艾滋病抗體檢測技術(shù)(免疫印跡法)及質(zhì)量控制(黎俊宏)

1、南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院艾滋病抗體檢測技術(shù)（免疫印跡法）及質(zhì)量控制黎俊宏黎俊宏檢測檢驗(yàn)中心檢測檢驗(yàn)中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室常 州 市 疾 病 預(yù) 防 控 制 中 心常 州 市 疾 病 預(yù) 防 控 制 中 心C h a n g z h o u C e n t e r f o r D i s e a s e C o n t r o l a n d P r e v e n t i o n全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）年修訂版）第六章第六章 艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略 我國自上世紀(jì)我國自上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)第一

2、例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年增長趨年代發(fā)現(xiàn)第一例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年增長趨勢。勢。 4 臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報告臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報告 4.1 使用抗體檢測試劑的檢測流程：使用抗體檢測試劑的檢測流程：4.3 4.3 補(bǔ)充試驗(yàn)檢測策略補(bǔ)充試驗(yàn)檢測策略補(bǔ)充試驗(yàn)分為補(bǔ)充試驗(yàn)分為抗體確證抗體確證試驗(yàn)和試驗(yàn)和HIV-1核酸核酸試驗(yàn)?？贵w確證試驗(yàn)試驗(yàn)?？贵w確證試驗(yàn)包括免疫印跡試劑（包括免疫印跡試劑（WB）和條）和條帶帶/線性免疫試驗(yàn)（線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）， 特定條件下的替代檢測（三特定條件下的替代檢測（三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)種酶聯(lián)免疫

3、試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或者酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)或者酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)），免），免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)。疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)。HIV-1核酸試驗(yàn)包括定性和定量試驗(yàn)。核酸試驗(yàn)包括定性和定量試驗(yàn)。 *兩種兩種試劑可試劑可以是原以是原有試劑有試劑加另一加另一種試劑，種試劑， 也可以也可以是兩種是兩種不同試不同試劑。劑。全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）年修訂版）第六章第六章 艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）年修訂版）第六章第六章 艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略H

4、IV確證試驗(yàn)的方法確證試驗(yàn)的方法 2 3 1 4LIA 條帶免疫試驗(yàn)條帶免疫試驗(yàn)RIPA 放射免疫沉淀試驗(yàn)放射免疫沉淀試驗(yàn)IFA 免疫熒光試驗(yàn)免疫熒光試驗(yàn)WB 免疫印跡試驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)HIV抗體抗體WB試驗(yàn)具試驗(yàn)具有很高的敏感性和有很高的敏感性和特異性，是國內(nèi)特異性，是國內(nèi)HIV抗體確證的金標(biāo)準(zhǔn)?？贵w確證的金標(biāo)準(zhǔn)。RIBA/LIA 條線條線/線性免疫試驗(yàn)線性免疫試驗(yàn)Western Blot與與Southern或或Northern雜交方法雜交方法類似，但類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳電泳 ，被檢測物是蛋白質(zhì)，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針探針”是抗體，

5、是抗體，“顯色顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如NC膜）上，固相載膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目

6、的基因表達(dá)的蛋白成分。特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。 WB的原理的原理WB檢測檢測HIV抗體的原理抗體的原理硝酸纖維試劑膜條上結(jié)合了天然滅活的硝酸纖維試劑膜條上結(jié)合了天然滅活的HIV-1型病型病毒蛋白的分離顆粒和特異性的毒蛋白的分離顆粒和特異性的HIV-2型合成多肽。型合成多肽。在膜條分別加入稀釋的血清或血漿樣本或?qū)φ眨谀l分別加入稀釋的血清或血漿樣本或?qū)φ?，孵育。如果樣本中含有孵育。如果樣本中含有HIV-1和和HIV-2型的特異性型的特異性抗體，則抗體會與試劑膜條上的抗體，則抗體會與試劑膜條上的HIV-1蛋白和蛋白和HIV-2多肽結(jié)合，通過清洗去除試劑膜條上的未結(jié)合多肽結(jié)合，通過清洗去除試

