土壟大白蟻巢的藥效研究

1、    土壟大白蟻巢的藥效研究        摘要【目的】觀察土壟大白蟻巢(縮寫MA，下同)制劑的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎的藥理作用。【方法】用SO2與氨水(NH4OH)引咳法觀察MA的鎮(zhèn)咳作用；用酚紅與毛細管排痰法觀察MA的祛痰作用；用氣管容積法與噴霧致喘法觀察MA的平喘作用；用角叉菜膠與棉球植入法觀察MA的抗炎作用?！窘Y果】MA的水提物和水提醇溶物對SO2、氨水引咳的小鼠可明顯延長引咳潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；顯著增加小鼠呼吸道粘膜酚紅的排出量，增加大鼠呼吸道內痰液的分泌量；對

2、豚鼠離體氣管平滑肌有明顯的松弛作用，可延長乙酰膽堿和組織胺混合液所致豚鼠哮喘的潛伏期；對大鼠急、慢性炎癥模型均呈現(xiàn)抗炎作用?！窘Y論】MA水提物和水提醇溶物具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘和抗炎作用，MA水提醇不溶物亦有一定的鎮(zhèn)咳、祛痰和抗炎作用，但作用效果較MA水提物和水提醇溶物為弱。關鍵詞土壟大白蟻巢水提物藥效中分類號R285.5 Pharmacodynamic Study on Nest Macrotermes AnnandadeiLi AiyuanXie PeishanZhao Yi（Guangxi College of TCM Nanning 530001）Huang Rui songZhengJ

3、ie（Guangxi Nationality Research Institute of Medicine Nanning 530001）Abstract【Objective】To observe the effect of Nest Macrot ermes Annandadei Preparation(NMAP) on expelling phlegm, relieving cough and asth ma and resisting inflammation. 【Methods】The observaton on the cough-relieving effect of NMAP w

4、as made by inducing cough with SO2 and NH4OH；obser vation on the phlegmexpelling effect of NMAP by using phenol red；observation on the asthma-relieving effect of NMAP by inducing asthma with ach-histamine and trachea volume method;and observation on the anti-inflammation effect of NMAP by implantati

5、on of carrageenin and cotton ball.【Results】The water extract and water extract soluble in alcohol of NMAP can prolong apparently the coughing incubation period and reduce coughing frequency;increase excretion of phenol red and phlegm from the respiratory tract; relax smooth muscle of trachea; prolon

6、g the incubation period of asthma due to ach-histamine solution and resist inflammation on acute and chronic inflammator models. 【Conclutions】The NMAP water extract and water extract soluble in alcohol of NMAP has the function of expelling phlegm,relieving cough and asthma and resisting inflammation

7、. The water extract not soluble in alcohol of NMAP also has the same functions but not that strong when compared with that dissolved in alcohol of NMAP.Key wordsNest Macrotermes Annandadei water extractdrug effect土壟大白蟻巢系昆蟲綱等翅目白蟻科土壟大白蟻Macrotermes annandadei(MA)所筑的巢，簡稱白蟻巢，生物學上稱“菌圃”，與雞?菌(Termitomyces)共

8、生，主要分布于廣西、云南1，2。在廣西MA分布廣，資源豐富，廣西壯族地區(qū)民間常有使用MA治療虛咳、虛喘的用藥習慣。為了充分開發(fā)利用MA這一壯藥資源，因此我們對MA進行部分藥效的研究，為臨床應用提供依據(jù)。1材料1.1藥物與試劑土壟大白蟻巢(以下簡稱“白蟻巢”或縮寫MA)，1994年10月采自南寧市郊廣西亞熱帶作物研究所公路旁。藥物制備方法：取干燥的白蟻巢打碎，加水一定量，浸泡2h,直火煎煮3次，第一次煮沸2h，第二、三次各煮沸1h，合并藥液，濾過，濾液濃縮至1?2(藥材?藥液)濃度，分成二等分：一份繼續(xù)濃縮至稠膏，作為MA水提物(A)；另一份加入乙醇至含醇量為50%，攪勻，靜置15h，抽濾，分取

