率實驗觀察龍香平喘膠囊對小鼠免疫作用的影響；抗卵白蛋白血清誘導(dǎo)大鼠PCA試驗觀察龍香平喘膠囊對遲發(fā)性過敏反應(yīng)的影響;小鼠耐缺氧、抗疲勞實驗觀察龍香平喘膠囊的耐缺

2、氧、抗疲勞作用。結(jié)果  龍香平喘膠囊可明顯延長組胺-乙酰膽堿引喘的潛伏期；抑制組胺致麻醉豚鼠肺溢流量增加，降低肺溢流曲線上升高度，縮短組胺致氣管痙攣的維持時間；對乙酰膽堿致豚鼠離體氣管平滑肌痙攣具有明顯的松弛作用；降低氨水、SO2引咳咳嗽次數(shù)；抑制抗卵白蛋白血清誘導(dǎo)的大鼠PCA；能提高小鼠炭末廓清率和延長小鼠常壓耐缺氧的存活時間。結(jié)論  龍香平喘膠囊有較好的止咳、平喘作用。        【關(guān)鍵詞】  龍香平喘膠囊（LXP）；止咳平喘；哮喘；蛇膽川貝散（SDCB）；同種被動皮膚過敏反應(yīng)（PCA）;原藥水煎

3、液（WEM）                【Abstract】  Objective  To study the antitussive and antiasthmatic effects of longxiangpingchuan capsule（LXP）.Methods  Observation the effect of LXP on the latent period of inducing asthma

4、induced by spraying acetylcholine-histamine in guinea pigs; Observation the antitussive effect of LXP by lung overflow test and making isolated tracheal chain of guinea pigs;Observation the effect of LXP on immunological function by carbon particle clearance test in mice; Observation the effect of L

5、XP on delayed anaphylaxis induced by ovum protein in rats;Observation the hypoxia tolerant and anti-tired effects of LXP by hypoxia tolerance test and the anti-tired test of mice.Results  LXP could significantly prolong the latent period of inducing asthma in guinea pigs induced by spraying ace

6、tylcholine-histamine，inhibit the increase of lung overflow caused by histamine in anesthetized guinea pigs，relax the bronchus smooth muscle markedly，reduce the times of cough induced by ammonia water and SO2，inhibit the PCA caused by ovum protein in rats，increase carbon particle clearance in mice an

7、d lengthen the survival time of mice in anoxic condition.Conclusion  LXP has the notable antitussive and antiasthmatic effects.           龍香平喘膠囊 （longxiangpingchuan capsul）主要由穿山龍、云香草、地龍等幾味中藥組成，具有止咳、平喘、調(diào)節(jié)免疫、抗變態(tài)反應(yīng)、抗疲勞、耐缺氧等功效，常用于治療急、慢性支氣管炎引起的咳嗽、喘息。

8、將這些傳統(tǒng)的止咳、平喘中草藥制成膠囊，既便于患者服用，又有利于藥物吸收，增強療效。筆者力圖通過一系列的藥理實驗，研究該藥的止咳、平喘等藥理作用。        1  材料        1.1  試劑與藥品  龍香平喘膠囊（LXP），由沈陽藥科大學(xué)藥劑教研室提供，批號980428，規(guī)格0.2g/粒，每克相當(dāng)于生藥9.19g；蛇膽川貝散江西南昌光華制藥廠出品，批號990106，規(guī)格0.3g/瓶；磷酸組胺，上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司出品，批號950

9、1011；氯化乙酰膽堿，北京東環(huán)聯(lián)合化工廠出品，批號950420；印度墨汁，北京四中化工廠出品，980301。        1.2  動物  豚鼠120只各半，體重150500g；昆明種小白鼠200只，體重1922g；Wistar種大鼠60只，體重90200g，、各半，動物均購自沈陽藥科大學(xué)實驗動物中心，合格證號遼動合字033號。        1.3  儀器  超高級恒溫水?。ㄟ|陽恒溫儀器廠出品），自動平衡記錄儀（滬大華儀表廠出品）

10、，可見分光光度計（上海第三分析儀器廠出品）。        2  方法與結(jié)果        2.1  龍香平喘膠囊對組胺-乙酰膽堿噴霧引起豚鼠哮喘潛伏期的影響  取豚鼠60只，體重150200g，按文獻方法1放入霧室，恒速、恒量噴入2%氯化乙酰膽堿（Ach）和0.1%磷酸組胺混合液15s，觀察引起動物呼吸急促、抽搐及跌倒翻滾時間，并以跌倒翻滾時間小于120s的動物為哮喘合格動物。將哮喘合格的動物隨機分為5組，每組10只，實驗組灌服LXP 0.2、

