菌種選育理論與技術(shù)

1、第二章第二章 菌種選育理論與技術(shù)菌種選育理論與技術(shù)微生物工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)中，決定生產(chǎn)水平高低的主要有微生物工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)中，決定生產(chǎn)水平高低的主要有三個方面：三個方面：菌種選育（菌種選育（strain improving）、發(fā)酵工藝、發(fā)酵工藝（fermentation techniques）和分離提取工藝）和分離提取工藝（separation and extraction techniques）菌種選育的最初目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)菌種選育的最初目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)生產(chǎn)要求。生產(chǎn)要求。開發(fā)新的抗生素品種。開發(fā)新的抗生素品種。菌種選育是一門應用科學技術(shù)菌種選育是一門應用科學

2、技術(shù)理論基礎：微生物學、微生物遺傳學、生物化學、理論基礎：微生物學、微生物遺傳學、生物化學、分子生物學、基因工程等。分子生物學、基因工程等。目的目的簡化生產(chǎn)工藝條件，縮短生產(chǎn)周期簡化生產(chǎn)工藝條件，縮短生產(chǎn)周期 研究抗生素生物合成調(diào)控的機制研究抗生素生物合成調(diào)控的機制分析抗生素生物合成途徑分析抗生素生物合成途徑獲得帶遺傳標記的菌株獲得帶遺傳標記的菌株了解菌種遺傳背景了解菌種遺傳背景改變產(chǎn)品組分、改進質(zhì)量條件改變產(chǎn)品組分、改進質(zhì)量條件抵抗不良培養(yǎng)條件抵抗不良培養(yǎng)條件適應新的原材料適應新的原材料提高產(chǎn)量提高產(chǎn)量提供分子遺傳學研究材料提供分子遺傳學研究材料產(chǎn)生新的生物活性物質(zhì)產(chǎn)生新的生物活性物質(zhì)青霉素

3、生產(chǎn)菌種的選育目前工業(yè)發(fā)酵水平目前工業(yè)發(fā)酵水平經(jīng)誘變經(jīng)誘變85000 UmlWisQ176，900 Uml產(chǎn)黃青霉，產(chǎn)黃青霉，20 Uml點青霉，點青霉，2 Uml1943年，發(fā)霉的甜瓜年，發(fā)霉的甜瓜1928年，年，F(xiàn)leming菌種選育的基本方法菌種選育的基本方法根據(jù)菌種根據(jù)菌種自然變異自然變異而進行而進行的的自然選育自然選育。用用人工方法人工方法引起菌種變異或形成新的雜種，再按引起菌種變異或形成新的雜種，再按照照工業(yè)要求工業(yè)要求進行篩選來獲得進行篩選來獲得新的變種或雜種新的變種或雜種。 包括誘變育種，雜交育種，原生質(zhì)體育種，包括誘變育種，雜交育種，原生質(zhì)體育種，基因工程育種等?；蚬こ逃N

4、等。第一節(jié)第一節(jié) 自然選育自然選育自然選育（自然選育（natural screeningnatural screening） 是是指利用微生物在一定條件下產(chǎn)生自發(fā)突指利用微生物在一定條件下產(chǎn)生自發(fā)突變的原理，通過分離、篩選排除衰退型菌株，從變的原理，通過分離、篩選排除衰退型菌株，從中選出維持或高于原有生產(chǎn)菌株的過程，以達到中選出維持或高于原有生產(chǎn)菌株的過程，以達到穩(wěn)定或提高生產(chǎn)的目的。穩(wěn)定或提高生產(chǎn)的目的。自然選育的目的自然選育的目的 淘汰淘汰衰退菌種，保存優(yōu)良菌株，純化菌種，衰退菌種，保存優(yōu)良菌株，純化菌種，防止菌種衰退，穩(wěn)定生產(chǎn)，提高發(fā)酵產(chǎn)量。防止菌種衰退，穩(wěn)定生產(chǎn)，提高發(fā)酵產(chǎn)量。一、菌種

