實(shí)驗(yàn)室菌種管理規(guī)程

1、實(shí)驗(yàn)室菌種管理規(guī)程目的：保證菌種合理、有效地使用和保存，最大限度降低變異率，確保菌 種的溯源性與穩(wěn)定性，保證實(shí)驗(yàn)室和社會(huì)的生物安全。職責(zé)：主管負(fù)責(zé)菌種的出入庫(kù)保管、保存、分發(fā)，組員負(fù)責(zé)菌種的確認(rèn)、 傳代、使用及銷毀。范圍：本規(guī)程適用于實(shí)驗(yàn)室菌種的管理，包括菌種的保存、傳代、使用及 銷毀等。1 菌種的保存工作用菌種的保存工作用菌種采用平板低溫保存法。將菌種接種在適宜的固體培養(yǎng)基上，待菌生長(zhǎng)充分以后，轉(zhuǎn)移至 2 8C冰箱中保存。此法僅用于工作用菌種的 短期保存，并應(yīng)隨時(shí)檢查其污染雜菌和變異等情況，發(fā)現(xiàn)異常情況，經(jīng)應(yīng) 滅活處理后銷毀。保存時(shí)間為 1 周，超過該期限前挑取單菌落重新于瓊脂 平板劃線活化

2、，若菌落活力下降則從-80 C冰箱中取用甘油冷凍管。傳代用菌種的保存采用甘油冷凍管保藏法。甘油冷凍管保存法用無菌接種環(huán)輕輕刮平板上的單菌落并接種至適宜的液體培養(yǎng)內(nèi)，置 于適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，菌液充分振蕩后取適宜體積加入到已滅菌的冷 凍管內(nèi)，再加入等體積的無菌甘油（濃度 40%），即為 20%甘油菌懸液，輕 輕振搖，使內(nèi)容物充分混合，在-80 C冷凍條件下保存，保存期限為 3年。 每個(gè)菌株保存至少 30 個(gè)無菌冷凍管。使用時(shí)，取出一支放至室溫，接種增 菌培養(yǎng)或接種至瓊脂平板復(fù)蘇，挑取純菌落傳代或工作用。2 菌種的傳代工作用菌種的傳代當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于 5 時(shí)，在規(guī)定保存期限內(nèi)，可直接用上一代

3、工 作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種。取在冰箱 28 C保存的工作用菌種用普 通瓊脂平板傳代，并將新傳代的培養(yǎng)物替代原有的菌種，作為工作用菌種。 也可取用“甘油冷凍管保藏法”保存的菌種，進(jìn)行復(fù)蘇，直接作為工作用 菌種。菌種每 1 周傳代一次，當(dāng)超過 5 代，須用“甘油冷凍管保藏法”保 存的原始菌種傳代。傳代用菌種的傳代首先劃線接種確認(rèn)，根據(jù)日常檢驗(yàn)工作的需要量，挑取純菌落轉(zhuǎn)接平 板，作為工作用菌種；同時(shí)，結(jié)合菌種的代數(shù)和最長(zhǎng)保存期限，挑取純菌 落制成菌懸液，按“”的方法制備甘油冷凍管數(shù)支，作為傳代用菌種。傳代時(shí)注意事項(xiàng)無菌操作，使菌株不死亡，不污染、不丟失。同時(shí)實(shí)驗(yàn)人員也要采取 有效的預(yù)防措施進(jìn)行

4、自我保護(hù)，如工作時(shí)必須穿工作服，佩帶無菌手套， 實(shí)驗(yàn)完成以后消毒實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的區(qū)域、實(shí)驗(yàn)儀器和器具。如發(fā)生意外，如菌 種泄漏或人員受傷，應(yīng)立即向主管報(bào)告以便及時(shí)進(jìn)行處理。3 菌種的保管實(shí)驗(yàn)室全部菌種都應(yīng)由菌種負(fù)責(zé)人記錄在冊(cè)，并輸入電腦以電子版形式存 檔，以便查找。菌種上應(yīng)貼上明顯的標(biāo)簽，標(biāo)明名稱、培養(yǎng)基、保種人、 日期、編號(hào)等。菌種設(shè)專人加鎖保管，并對(duì)所保存的菌種建立菌種保存、 領(lǐng)用登記臺(tái)賬（附表 3）。菌種的定期檢查 在菌種的保存期間，應(yīng)每天檢查保存菌種冰箱的溫度、菌種管的塞子 是否松動(dòng)或生霉，如有異常應(yīng)及時(shí)處理。所保管的菌種，不能隨意轉(zhuǎn)讓其他單位和個(gè)人，需要時(shí)應(yīng)有單位證明和批 準(zhǔn)手續(xù)以及李愛科