11、0.4、0.8g/kg，蛇膽川貝散0.24g/kg，原藥水煎液3.6g/kg，空白對照組灌胃給等容積0.5%CMC Na5ml/kg，每天1次，連續(xù)5天，末次給藥后1h，依上述方法噴霧引喘，引喘噴霧記錄豚鼠跌倒翻滾的時間，結(jié)果見表1。LXP明顯延長豚鼠的跌倒翻滾時間，中劑量組的延長率較蛇膽川貝散高18%。 Tab.1  The Effect of Contents in LXP on Asthma Induced by Acetylcholine-Histamine  （n=10，x±s ） 注：與0.5%CMC組比較，bP<0.01   

12、0;   2.2  龍香平喘膠囊對豚鼠肺溢流的影響  取豚鼠48只，體重200300g，按文獻2法，動物隨機分為6組，每組8只，實驗組灌服LXP 0.2、0.4、0.8g/kg，蛇膽川貝散0.24g/kg，空白對照組灌胃給等容積0.5%CMCNa5ml/kg，每天1次，連續(xù)5天。實驗日腹腔注射烏拉坦4ml/kg麻醉，常規(guī)方法固定豚鼠并分離氣管。將氣管插管按肺溢流實驗方法連接小動物人工呼吸機，壓力換能器，自動平衡記錄儀，調(diào)解呼吸頻率65次/min，呼吸時比為1.5：1，潮氣量11ml，在豚鼠胸壁上開一小洞，造成氣胸，以抑制自發(fā)呼吸。分離十二指腸，供給藥用，

13、分離頸靜脈，供注射組織胺。描記肺溢流曲線，待曲線穩(wěn)定后靜脈注入磷酸組胺5g/只，導(dǎo)致氣管痙攣，記錄水面高度，肺溢流曲線及組胺作用維持時間。待曲線恢復(fù)正常5min后，于十二指腸起始段給藥，分別于給藥后0、30、60、90min靜注同劑量磷酸組胺，觀察藥物對組胺致痙的拮抗作用，結(jié)果見表2。LXP明顯抑制麻醉豚鼠的肺溢流量增加，肺溢流曲線上升高度減少，縮短組胺致氣管痙攣作用維持時間，對組胺致豚鼠氣管痙攣有明顯的拮抗作用，LXP 0.4g/kg與臨床等效量的蛇膽川貝散和原藥材作用相比略強。 Tab.2  The Effect of LXP on Lung Overflow in Guinea

14、 Pigs  （n=8，x±s）   注：與0.5%CMC組比較，aP<0.05，bP<0.01     2.3  龍香平喘膠囊對豚鼠離體氣管平滑肌的解痙作用  取體重350500g豚鼠，按文獻方法制備豚鼠離體氣管片3，以34片連成一條，上端與張力換能器相連，下端掛于通氣鉤上，置于盛有40ml 37.0±0.5克-亨液的麥?zhǔn)显」軆?nèi)，其中通以95%O2和5%CO2，負(fù)荷為2g，每半小時更換1次營養(yǎng)液。平衡2h后加入Ach（Ach最終濃度10g/ml），氣管收縮達峰值后立即加入受試藥物（藥物及終濃

15、度見表3）觀察5min內(nèi)曲線高度，并依下式計算氣管收縮抑制率，求IC50，然后沖洗35次，基線恢復(fù)正常后，分別進行下一個劑量或藥物實驗。結(jié)果LXP膠囊對Ach引起的氣管痙攣具有明顯松弛作用，所測IC50明顯小于蛇膽川貝散和原藥材。        氣管收縮抑制率=給組胺氣管收縮高度-用藥后的收縮高度/給組胺氣管收縮高度×100%        2.4  龍香平喘膠囊對小白鼠SO2引咳的鎮(zhèn)咳作用  取小白鼠60只，各半，體重1922g，按體重隨機分組

16、，每組10只。第1組給0.5%CMC 20ml/kg，第2組給原藥水煎液5.5g/kg，第3組給蛇膽川貝散0.36g/kg，46組分別給LXP0.3、0.6、1.2g/kg，連續(xù)灌胃給藥5天，末次給藥后1h，將小鼠放入250ml廣口瓶內(nèi)，注入4ml SO2，依文獻1標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果見表4。LXP明顯降低SO2對小白鼠引咳次數(shù)，其作用與臨床等效量的蛇膽川貝散相近。 Tab.3  The  Spasmolytic Effect of LXP on Isolated Bronchus Smooth Muscle in Guinea Pigs  （

17、n=8，x±s）Tab.4  The Antitussive Effect of LXP on Cough Induced by SO2 in Mice  （n=10，x±s） 注：與0.5%CMC組比較，bP0.01     2.5  龍香平喘膠囊對小白鼠氨水引咳的鎮(zhèn)咳作用  取小白鼠60只，各半，體重1922g，小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同，末次給藥1h后，依文獻4方法略加改進，將小鼠放入霧室內(nèi)，氨水0.4ml滴入霧室?guī)Э啄景迳希軣?min，觀察氨水引咳次數(shù)，結(jié)果見表5。LXP可降低氨水對