5、衰退的原因一、菌種衰退的原因菌種遺傳特性菌種遺傳特性的改變的改變經(jīng)誘變劑處理后的退化變異經(jīng)誘變劑處理后的退化變異 菌種生理狀況的改變菌種生理狀況的改變 （培養(yǎng)條件）（培養(yǎng)條件） 導致衰退可能的原因：沙土管長期保藏、連續(xù)傳代、導致衰退可能的原因：沙土管長期保藏、連續(xù)傳代、新陳代謝產(chǎn)生的誘變物質(zhì)、多因素低劑量誘變效應、互新陳代謝產(chǎn)生的誘變物質(zhì)、多因素低劑量誘變效應、互變異構(gòu)現(xiàn)象等。變異構(gòu)現(xiàn)象等。二、自然選育的一般過程生產(chǎn)菌種斜面制備單孢子懸浮制備單孢子懸浮液液分離出單菌落分離出單菌落斜面種子（初篩斜面種子（初篩斜面）斜面）搖瓶初篩搖瓶初篩高產(chǎn)菌株高產(chǎn)菌株沙土管菌株沙土管菌株斜面種子斜面種子搖瓶復篩

6、搖瓶復篩高產(chǎn)純化菌高產(chǎn)純化菌株株放大試驗放大試驗進一步選育或保藏進一步選育或保藏1、單孢子懸浮液的制備、單孢子懸浮液的制備定量稀釋后制成定量稀釋后制成50200個單細胞個單細胞ml的菌懸的菌懸液。液。2、分離及單菌落培養(yǎng)、分離及單菌落培養(yǎng) 根據(jù)計數(shù)結(jié)果，按絲狀真菌、放線菌菌落大根據(jù)計數(shù)結(jié)果，按絲狀真菌、放線菌菌落大小不同，分離量以小不同，分離量以520個菌落平皿為宜。個菌落平皿為宜。 3、篩選、篩選將分離培養(yǎng)后的各型單菌落，接斜面培養(yǎng)，將分離培養(yǎng)后的各型單菌落，接斜面培養(yǎng)，成熟后接入發(fā)酵瓶，測定發(fā)酵單位的過程稱為篩選。成熟后接入發(fā)酵瓶，測定發(fā)酵單位的過程稱為篩選。它分初篩、復篩兩個過程。它分初

7、篩、復篩兩個過程。 優(yōu)點優(yōu)點簡單易行簡單易行缺點缺點效率低，進展慢，難以獲得高產(chǎn)突變株效率低，進展慢，難以獲得高產(chǎn)突變株以微生物的自然變異為基礎的生產(chǎn)選種幾率并不以微生物的自然變異為基礎的生產(chǎn)選種幾率并不是很高，一個基因的自然突變頻率僅是很高，一個基因的自然突變頻率僅1061010目的目的純化、復壯菌種純化、復壯菌種第二節(jié)第二節(jié) 誘變育種誘變育種誘變育種（誘變育種（mutation breeding）是利用物理或化學）是利用物理或化學誘變劑處理均勻分散的微生物細胞群體，促進其誘變劑處理均勻分散的微生物細胞群體，促進其突變率大幅提高，然后采用簡便、高效的篩選方突變率大幅提高，然后采用簡便、高效的

8、篩選方法，從中選出少數(shù)具有優(yōu)良性狀的突變菌株。法，從中選出少數(shù)具有優(yōu)良性狀的突變菌株。優(yōu)點：速度快，收效大，方法簡便。優(yōu)點：速度快，收效大，方法簡便。缺點：誘發(fā)突變?nèi)狈Χㄏ蛐?，工作量大。缺點：誘發(fā)突變?nèi)狈Χㄏ蛐?，工作量大。誘變育種工作主要包括出發(fā)菌株的選擇、誘變處誘變育種工作主要包括出發(fā)菌株的選擇、誘變處理和篩選突變株三個部分。理和篩選突變株三個部分。出發(fā)菌種(沙土管或冷凍管) 原種特性考察 斜面 或肉湯培養(yǎng) 24h 單孢子懸液 細菌懸液 誘變處理 處理前后的孢子液或細菌懸液作活菌計數(shù)并統(tǒng)計其存活率 稀釋涂布平皿 觀察單菌落形態(tài)并統(tǒng)計其形態(tài)變異率 挑取單菌落傳種斜面 搖瓶初篩 對照組 挑出高產(chǎn)