9、濾液和沉淀物，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，作為MA水提醇溶物(B)，沉淀物則作為MA水提醇不溶物(C)；固本咳喘片，浙江臺州制藥廠生產，批號9507170；醋酸強的松片，廣東省制藥工業(yè)公司華南制藥廠生產，批號9606100；氯化乙酰膽堿，上海化學試劑總廠生產，批號910221；磷酸組織胺，中科院上海生化所東風生化技術公司生產，批號930244；氨芐青霉素，華北制藥股份有限公司生產，批號9710203；角叉菜膠，遼寧省藥物研究所生產。1.2動物昆明種系小白鼠(桂醫(yī)動字第1104號)、Wistar種大白鼠(桂醫(yī)動字第1105號)、豚鼠，為普通級，均由廣西中醫(yī)學院實驗動物中心提供。2方法與結果2.1鎮(zhèn)

10、咳作用2.1.1小鼠SO2引咳法3取體重（20±2g）小鼠，兼用。進行預選，取合格小鼠飼養(yǎng)3天后，隨機分成11組，連續(xù)灌胃給藥3天，末次給藥后1h將小鼠放入放置有SO2氣體的干燥器內，刺激15s后，立即取出，觀察小鼠引咳潛伏期及2min內的咳嗽次數(shù),結果見表1。表1白蟻巢對小鼠SO2引咳的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=20組別劑量(g/kg)咳嗽潛伏期(s)咳嗽次數(shù)2min生理鹽水20ml22.05±4

11、.1953.80±16.49白蟻巢A1.50030.30±6.57*23.30±8.91*0.75030.38±16.82*23.38±14.10*0.37522.16±4.5631.05±13.32*白蟻巢B1.50027.00±8.74*25.75±10.52*0.75028.44±11.78*25.88±11.25*0.37524.85±7.3128.69±8.99*白蟻巢C1.50023.17±7.9329.00±6.80*0.75024

12、.90±9.3329.83±9.24*0.37521.25±7.5535.67±9.97*固本咳喘片1.5片27.46±0.91*17.08±7.62*     注：*與生理鹽水組比較，P0.05,*與生理鹽水組比較，P0.01。以下同 結果顯示，白蟻巢水提物和水提醇溶物的高、中劑量組可明顯延長小鼠引咳潛伏期(P0.01或P0.05)，白蟻巢水提物、水提醇溶物和水提醇不溶物的高中、低劑量組均可明顯減少小鼠2min內咳嗽次數(shù)(P0.01)。揭示該藥水提物、水提醇溶物和水提醇不溶物均具有明顯止咳作用

13、，但止咳作用是水提物水提醇溶物水提醇不溶物。2.1.2小白鼠氨水引咳法3取體重(20±2g)小鼠，兼用，進行預選，取合格小鼠，隨機分成12組，給藥方法同2.1.1，于末次給藥后1h,將小鼠置玻璃鐘罩內，進行氨水噴霧刺激20s后即取出，觀察小鼠引咳潛伏期及2min內的咳嗽次數(shù)，結果見表2。表2白蟻巢對小鼠氨水引咳的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/kg)咳嗽潛伏期(s)咳嗽次數(shù)2min生理鹽水20ml

14、35.23±18.0618.39±11.69白蟻巢A1.50053.10±35.036.10±7.40*0.75048.30±23.916.00±2.06*0.37550.00±22.419.33±5.65*白蟻巢B1.50062.50±25.41*7.10±9.21*0.75061.00±21.07*7.78±5.50*0.37547.18±31.8213.91±13.24白蟻巢C1.50056.31±30.3012.23±12.32

15、0.75044.58±29.2217.58±12.800.37535.38±15.5716.63±14.51固本咳喘片3.0片77.88±28.80*4.00±3.39*1.5片42.43±33.3934.29±32.93     結果顯示，白蟻巢水提醇溶物高、中劑量組可明顯延長小鼠引咳潛伏期(P0.01)，白蟻巢水提物高、中、低劑量組和水提醇溶物的高、中劑量組均可減少2min內的咳嗽次數(shù)(P0.01或P0.05)，而水提醇不溶物則不能延長引咳潛伏期，亦不能減少2min內咳嗽