7、劑膜條上的未結(jié)合物，與物，與HIV蛋白特異性結(jié)合的抗體再通過與帶有蛋白特異性結(jié)合的抗體再通過與帶有堿性磷酸酶的羊抗人堿性磷酸酶的羊抗人IgG抗體結(jié)合，加入抗體結(jié)合，加入BCIP/NBT底物等一系列反應(yīng)即可顯色。底物等一系列反應(yīng)即可顯色。全病毒裂解液電泳得到的膜條全病毒裂解液電泳得到的膜條 在在HIV顆粒中，外膜蛋白（顆粒中，外膜蛋白（env）基因編碼的）基因編碼的一個蛋白經(jīng)糖基化后形成包膜蛋白前體（一個蛋白經(jīng)糖基化后形成包膜蛋白前體（gp160），其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白），其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白（gp120）和跨膜蛋白（）和跨膜蛋白（gp41）；核心蛋白（）；核心蛋白（gag）

8、基因編碼的前體蛋白（）基因編碼的前體蛋白（p55）被蛋白酶裂）被蛋白酶裂解為衣殼蛋白（解為衣殼蛋白（p24）和內(nèi)膜蛋白（）和內(nèi)膜蛋白（p17），），p39為為p55的碎片；逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白（的碎片；逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白（pol）基因）基因編碼的逆轉(zhuǎn)錄酶（編碼的逆轉(zhuǎn)錄酶（p66、p51）和核酸內(nèi)切酶（）和核酸內(nèi)切酶（p31），而機(jī)體對上述），而機(jī)體對上述HIV蛋白產(chǎn)生相應(yīng)的抗體蛋白產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，又在，又在WB中出現(xiàn)相應(yīng)的不同組合的帶型。中出現(xiàn)相應(yīng)的不同組合的帶型。 這既是確證這既是確證HIV抗體陽性的條件，又能作為抗體陽性的條件，又能作為HIV感染期和感染期和AIDS期的參考依據(jù)。期的參考依據(jù)。HIV模型

9、圖模型圖脂雙層膜脂雙層膜gp120gp41包膜糖蛋白包膜糖蛋白p24衣殼蛋白衣殼蛋白p17內(nèi)膜蛋白內(nèi)膜蛋白p7核衣殼蛋白核衣殼蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白酶蛋白酶整合酶整合酶env編碼編碼 外膜蛋白外膜蛋白gp120 跨膜蛋白跨膜蛋白gp41（包膜蛋白前體（包膜蛋白前體gp160為為gp41聚合體）聚合體）env基因的結(jié)構(gòu)及基因的結(jié)構(gòu)及env蛋白蛋白gag基因的結(jié)構(gòu)及基因的結(jié)構(gòu)及gag蛋白功能蛋白功能 gag基因編碼病毒核心蛋白基因編碼病毒核心蛋白 前體蛋白前體蛋白p55（p39為為p55的的碎片）碎片）、衣殼蛋白、衣殼蛋白p24、內(nèi)、內(nèi)膜蛋白膜蛋白p17pol基因的結(jié)構(gòu)及基因的結(jié)構(gòu)及pol蛋白蛋

10、白 pol基因編碼的酶類基因編碼的酶類p66和和p51蛋白為逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白為逆轉(zhuǎn)錄酶p32蛋白則為整合酶蛋白則為整合酶P11蛋白為蛋白酶蛋白為蛋白酶嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)確證試驗(yàn)的要點(diǎn)確證試驗(yàn)的要點(diǎn)嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作嚴(yán)格控制防止樣品間的交叉污染嚴(yán)格控制防止樣品間的交叉污染試劑試劑MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司（生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司（MP）HIV-1/2混合型試劑（混合型試劑（MP HIV BLOT 2.2）上海英旻泰生物技術(shù)有限公司（上海英旻泰生物技術(shù)有限公司（IMT）HIV-1/2混合型試劑（混合型試劑（IMT HIV-1