9、斜面 傳種斜面 搖瓶復篩(重復 35 次) 對照組 挑出高產(chǎn)菌株作穩(wěn)定性試驗和菌種特性考察 放大中試考查，保藏菌種 大型投產(chǎn)試驗 出發(fā)菌株（沙土管或冷凍管）誘誘變變育育種種的的一一般般步步驟驟一、誘變劑的種類一、誘變劑的種類物理誘變劑：主要包括物理輻射中的各種射線物理誘變劑：主要包括物理輻射中的各種射線化學誘變劑：與化學誘變劑：與DNA發(fā)生作用、改變其結(jié)構(gòu)，并發(fā)生作用、改變其結(jié)構(gòu)，并引起遺傳變異的化學物質(zhì)。引起遺傳變異的化學物質(zhì)。生物誘變劑：一些能引起生物誘變劑：一些能引起DNADNA結(jié)構(gòu)改變，從而造成結(jié)構(gòu)改變，從而造成突變效應的生物體或生物分子。突變效應的生物體或生物分子。 超超凈工作臺凈工

10、作臺小型小型X X射線衍射儀射線衍射儀CoCo6060射線機射線機二、誘變育種的過程二、誘變育種的過程前突變：誘變劑所造成的前突變：誘變劑所造成的DNA分子的某一位置的分子的某一位置的結(jié)構(gòu)改變。結(jié)構(gòu)改變。 突變：由于染色體或基因本身的變化而產(chǎn)生的遺突變：由于染色體或基因本身的變化而產(chǎn)生的遺傳性狀的變異。傳性狀的變異。表型延遲：表型改變落后于基因型改變的現(xiàn)象表型延遲：表型改變落后于基因型改變的現(xiàn)象。 （一）誘變劑接觸（一）誘變劑接觸DNADNA分子前分子前1 1、細胞對誘變劑的透性將影響誘變效果。、細胞對誘變劑的透性將影響誘變效果。2 2、細胞質(zhì)的某些組分和某些酶可和誘變劑相互作、細胞質(zhì)的某些組

11、分和某些酶可和誘變劑相互作用而影響誘變效果。用而影響誘變效果。3 3、與基因所處的狀態(tài)有關(guān)，而基因的狀態(tài)又和培、與基因所處的狀態(tài)有關(guān)，而基因的狀態(tài)又和培養(yǎng)條件有關(guān)。養(yǎng)條件有關(guān)。 （二）（二）DNA損傷修復損傷修復光修復作用（光復活作用）光修復作用（光復活作用）切補修復切補修復 四種酶的作用：核酸內(nèi)切酶四種酶的作用：核酸內(nèi)切酶 、核酸外、核酸外 切酶切酶 、DNA多聚多聚酶酶 、DNA連接酶連接酶重組修復重組修復SOS修復系統(tǒng)修復系統(tǒng)DNA聚合酶的矯正作用聚合酶的矯正作用（三）前突變到突變的過程（三）前突變到突變的過程校正差錯：光復活作用、切補修復和校正差錯：光復活作用、切補修復和DNA多聚酶校

12、正多聚酶校正作用作用 引起差錯：重組修復和引起差錯：重組修復和SOS修復系統(tǒng)修復系統(tǒng) 一切影響這些修復系統(tǒng)中的酶活性的因素都能影響由一切影響這些修復系統(tǒng)中的酶活性的因素都能影響由前突變向突變轉(zhuǎn)變這一過程前突變向突變轉(zhuǎn)變這一過程 。誘變前后的處理可影響誘變的效果誘變前后的處理可影響誘變的效果 ：1、通過影響與、通過影響與DNA修復作用有關(guān)的酶的活性而影響修復作用有關(guān)的酶的活性而影響誘變的效果；誘變的效果；2、通過使誘變的目的基因處于活化狀態(tài)、通過使誘變的目的基因處于活化狀態(tài)(復制或轉(zhuǎn)錄復制或轉(zhuǎn)錄狀態(tài)狀態(tài))，使之更容易被誘變劑所作用，從而影響目的，使之更容易被誘變劑所作用，從而影響目的基因的突變率