16、次數(shù)(P0.05)。提示該藥水提物及水提醇溶物均有明顯止咳作用，在本實驗條件下，水提醇不溶物無止咳作用。2.2祛痰作用2.2.1小鼠酚紅排泄法4取體重(25±2)g鼠220只隨機分成11組，給藥方法同2.1.1，末次藥前禁食不禁水12h，給藥后30min由背部頸皮下注射0.5%酚紅0.5ml,30min后脫頸椎處死，仰位固定，解剖分離氣管，氣管插管從甲狀軟骨處插入8號針頭0.2cm，用備好的線結扎固定。用1ml注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5ml,注入氣管內，反復連續(xù)推抽3次，灌洗呼吸道重復3次，合并洗出液約1.21.5ml,離心，取上清液，用721型分光光度計比色，所測的OD值

17、通過標準曲線計算酚紅含量，結果見表3。 表3白蟻巢對小鼠氣管段酚紅排泌量的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=20組別劑量(g/kg)氣管酚紅排泌量(gmin)生理鹽水20ml0.77±0.11白蟻巢A1.5001.57±0.37*0.7501.49±0.41*0.3751.34±0.28*白蟻巢B1.5001.43±0.41*0.7500.90±0.280.3750.

18、78±0.09白蟻巢C1.5000.97±0.07*0.7500.81±0.090.3750.74±0.09固本咳喘片0.75片1.10±0.38*     結果顯示，白蟻巢水提物高、中、低劑量組、水提醇溶物和水提醇不溶物的高劑量組均可明顯增加酚紅的排泌量(P0.01)。提示該藥各提取部分均有明顯祛痰作用。2.2.2大鼠毛細管排痰量法4取體重(200±20)g大鼠110只，兼用，隨機分為11組。實驗前禁食不禁水12h,用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于木板上，手術分離氣管，在位于甲狀軟骨

19、下剪開一小口，插入毛細玻管并固定，記錄給藥前2h的正常分泌量，接著灌胃給藥，藥后觀察2h痰液的排泌量，比較給藥前后平均每小時痰的分泌量,結果見表4。 表4白蟻巢對大鼠毛細玻管排痰量的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/kg)排痰量(cm)給藥后/給藥前(%)給藥前給藥后生理鹽水10ml1.53±0.671.60±0.83105白蟻巢A1.5001.56±0.723.16±

20、0.74203*0.7501.53±0.362.70±0.50176*0.3751.52±0.372.17±1.19143白蟻巢B1.5001.54±0.443.04±0.98197*0.7501.50±0.422.18±0.49145*0.3751.52±0.420.80±0.80126白蟻巢C1.5001.54±0.640.68±0.68144*0.7501.55±0.300.73±0.731300.3751.55±0.650.58±

21、;0.58109固本咳喘片1.5片1.53±0.303.13±0.53205*     結果顯示，白蟻巢水提物和水提醇溶物的高、中劑量組、水提醇不溶物的高劑量組均可明顯增加或增加氣管排痰量(P0.01或P0.05)。提示該藥各提取部分均有明顯祛痰作用，但祛痰作用是水提物或水提醇溶物水提醇不溶物。2.3平喘作用2.3.1對豚鼠離體氣管平滑肌的影響32.3.1.1對豚鼠離體氣管平滑肌的直接作用取體重350450g健康豚鼠一批，兼用。將豚鼠處死，取下從喉頭至氣管分叉處整條氣管，放入盛有氧飽和的營養(yǎng)液中，用營養(yǎng)液沖凈管腔內容物。用棉線將一端固

22、定在U型管底端，一端固定于直行厚壁毛細管一端，注射器吸取營養(yǎng)液，將整個系統(tǒng)充滿營養(yǎng)液，排出氣泡，并調節(jié)毛細管液面的高度，將整個裝置放入20ml恒溫的麥氏浴管中(浴溫(37±1)，通氧氣，1520個氣泡/min，在此條件下穩(wěn)定20min，記錄此時的液柱高度作為厚點，然后往浴管加入試藥或空白組給等體積去離子水，觀察記錄5min內液柱變化的毫米數(shù)，然后用營養(yǎng)液沖洗5次，再重復操作34次。結果見表5。 表5白蟻巢對豚鼠離體氣管容積的影響(直接作用)(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/2010032417104319

