慢性排斥患者移植腎組織中細(xì)胞因子的表達(dá)

1、慢性排斥患者移植腎組織中細(xì)胞因子的表達(dá)關(guān)鍵詞腎移植排斥反應(yīng)細(xì)胞免疫慢性排斥反應(yīng)(慢排)移植腎中細(xì)胞免疫的確切機(jī)制尚不清楚，多數(shù)學(xué)者一致認(rèn)為浸潤的各種免疫細(xì)胞起關(guān)鍵性作用。已證明粘附分子ICAM-1，VCAM-1在介導(dǎo)特異性白細(xì)胞粘附到內(nèi)皮細(xì)胞作用的同時，也在白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞遷移、侵入方面發(fā)揮重要作用；其在正常人類腎臟和實驗動物腎臟上均有表達(dá)，且已在用抗細(xì)胞粘附分子(CAMS)單克隆抗體治療移植物排斥反應(yīng)方面取得一定進(jìn)展，且TNF-是單核巨噬細(xì)胞系來源的細(xì)胞因子，在炎癥免疫反應(yīng)中充當(dāng)重要角色；而IL-2通過與IL-2R相互作用，更是在免疫反應(yīng)過程中起中樞作用，而IL-2R表達(dá)是免疫系統(tǒng)特別是巨噬細(xì)

2、胞活化的重要標(biāo)志；B71是T細(xì)胞活化過程中不可缺少的第二信使，通過B7-1CD28協(xié)同刺激通道在排斥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。本文擬在對慢排移植腎組織活檢的基礎(chǔ)上，研究ICAM-1，VCAM-1，TNF-，IL-2R及B71分子的原位表達(dá)，初步探討移植腎慢性排斥反應(yīng)的細(xì)胞免疫機(jī)制。1材料和方法11材料本組包括臨床(癥狀+檢查)和病理（參照Banff標(biāo)準(zhǔn)）均證實為慢排的腎活檢組織共26例，5例因配型結(jié)果不佳而棄用的供腎作為正常對照，所有慢排標(biāo)本經(jīng)腎tru-cut針活檢穿刺獲取，經(jīng)OCT包埋，液氮保存。12免疫組化技術(shù)液氮保存的腎活檢組織行冰凍切片（5m），室溫下空氣干燥，密封保存于70低溫冰箱中備用，

3、丙酮固定，以抗人ICAM-1 VCAM-1單抗及TNF-，CD25，B71單抗，采用ABC法檢測腎組織中相應(yīng)抗原，DAB顯色(或ACE)，蘇木素復(fù)染，鏡下觀察，每例均設(shè)陰性對照。13結(jié)果分析腎組織內(nèi)所有結(jié)構(gòu)均行ICAM-1、VCAM-1、TNF-、IL-2R及B71觀察，至少10個視野，根據(jù)腎內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)計分，（）無陽性細(xì)胞；（）散在陽性細(xì)胞；（）中等數(shù)量陽性細(xì)胞；（）大量陽性細(xì)胞。2結(jié)果21病理改變特征本研究中，經(jīng)臨床診斷為移植腎慢排的26例患者，組織切片HE染色，均可觀察到不同程度慢排的病理改變特征：包括腎血管、腎小球、腎間質(zhì)與腎小管等諸方面的變化，最常見的病理改變特點為移植腎細(xì)小動脈壁增

4、厚，較嚴(yán)重病例可見累及葉間動脈和弓狀動脈；動脈內(nèi)膜纖維組織增生，間質(zhì)成纖維細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)膜。在不同的慢排病例中腎小球的病變程度不同，其中包括GBM增生，系膜區(qū)基質(zhì)增生，局灶節(jié)段性腎小球硬化，萎縮；而腎間質(zhì)變化主要是間質(zhì)細(xì)胞浸潤及纖維化，小管萎縮。22粘附分子，細(xì)胞因子及協(xié)同刺激因子在慢排移植腎組織中的原位表達(dá)（見附表）附表ICAM-1，VCAM-1，TNF-，IL-2R，B71在慢排移植腎組織中的原位表達(dá)ICAM-1VCAM-1TNF-IL-2RB71慢排組n26正常組n5慢排組n26正常組n5慢排組n26正常組n5慢排組n26正常組n5慢排組n26正常組n5腎小球腎小管腎間質(zhì)221ICAM-1表

5、達(dá)同正常腎臟相比，腎小球部分壁層上皮細(xì)胞及其間質(zhì)ICAM-1表達(dá)增強(qiáng)，在部分近曲小管上皮細(xì)胞及微動脈，小動脈內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1也有部分表達(dá)。222VCAM-1表達(dá)VCAM-1在慢排腎組織中表達(dá)比正常腎臟更為廣泛，腎間質(zhì)及微動脈、小動脈內(nèi)皮細(xì)胞上有VCAM-1表達(dá)，且染色有不同程度的增強(qiáng)。此外，ICAM-1和VCAM-1在間質(zhì)炎癥區(qū)域和小管損傷的部位有更加集中的表達(dá)；但在少數(shù)缺乏活動性炎癥僅表現(xiàn)為間質(zhì)纖維化的慢排移植腎中ICAM-1有所增強(qiáng)，但VCAM-1幾乎不表達(dá)。223TNF-表達(dá)在慢排移植腎中表達(dá)明顯增強(qiáng)，主要見于腎間質(zhì)浸潤細(xì)胞。224IL-2R表達(dá)慢排移植腎中IL-2R表達(dá)明顯增強(qiáng)，