13、。基因的突變率。 ( (四四) )從突變到突變型從突變到突變型1 1、分離性遲延、分離性遲延是經(jīng)誘變處理后，細胞中的基因處于不純的狀是經(jīng)誘變處理后，細胞中的基因處于不純的狀態(tài)態(tài)( (野生型基因和突變型基因并存于同一細胞中野生型基因和突變型基因并存于同一細胞中) )，突，突變型基因由于屬于隱性基因而暫時得不到表達，需經(jīng)變型基因由于屬于隱性基因而暫時得不到表達，需經(jīng)過復制、分離，在細胞中處于純的狀態(tài)過復制、分離，在細胞中處于純的狀態(tài)( (一細胞中只有一細胞中只有突變型基因，沒有野生型基因突變型基因，沒有野生型基因) )時，其性狀才得以表達。時，其性狀才得以表達。2 2、生理性遲延、生理性遲延突變基

14、因由雜合狀態(tài)變?yōu)榧兒蠣顟B(tài)時，還不一突變基因由雜合狀態(tài)變?yōu)榧兒蠣顟B(tài)時，還不一定出現(xiàn)突變表型，新的表型必須等到原有基因的產(chǎn)物定出現(xiàn)突變表型，新的表型必須等到原有基因的產(chǎn)物稀釋到某一程度后才能表現(xiàn)出來。稀釋到某一程度后才能表現(xiàn)出來。 三、誘變育種的步驟三、誘變育種的步驟q出發(fā)菌株的選擇出發(fā)菌株的選擇q處理菌懸液的制備處理菌懸液的制備q誘變處理誘變處理q中間培養(yǎng)中間培養(yǎng)q突變株的分離和篩選突變株的分離和篩選四、突變株的篩選四、突變株的篩選(一一)隨機篩選隨機篩選(二二)理性化篩選（定向篩選）理性化篩選（定向篩選）運用遺傳學、生物化學的原理，根據(jù)產(chǎn)物已運用遺傳學、生物化學的原理，根據(jù)產(chǎn)物已知的或可能的生

15、物合成途徑、代謝調(diào)控機制和產(chǎn)知的或可能的生物合成途徑、代謝調(diào)控機制和產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)來進行設計和采用一些篩選方法，以物分子結(jié)構(gòu)來進行設計和采用一些篩選方法，以打破微生物原有的代謝調(diào)控機制，獲得能大量形打破微生物原有的代謝調(diào)控機制，獲得能大量形成產(chǎn)物的高產(chǎn)突變株。成產(chǎn)物的高產(chǎn)突變株。1 1、 初級代謝產(chǎn)物高產(chǎn)菌株的篩選初級代謝產(chǎn)物高產(chǎn)菌株的篩選普遍存在著反饋抑制和反饋阻遏，要打破反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)，普遍存在著反饋抑制和反饋阻遏，要打破反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)，可從兩個方面著手：可從兩個方面著手： (1)(1) 篩選篩選細胞膜透性改變的突變株細胞膜透性改變的突變株例如，谷氨酸發(fā)酵選育的高產(chǎn)菌株為谷氨酸棒桿菌例如，谷氨酸