23、5" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/ml)毛細管液面高度(mm)給藥前給藥后給藥前、后差值去離子水0.566.0±066.00±00白蟻巢A1×10-280.00±5.6272.67±8.74-7.33±2.31*3×10-381.68±3.3178.01±4.56-3.67±0.58*1×10-380.67±3.6578.67±7.37-2.00±1.73*白蟻巢B1×10-263.00±3.135

24、8.33±8.86-4.67±1.53*3×10-363.33±5.9760.00±6.93-3.33±1.53*1×10-264.33±7.4761.33±7.97-3.00±1.73*固定咳喘片4.5×10-369.60±1.0665.93±1.00-3.67±0.58*     注：n表示實驗次數(shù)。 結果顯示，白蟻巢水提物和水提醇溶物高、中、低劑量組均可對離體氣管平滑肌有明顯松馳作用(P0.01)。提示該藥水提

25、物及水提醇溶物均有明顯平喘作用。2.3.1.2對抗組胺收縮豚鼠離體氣管平滑肌的作用動物及氣管的制備方法同2.3.1.1，然后先往浴管加入0.06%磷酸組織胺溶液0.4ml，觀察記錄5min內液柱變化的毫米數(shù)，隨后加入試藥，藥后觀察5min內液柱改變的毫米數(shù)，然后用營養(yǎng)液沖洗5次，每只標本(氣管)重復操作34次,結果見表6。表6白蟻巢對豚鼠離體氣管容積的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/ml)毛細管液面高度(m

26、m)給藥前給藥后給藥前、后差值磷酸組織胺7.5×10-465.00±076.00±011.00±0*去離子水0.5ml76.00±076.33±0.580.33±0.58磷酸組織胺7.5×10-480.92±3.6091.88±4.67+10.96±1.05*白蟻巢A1×10-291.88±4.6783.21±4.62-8.67±1.16*磷酸組織胺7.5×10-478.20±4.8889.20±5.12+11.00

27、±1.10*白蟻巢A1×10-389.20±5.1286.20±5.77-3.00±100*磷酸組織胺7.5×10-473.33±5.7784.00±6.93+10.67±1.16*白蟻巢A1×10-384.00±6.9382.33±5.86-1.67±0.58*磷酸組織胺7.5×10-478.43±4.0089.41±6.04+10.98±1.00*白蟻巢B1×10-289.41±6.0485.08

28、77;6.67-4.33±0.58*磷酸組織胺7.5×10-470.60±6.1181.97±7.10-11.37±1.20*白蟻巢B3×10-381.99±7.1078.66±6.84-3.33±0.58*磷酸組織胺7.5×10-465.33±8.5476.00±7.40+10.67±1.16*白蟻巢B1×10-376.00±7.4073.67±7.02-2.33±0.58*磷酸組織胺7.5×10-473.81&#

29、177;2.0184.87±3.09+11.06±2.00*固本咳喘片1×10-284.87±3.0981.20±3.61-3.67±2.08*     結果顯示，白蟻巢水提物和水提醇溶物高、中、低劑量組均可明顯對抗磷酸組胺收縮氣管平滑肌的作用(P0.01)。提示該藥水提物和水提醇溶物有明顯平喘作用。2.3.2豚鼠噴霧致喘法3，4取體重(160±20)g健康幼年豚鼠一批，兼用，于實驗第一天進行預選，每次1只，將豚鼠置于容量為4升的玻璃鐘罩內，在160毫米汞柱的恒壓下，經玻璃噴頭噴入2%

30、氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺等容積混合液，觀察豚鼠的引喘潛伏期，以120s內為預選合格。次日取預選合格的豚鼠80只，隨機分成8組，連續(xù)灌胃給藥3天。于第3天藥后1h,同上引喘，觀察360s,記錄噴霧開始至癥狀出現(xiàn)作為潛伏期，不跌倒者觀察至360s,結果見表7。 表7白蟻巢對豚鼠噴霧致喘的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/kg)引喘潛伏期(S)生理鹽水10ml29.83±33.18白蟻巢A3.00