11、/2 Blot）實(shí)驗(yàn)藍(lán)圖實(shí)驗(yàn)藍(lán)圖實(shí)驗(yàn)原始記錄實(shí)驗(yàn)原始記錄結(jié)果的判定結(jié)果的判定首先要確定可見到標(biāo)本質(zhì)控帶首先要確定可見到標(biāo)本質(zhì)控帶.如果標(biāo)本質(zhì)如果標(biāo)本質(zhì)控帶是陰性控帶是陰性,則檢測無效則檢測無效;因?yàn)檫@表示技術(shù)上有因?yàn)檫@表示技術(shù)上有錯誤錯誤,如未加樣本如未加樣本,酶結(jié)合物或底物液。酶結(jié)合物或底物液。與強(qiáng)和與強(qiáng)和/或弱陽性對照試劑膜對照或弱陽性對照試劑膜對照,確定檢測確定檢測試劑膜上每一條帶的分子量。試劑膜上每一條帶的分子量。按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。品為陽性、陰性或不確定。HIV-1抗體陽性抗體陽性 檢測出檢測出2條條env帶

12、（帶（gp160/gp41和和gp120）及）及gag（p17，p24，p55）或）或pol（p31，p51，p66）HIV抗體陰性抗體陰性 沒有病毒的特異性條帶或沒有病毒的特異性條帶或只檢測出只檢測出p17抗體抗體HIV抗體不確定抗體不確定 出現(xiàn)任何病毒特異條帶，但不足以判斷為陽性出現(xiàn)任何病毒特異條帶，但不足以判斷為陽性試劑盒說明書試劑盒說明書技術(shù)規(guī)范（技術(shù)規(guī)范（2009版）版）HIV-1抗體陽性抗體陽性 至少有至少有2條條env帶（帶（gp41和和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少）出現(xiàn)，或至少1條條env帶和帶和p24帶同時出現(xiàn)。帶同時出現(xiàn)。HIV抗體陰性抗體陰性 無無HIV抗體特異帶

13、出現(xiàn)。抗體特異帶出現(xiàn)。HIV抗體不確定抗體不確定 出現(xiàn)出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性?？贵w特異帶，但不足以判定陽性。HIV-2抗體血清學(xué)陽性抗體血清學(xué)陽性出現(xiàn)出現(xiàn)HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時呈型特異性指示帶的樣品：如果同時呈HIV-1 抗體抗體陽性反應(yīng)，只需報告陽性反應(yīng)，只需報告HIV-1 抗體陽性，不推薦進(jìn)一步做抗體陽性，不推薦進(jìn)一步做HIV-2 抗體確證試驗(yàn)；如果同時呈抗體確證試驗(yàn)；如果同時呈HIV-1抗體不確定或陰性抗體不確定或陰性反應(yīng)，需用反應(yīng)，需用HIV-2型確證試劑再做型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗(yàn)。的抗體確證試驗(yàn)。同時符合以下二條標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少同時符

14、合以下二條標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條條env 帶（帶（gp36和和gp140/ gp105），和試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判為），和試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，可判為HIV-2抗體陽性?？贵w陽性。HIV基因組基因組ENV區(qū)區(qū) gp160:gp41的聚合體的聚合體 寬的擴(kuò)散糖蛋白帶寬的擴(kuò)散糖蛋白帶 gp120:外膜蛋白外膜蛋白 擴(kuò)散糖蛋白帶擴(kuò)散糖蛋白帶 gp41:跨膜蛋白跨膜蛋白 擴(kuò)散糖蛋白帶擴(kuò)散糖蛋白帶POL區(qū)區(qū) p66:逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶 細(xì)窄條帶細(xì)窄條帶 p51:逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶 細(xì)窄條帶細(xì)窄條帶 p31:核酸內(nèi)切酶核酸內(nèi)切酶 雙重條帶雙重條帶GAG區(qū)區(qū) p55:前體蛋白前體蛋白 細(xì)窄條帶細(xì)窄條帶