16、發(fā)酵選育的高產(chǎn)菌株為谷氨酸棒桿菌的生物素營養(yǎng)缺陷型。的生物素營養(yǎng)缺陷型。（2 2）篩選）篩選營養(yǎng)缺陷型營養(yǎng)缺陷型突變株突變株 營養(yǎng)缺陷型營養(yǎng)缺陷型: :誘變產(chǎn)生的缺乏合成某些營養(yǎng)物誘變產(chǎn)生的缺乏合成某些營養(yǎng)物質(zhì)的能力，須在基本培養(yǎng)基中加入相應的營質(zhì)的能力，須在基本培養(yǎng)基中加入相應的營養(yǎng)成分才能正常生長的變異株。養(yǎng)成分才能正常生長的變異株。 野生型野生型: :與營養(yǎng)缺陷型對應的是野生型。與營養(yǎng)缺陷型對應的是野生型。 滲漏缺陷型滲漏缺陷型: :是遺傳性障礙不完全的營養(yǎng)缺陷是遺傳性障礙不完全的營養(yǎng)缺陷型，突變使某一種酶的活性下降而不是完全型，突變使某一種酶的活性下降而不是完全喪失，能少量地合成某一代

17、謝產(chǎn)物。喪失，能少量地合成某一代謝產(chǎn)物。(2)(2)篩選結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株篩選結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株結(jié)構(gòu)類似物結(jié)構(gòu)類似物：在化學和空間結(jié)構(gòu)上和代謝的中間物（終：在化學和空間結(jié)構(gòu)上和代謝的中間物（終產(chǎn)物）相似，因而在代謝調(diào)節(jié)方面可以代替代謝中間物產(chǎn)物）相似，因而在代謝調(diào)節(jié)方面可以代替代謝中間物（終產(chǎn)物）的功能，但細胞不能以其作為自身的營養(yǎng)（終產(chǎn)物）的功能，但細胞不能以其作為自身的營養(yǎng)物物質(zhì)質(zhì)2 2、次級代謝產(chǎn)物、次級代謝產(chǎn)物( (主要是抗生素主要是抗生素) )高產(chǎn)菌株的篩選高產(chǎn)菌株的篩選利用營養(yǎng)缺陷型篩選利用營養(yǎng)缺陷型篩選 篩選負變株或零變株的回復突變株篩選負變株或零變株的回復突變株 篩選去磷酸

18、鹽調(diào)節(jié)突變株篩選去磷酸鹽調(diào)節(jié)突變株 篩選去碳源分解代謝調(diào)節(jié)突變株篩選去碳源分解代謝調(diào)節(jié)突變株篩選氨基酸結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株篩選氨基酸結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株 篩選二價金屬離子抗性突變株篩選二價金屬離子抗性突變株 篩選前體或前體結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株篩選前體或前體結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株篩選自身所產(chǎn)的抗生素抗性突變株篩選自身所產(chǎn)的抗生素抗性突變株1 1、抗性篩選、抗性篩選抗性突變株的篩選相對比較容易，只要有抗性突變株的篩選相對比較容易，只要有10106 6頻率頻率的突變體存在，就容易篩選出來的突變體存在，就容易篩選出來抗性突變株的篩選常用的有抗性突變株的篩選常用的有一次性篩選法和階梯性一次性篩選法和階梯性

19、篩選法篩選法兩種手段兩種手段（三）理性化篩選的方法（三）理性化篩選的方法（1 1）一次性篩選法）一次性篩選法一次性篩選法就是指在對出發(fā)菌株完全致死的環(huán)境一次性篩選法就是指在對出發(fā)菌株完全致死的環(huán)境中，一次性篩選出少量抗性變異株中，一次性篩選出少量抗性變異株u 抗噬菌體菌株篩選抗噬菌體菌株篩選u耐高溫菌株篩選耐高溫菌株篩選u耐高酒精度、高滲透壓耐高酒精度、高滲透壓的菌株也可分別在高濃度的菌株也可分別在高濃度酒精或加蔗糖等造成的高酒精或加蔗糖等造成的高滲環(huán)境下一次性篩選獲得滲環(huán)境下一次性篩選獲得（2 2）階梯性篩選法）階梯性篩選法無法知道微生物究竟能耐受多少高濃度的藥物無法知道微生物究竟能耐受多少