5、組長(zhǎng)簽字方可供應(yīng)。4 菌種的領(lǐng)用與使用 實(shí)驗(yàn)室人員根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，需到主管領(lǐng)取工作用菌種或傳代用菌種，同時(shí) 填寫菌種領(lǐng)用登記臺(tái)賬相關(guān)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)室人員從主管領(lǐng)取工作用菌種或傳代用菌種，用于日常檢驗(yàn)或驗(yàn)證試 驗(yàn)，使用后及時(shí)填寫菌種使用登記臺(tái)賬 （附表 6），以便追蹤菌種使用歷 史。5 菌種（廢棄）的銷毀下列情況的菌種或培養(yǎng)物或被污染的器具等，必須采用121 C、45分鐘濕熱滅活處理：新一代菌種制備成功后的上一代菌種；使用完后的菌種 和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物；超過有效期的菌種；凡被污染、變異、 可疑等異常情況菌種；其他應(yīng)廢棄的菌種。6 附則附表 1 ：檢定菌接收記錄附表 2：檢定菌種傳代、分離記錄

6、附表3:檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺(tái)賬附表4:檢定菌種觀察記錄附表5:檢定菌種鑒定記錄附表6:檢定菌種使用登記臺(tái)賬附表7:廢棄菌種（物品）銷毀處理記錄菌種資源詳細(xì)信息（密）此項(xiàng)信息不對(duì)外公布，保存核心成員手中。，隨時(shí)補(bǔ)充，菌種登記：編號(hào)+詳細(xì)名稱+來源+特性+動(dòng)物實(shí)驗(yàn)+留照片附表1:菌種接收記錄記錄名稱菌種接收記錄代碼頁(yè)次1共頁(yè)名稱及編號(hào)數(shù)量代數(shù)來源接收日期接收人檢查情況保存條件附表2:菌種傳代、分離、保存記錄記錄名稱菌種傳代、分離記錄代碼頁(yè)次1共1頁(yè)名稱及編號(hào)購(gòu)進(jìn)（領(lǐng)?。┤掌谀?月曰來源傳代前菌種保存方法傳代用培養(yǎng)基傳代日期傳代用 菌種編號(hào)總數(shù)量傳代用菌種工作用菌種操作人數(shù)量編號(hào)有效期保存 方法數(shù)量編號(hào)有效期保存 方法分離與純 化過程純度 檢查結(jié)果操作人：復(fù)核人：附表3:菌種使用登記臺(tái)賬記錄名稱菌種保存、領(lǐng)用登記臺(tái)賬代碼頁(yè)次1共1頁(yè)收到日期名稱及編號(hào)數(shù)量接收人移交人領(lǐng)用日期用途數(shù)量發(fā)放人領(lǐng)用人附表4:菌種觀察記錄記錄名稱菌種觀察記錄代碼頁(yè)次1共1頁(yè)日期冰箱溫 度C)塞子是否松動(dòng)是否霉變處理措施觀察人附表5:菌種鑒定記錄記錄名稱菌種鑒疋記錄代碼頁(yè)次1共1頁(yè)菌種名稱及編號(hào)鑒定原因開始鑒定日期鑒定人復(fù)核人年 月曰鑒定項(xiàng)目菌落形態(tài)革蘭染色顯微鏡下形態(tài)典型生化反應(yīng)特征鑒定結(jié)論日期：年 月曰附表6:菌種使用登記臺(tái)賬記錄名稱菌種使用登記臺(tái)賬代碼頁(yè)次1共1頁(yè)領(lǐng)用日期名稱