31、108.14±37.49*1.5054.60±26.630.7540.40±33.30白蟻巢B3.0076.17±26.27*1.5084.67±43.61*0.7578.50±23.70*固本咳喘片1.8片95.00±33.58*     結果顯示，白蟻巢水提物高劑量組和水提醇溶物高、中、低劑量組可明顯延長豚鼠的引喘潛伏期(P0.01)。提示該藥水提物及水提醇溶物均有明顯平喘作用。2.4抗炎作用2.4.1對角叉菜膠致大白鼠足腫脹的影響3取體重(130±10)g健康大白鼠12

32、0只，隨機分成12組，方法同2.1.1。于末次給藥后1h注射1%角叉菜膠溶液0.1ml足跖致炎。分別于致炎前用容積測量法測量二次整個足跖的容積，取平均值作為致炎前的容積，再分別于致炎后0.5、1、2、4、6、8h各測量一次容積，計算致炎后的腫脹程度。結果見表8。 表8白蟻巢對角叉菜膠所致大鼠足腫的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/cano/201003/20100324171043195" 10 12>±S)n=10組別劑量(g/kg)致炎后不同時間足腫脹程度(%)0.5(h)1.0(h)2.0(h)4.0(

33、h)6.0(h)8.0(h)生理鹽水10ml20.36±10.7231.33±13.2235.47±11.9948.75±9.2561.84±14.5059.45±11.98白蟻巢A3.0017.19±6.7525.12±7.4933.24±13.9347.82±12.8762.89±9.7464.99±10.521.5011.00±2.40*16.30±6.00*23.50±7.60*37.80±11.30*50.50±10

34、.7056.30±9.100.7514.53±5.5224.31±8.4230.95±10.5045.12±15.5256.99±10.6156.36±8.43白蟻巢B3.0012.70±3.32*23.26±7.6232.02±11.9147.30±19.4755.95±19.3957.25±17.861.5014.80±5.601.92±3.00*22.50±6.70*40.10±11.8048.50±10.60

35、*55.60±5.900.7513.81±7.1622.62±8.2734.44±11.0253.18±6.0457.27±9.9858.55±7.18白蟻巢C3.0010.45±4.53*20.02±9.01*27.10±9.3041.97±6.0452.77±6.9956.19±6.271.5011.90±5.00*19.40±4.20*21.80±5.50*29.50±7.40*47.70±6.00*54.40

36、±5.900.7518.87±3.5428.12±6.6537.57±5.8643.80±6.8951.90±8.8453.25±6.40固本咳喘片3.0片15.03±5.7625.04±9.7228.98±10.9036.83±8.83*47.55±5.07*53.16±7.551.5片20.40±6.2824.23±6.4725.97±4.80*46.87±8.4753.37±7.0259.93±13.

37、73     結果顯示，白蟻巢水提物中劑量組能明顯減少或減少角叉菜致炎后0.5、1、2、4h時的足跖腫脹程度(P0.01或P0.05)，水提醇溶物高劑量組對角叉菜致炎后0.5h、中劑量組1、2、6h的足跖腫脹程度有減少或明顯減少作用(P0.05或P0.01)，水提醇不溶物高劑量對角叉菜致炎后0.5、1h、中劑量0.5、1、2、4、6h的足跖腫脹程度均減少或明顯減少(P0.05或P0.01)。提示該藥各提取部位均對急性炎癥有抗炎作用。2.4.2大鼠棉球植入法3取(130±10)g健康大白鼠110只，分為11組。將大鼠用乙醚淺麻醉下腹部去毛消毒，腹部切口，將兩個已稱重的無菌棉球分別植入大白鼠兩側腋窩部皮下。于手術當天開始灌胃給藥，連續(xù)給藥7天，于第8天將大鼠頸椎脫臼處死，取出棉球，在60烘箱干燥12h，稱重，減去原棉球重，即為肉芽腫凈重。結果見表9。 表9白蟻巢對大鼠棉球植入法致炎的影響(<"x (73 bytes)" src="/med/