20、高濃度的藥物藥物的抗性變異也是逐步發(fā)展的，時間上是漸進的藥物的抗性變異也是逐步發(fā)展的，時間上是漸進的 梯度平板法梯度平板法 紙片擴散法紙片擴散法吡哆醇與代謝拮抗物異煙肼的分子結(jié)構(gòu)吡哆醇與代謝拮抗物異煙肼的分子結(jié)構(gòu) 梯度平板法也常用于抗代謝拮抗物突變株的篩梯度平板法也常用于抗代謝拮抗物突變株的篩選，以提高相應代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。選，以提高相應代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。如：吡哆醇高產(chǎn)菌株篩選如：吡哆醇高產(chǎn)菌株篩選u 梯度平板法梯度平板法(Gradient plate)(Gradient plate) 紙紙片擴散法與梯度平板法片擴散法與梯度平板法的原理類似，用打孔器將較的原理類似，用打孔器將較厚的濾紙打成小圓片，

21、并使厚的濾紙打成小圓片，并使紙片吸收一定濃度的藥物，紙片吸收一定濃度的藥物，經(jīng)干燥或不經(jīng)干燥，放入涂經(jīng)干燥或不經(jīng)干燥，放入涂布了菌懸液的平板上，一般布了菌懸液的平板上，一般9 9厘米的培養(yǎng)皿中等距放置厘米的培養(yǎng)皿中等距放置三片為宜。經(jīng)培養(yǎng)后觀察圍三片為宜。經(jīng)培養(yǎng)后觀察圍繞紙片的抑菌圈，抑菌圈內(nèi)繞紙片的抑菌圈，抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)的可能就是抗性菌。出現(xiàn)的可能就是抗性菌。u 紙片擴散法 階梯性篩選法的缺點 階梯性篩選法只有在抑制區(qū)域才能挑選抗性菌，而低濃度區(qū)域面積較大，優(yōu)良的抗性突變株若被分散在低濃度區(qū)域或遠離紙片的區(qū)域，則可能沒有被檢出，因此，漏檢的幾率較大。 2 2、營養(yǎng)缺陷型突變株篩選、營養(yǎng)缺陷型突

22、變株篩選基本培養(yǎng)基（基本培養(yǎng)基（MMMM，minimal mediumminimal medium）：）：能滿足某一菌能滿足某一菌種的野生型或原養(yǎng)型菌株營養(yǎng)要求的最低成分的合成培種的野生型或原養(yǎng)型菌株營養(yǎng)要求的最低成分的合成培養(yǎng)基養(yǎng)基補充培養(yǎng)基（補充培養(yǎng)基（SMSM，supplemental mediumsupplemental medium）：）：在基本在基本培養(yǎng)基中有針對性地補加某一種或幾種營養(yǎng)成分，以滿培養(yǎng)基中有針對性地補加某一種或幾種營養(yǎng)成分，以滿足相應的營養(yǎng)缺陷型菌株生長需要（其他營養(yǎng)缺陷型仍足相應的營養(yǎng)缺陷型菌株生長需要（其他營養(yǎng)缺陷型仍不能生長）的培養(yǎng)基不能生長）的培養(yǎng)基完全培養(yǎng)

23、基（完全培養(yǎng)基（CMCM，complete mediumcomplete medium）：）：可滿足該菌各可滿足該菌各種營養(yǎng)缺陷型菌株營養(yǎng)需要的天然或半合成培養(yǎng)基種營養(yǎng)缺陷型菌株營養(yǎng)需要的天然或半合成培養(yǎng)基營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選方法營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選方法1)1)淘汰野生型淘汰野生型p抗生素法：抗生素法：將誘變處理液在將誘變處理液在MMMM中培養(yǎng)短時讓野生型處于活化階段，中培養(yǎng)短時讓野生型處于活化階段，而缺陷型而缺陷型處于休眠狀態(tài)處于休眠狀態(tài)且在培養(yǎng)基中加入一定量的抗生素，結(jié)果活化狀態(tài)的野生型就被且在培養(yǎng)基中加入一定量的抗生素，結(jié)果活化狀態(tài)的野生型就被殺死，保存了缺陷型殺死，保存了缺陷型p菌