6、亦主要分布于腎間質(zhì)浸潤細(xì)胞。225B71表達(dá)B71在慢排腎組織中主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞，腎小球毛細(xì)血管叢，管周毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，而其它部位B71表達(dá)甚少。 3討論本研究探討慢排的細(xì)胞免疫機(jī)制，對26例慢排移植腎活檢組織中粘附分子，細(xì)胞因子及協(xié)同刺激因子原位表達(dá)進(jìn)行檢測，表明在慢排移植腎組織不同結(jié)構(gòu)中其表達(dá)異常，ICAM-1增強(qiáng)表達(dá)于腎小球及腎間質(zhì)小血管，伴周圍淋巴細(xì)胞浸潤；而VCAM-1則在腎小管及其間質(zhì)內(nèi)表達(dá)增強(qiáng)，在腎小球中無表達(dá)。已證明ICAM-1和VCAM-1在介導(dǎo)特異性白細(xì)胞粘附到內(nèi)皮細(xì)胞作用的同時，也在白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞遷移、侵入方面發(fā)揮重要作用1。故我們有理由認(rèn)為，ICAM-1在慢排

7、腎臟腎小球及間質(zhì)小血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎性細(xì)胞免疫攻擊中起重要作用；而小管損傷可能有VCAM-1的參與。進(jìn)一步我們觀察到ICAM-1和VCAM-1在間質(zhì)炎癥區(qū)域和小管損傷部位有更加集中的表達(dá)，從而支持了上述觀點。TNF-主要由活化的巨噬細(xì)胞單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生；而IL-2R表達(dá)則是活化巨噬細(xì)胞的標(biāo)志2，3，二者在腎間質(zhì)浸潤細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)，提示慢排腎組織中浸潤炎細(xì)胞（T淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞）處于活化狀態(tài)，在移植免疫中起重要作用，已有人用細(xì)胞培養(yǎng)的方法證實細(xì)胞因子TNF-、IFN-等刺激激活的腎小管上皮細(xì)胞合成ICAM-14，故可以推測在慢排中粘附分子同細(xì)胞因子間作用息息相關(guān)，共同參與細(xì)胞免疫排斥反應(yīng)，在

8、我們的實驗中，我們觀察到在慢排腎臟中腎間質(zhì)ICAM-1，VCAM-1與TNF-同時出現(xiàn)表達(dá)增強(qiáng)，推測有可能它們共同參與間質(zhì)炎性損傷；有文獻(xiàn)報道TNF-可能作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷5，而在慢排中的作用，有待進(jìn)一步探討。在實驗中我們注意到同TNF-一樣，IL-2R在腎間質(zhì)中染色增強(qiáng)，表明活化的巨噬細(xì)胞參與了間質(zhì)炎癥。在我們的觀察中B71主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞、少許腎小球毛細(xì)血管叢及管周毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上，我們認(rèn)為在慢排中，一方面通過自身的抗原產(chǎn)生針對內(nèi)皮細(xì)胞的特異性抗體，引起一系列損害；而另一方面內(nèi)皮細(xì)胞以抗原呈遞細(xì)胞的身份通過表達(dá)B71產(chǎn)生協(xié)同刺激信號，對T細(xì)胞的活化是必不可少的前

9、提條件。VCAM-1與B71在慢排腎臟中的表達(dá)分布相類似，共同表達(dá)于腎小管。它們之間有何關(guān)聯(lián)需進(jìn)一步研究。小結(jié)本研究通過26例慢排移植腎組織活檢，用免疫組化技術(shù)證明在人類慢排移植腎組織中粘附分子ICAM-1、VCAM-1表達(dá)有不同程度增強(qiáng)，浸潤淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞原位表達(dá)TNF-和IL-2R明顯增強(qiáng)；B71表達(dá)在腎小管上增強(qiáng)，這些資料進(jìn)一步支持細(xì)胞免疫在慢排發(fā)病機(jī)制中起重要作用。作者單位：西安醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院腎移植科（西安，710061）參考文獻(xiàn)1Halloran PF， Broski AP The molecular immunology of acute rejection：An ov

10、erview Transplant immunol，1993，1：32 Noronha IL， Eberlein Gonska M， Hartley B et al In situ expression of tumer necrosis factor-alpha， interferon-gamma，and interleukin-2 receptors in renal allograft biopsies Transplantation，1992，54（6）：10173 Seron O， Alexopoulos E， Raftery MJ et al Diagnosis of rejection in renal allograft biopsies， using the presencs of activated and proliferating cells Transplantation，1989，47：8114 Lin X， Kirby JA Renal allograft rejetion：induction and function of adhesis molecules on cultured epithelial cells Cln Exp Immunol，1992 Oct，90（1）：1115 Sato N， Goto T， Haranak A et a