18、小鼠的引咳次數(shù)，弱于蛇膽川貝散，但略強于原藥材水煎液。 Tab.5  The Antitussive Effect of LXP on Cough Induced by Ammonia Water in Mice  （n=10，x±s） 注：與0.5%CMC組比較，aP0.05，bP0.01       2.6  龍香平喘膠囊對小鼠炭粒廓清速率的影響  取小白鼠60只，各半，體重1922g，小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同，末次給藥1h后，依文獻4方法給小白鼠靜脈注射印度墨汁（稀釋4倍）10ml/k

19、g，分別于靜脈注射后2min、10min眼眶取血25l，各加入0.1%Na2CO3 2ml，搖勻，在波長600nm處測吸光度（OD），于末次取血后將小鼠處死，稱肝脾重量。按下式計算廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)，結(jié)果見表6，LXP可增強小白鼠對炭末的廓清指數(shù)和吞嗜指數(shù)，中劑量組的K和值均大于蛇膽川貝散和原藥材組。        K=logOD2-logOD10/t10-t2        =K1/3×體重（g）/肝重（g）+脾重（g） Tab.6  The Effe

20、ct of LXP on Carbon Particle Clearance Rate in Mice  （n=10，x±s） 注：與0.5%CMC組比較，aP0.05，bP0.01     2.7  龍香平喘膠囊對同種被動皮膚過敏反應(yīng)（PCA）的影響  取wistra大鼠48只，各半，體重150200g，隨機分為6組，每組8只，第1組給0.5%CMC 10ml/kg，第2組給原藥水煎液5.5g/kg，第3組給蛇膽川貝散0.36g/kg，4組分別給LXP 0.15、0.3、0.6g/kg，每天1次，連續(xù)灌胃給藥5天。給藥后2

21、天脊背部脫毛，次日于脫毛部皮內(nèi)注射不同稀釋度（1：16，1：32）大鼠抗卵白蛋白血清共4點，0.1ml/點，并于末次給藥前2h靜注1%伊文思蘭和卵白蛋白10mg/kg混合液1ml/只，2h后斷頭處死。翻開背部皮膚，測其藍染面積，結(jié)果見表7。LXP各組藥物明顯降低藍染面積，說明該藥能抑制大鼠的PCA反應(yīng)，其作用略低于蛇膽川貝散。 Tab.7  The Effect of LXP on PCA in Rats  （n=8，x±s） 注：與0.5%CMC組比較，aP0.05，bP0.01     2.8  龍香平喘膠囊對小鼠耐缺氧

22、的影響  取小白鼠60只，各半，體重1922g，小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同，末次給藥1h后，按文獻方法放入裝有15g鈉石灰的250ml密閉廣口瓶內(nèi)，觀察并記錄死亡時間，結(jié)果見表8。LXP可明顯延長小鼠存活時間，作用與原藥水煎液和蛇膽川貝散相似。 Tab.8  The Effect of LXP on Hypoxia Tolerance in Mice  （n=10，x±s） 注：與0.5%CMC比較，aP0.05，bP0.01      2.9  龍香平喘膠囊對小鼠抗疲勞的影響  取

23、小白鼠60只，各半，體重1922g，小白鼠分組、給藥劑量及時間與2.4相同，于末次給藥前將小鼠放在轉(zhuǎn)棒儀上訓(xùn)練，末次給藥1h后，將小鼠放在轉(zhuǎn)棒儀上（10轉(zhuǎn)/min），觀察并記錄小鼠在轉(zhuǎn)棒儀上滯留時間，結(jié)果見表9。LXP小劑量可延長滾棒時間，實驗結(jié)果表明LXP有抗疲勞作用。 Tab.9  The Anti-tired Effect of LXP in Mice  （n=10，x±s） 注：與0.5%CMC組比較，aP0.05     3  討論        慢性支氣

24、管炎是氣管、支氣管黏膜及周圍組織的非特異性慢性炎癥。是由于感染、物理、化學(xué)、過敏、寒冷、植物功能失調(diào)，以及機體自身呼吸道局部防御、免疫功能降低等因素，導(dǎo)致支氣管黏膜充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤、氣管平滑肌痙攣等病理改變?？人?，咳痰，喘息及反復(fù)發(fā)作是慢性支氣管炎的主要臨床特點，病情若緩慢進展可發(fā)展為肺氣腫、肺動脈高壓、肺源性心臟病，是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見病。此癥屬于中醫(yī)學(xué)的“咳嗽”的范圍，多屬于內(nèi)傷咳嗽，為風(fēng)寒、風(fēng)熱外襲，邪襲肌表，肺氣不宣、清肅失職，痰液滋生所至，肺腎兩虛，肺虛上逆，腎氣不納出現(xiàn)喘息。所以，除控制感染、消除致病因素外，止咳、祛痰、平喘在慢性支氣管炎的治療中尤為重要。        本實驗證明，龍香平喘膠囊可延長組胺-乙酰膽堿噴霧引起豚鼠哮喘潛伏期；對Ach引起的豚鼠離體氣管平滑肌痙攣有解痙作用；可明顯降低麻醉豚鼠的肺溢流量，肺溢流曲線上升高度減少，縮短組胺