24、絲過濾法：菌絲過濾法：對于霉菌，因孢子生長后會長出菌絲體，就可用濾紙過濾法將菌對于霉菌，因孢子生長后會長出菌絲體，就可用濾紙過濾法將菌絲濾去，而缺陷型孢子卻因未發(fā)芽而保留在處理液中絲濾去，而缺陷型孢子卻因未發(fā)芽而保留在處理液中2)2)檢出缺陷型檢出缺陷型原理：在固體基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基上，生長情況完全原理：在固體基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基上，生長情況完全不同，缺陷型在不同，缺陷型在CMCM上生長良好，而在上生長良好，而在MMMM上則不生長，野生上則不生長，野生型都能生長型都能生長也稱任意法也稱任意法用接種針或牙簽將用接種針或牙簽將CMCM上長出的菌落在上長出的菌落在MMMM和和CMCM兩副平板上

25、兩副平板上接種，依次在相應位置點種，然后一起培養(yǎng)，觀察其生接種，依次在相應位置點種，然后一起培養(yǎng)，觀察其生長情況長情況此法結(jié)果明確，但工作量大此法結(jié)果明確，但工作量大 點種法點種法先在培養(yǎng)皿上倒一層基本瓊脂培養(yǎng)基，凝固后涂上一層先在培養(yǎng)皿上倒一層基本瓊脂培養(yǎng)基，凝固后涂上一層含菌的含菌的MMMM，凝固后再倒一薄層，凝固后再倒一薄層MMMM瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h24h，將出現(xiàn)的菌落標記，然后倒上一層將出現(xiàn)的菌落標記，然后倒上一層CMCM瓊脂培養(yǎng)基，再培瓊脂培養(yǎng)基，再培養(yǎng)。這時第二批長出的菌落就可能是缺陷型養(yǎng)。這時第二批長出的菌落就可能是缺陷型此法缺點是，結(jié)果有時不明確，而且將缺陷

26、型菌落從夾此法缺點是，結(jié)果有時不明確，而且將缺陷型菌落從夾層中挑出并不很容易層中挑出并不很容易 夾層法夾層法3)3)營養(yǎng)缺陷型生長譜的確定營養(yǎng)缺陷型生長譜的確定方法二方法二以不同組合的營養(yǎng)混合物與融化涼至以不同組合的營養(yǎng)混合物與融化涼至5050的的MMMM培養(yǎng)基混合鋪培養(yǎng)基混合鋪成平皿，然后在這些平皿上劃線接種各個缺陷型菌株于各相成平皿，然后在這些平皿上劃線接種各個缺陷型菌株于各相應位置，培養(yǎng)后根據(jù)在這些組合長出可推知其營養(yǎng)因子應位置，培養(yǎng)后根據(jù)在這些組合長出可推知其營養(yǎng)因子在在5 56 6個平皿上可測個平皿上可測2020株菌以上。株菌以上。第三節(jié)第三節(jié) 雜交育種雜交育種雜交育種是指將兩個基因

27、型不同的菌株經(jīng)吻合雜交育種是指將兩個基因型不同的菌株經(jīng)吻合(或接合或接合)使遺傳物質(zhì)使遺傳物質(zhì)重新組合，從中分離和篩選具有新性狀的菌株。重新組合，從中分離和篩選具有新性狀的菌株。雜交育種的目的在于：雜交育種的目的在于：（1）通過雜交使不同菌株的遺傳物質(zhì)進行交換和重新組合，從而改變）通過雜交使不同菌株的遺傳物質(zhì)進行交換和重新組合，從而改變原有菌株的遺傳物質(zhì)基礎，獲得雜種菌株原有菌株的遺傳物質(zhì)基礎，獲得雜種菌株(重組體重組體)；（2）可以通過雜交把不同菌株的優(yōu)良生產(chǎn)性能集中于重組體中，克服）可以通過雜交把不同菌株的優(yōu)良生產(chǎn)性能集中于重組體中，克服長期用誘變劑處理造成的菌株生活力下降等缺陷；長期用誘變劑處理造成的菌