15、 p39:p55的碎片的碎片 細(xì)窄條帶細(xì)窄條帶 p24:核心蛋白核心蛋白 寬闊條帶寬闊條帶 p17:核心蛋白核心蛋白 寬闊條帶寬闊條帶條帶條帶確證陽性確證陽性首次確證不確定首次確證不確定孕婦第一次確證孕婦第一次確證MSM第一次確證第一次確證再次確證陰性再次確證陰性孕婦孕婦4周后隨訪確證結(jié)果周后隨訪確證結(jié)果MSM4周后隨訪確證結(jié)果周后隨訪確證結(jié)果From不確定不確定to陽性陽性送檢時間：送檢時間：2011年年1月月送檢時間：送檢時間：2011年年2月月質(zhì)量控制質(zhì)量控制第二章第二章 HIV抗體檢測抗體檢測7 7 質(zhì)量控制質(zhì)量控制 7.1 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制酶免或發(fā)光法抗體檢

16、測的室內(nèi)質(zhì)量控制7.2 7.2 快速法抗體檢測質(zhì)控快速法抗體檢測質(zhì)控WBWB法法HIVHIV抗體確證實(shí)驗(yàn)質(zhì)控抗體確證實(shí)驗(yàn)質(zhì)控7.1 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制7.1.1 7.1.1 試劑盒內(nèi)部對照試劑盒內(nèi)部對照7.1.2 7.1.2 室內(nèi)質(zhì)控品室內(nèi)質(zhì)控品7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖7.1.4 7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式室內(nèi)質(zhì)控其他方式“即刻法即刻法”質(zhì)控質(zhì)控試劑盒內(nèi)提供的陽性陽性和陰性對照：判陰性對照：判斷每次實(shí)驗(yàn)的斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性有效性，不能作為室內(nèi)不能作為室內(nèi)質(zhì)控品質(zhì)控品使

17、用；每次須有，且只能同批使用；每次須有，且只能同批號試劑盒用；如無效，須重做。號試劑盒用；如無效，須重做。非試劑盒組份的外部外部質(zhì)控品：監(jiān)控檢測的重復(fù)性，且須為弱陽性；判斷該批臨床樣品檢測的可信性；每每次須有次須有；失控須重做須重做?？少I或自制：穩(wěn)定穩(wěn)定、無菌無菌、不含影響試劑反應(yīng)不含影響試劑反應(yīng)的防腐劑防腐劑。第二章第二章 HIV抗體檢測抗體檢測7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖7.1.3.1 質(zhì)控圖參數(shù) 外部質(zhì)控品的均值均值和標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控外部質(zhì)控品品重復(fù)測定重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測

18、取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 （1）算術(shù)平均值算術(shù)平均值（ ）：代表一組質(zhì)控品測定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的S/CO值計算平均值。 （2）標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散離散程度的一個指標(biāo)，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。 （3）變異系數(shù)變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對于均值離散離散程度的一個指標(biāo)，可以用來衡量檢測

19、的重復(fù)性重復(fù)性或精密度精密度。 （4）控制限控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減2個標(biāo)準(zhǔn)差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個標(biāo)準(zhǔn)差。7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖7.1.3.2 質(zhì)控規(guī)則 實(shí)驗(yàn)室在報告結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。（1）告警告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出 +2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以

20、繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。（2）失控失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出 +3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。7.1.3.3 質(zhì)控圖的分析分析及失控處理失控處理 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。當(dāng)出現(xiàn)失控時，必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。外部質(zhì)控品？實(shí)驗(yàn)操作？不同人員？儀器？（如加樣槍？洗板機(jī)堵孔？酶標(biāo)儀未每年校準(zhǔn)？）繪制質(zhì)控圖錯誤？7.1.4 7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式室內(nèi)質(zhì)控其他方式“即刻法即刻法”質(zhì)控質(zhì)控7.1.

21、4 7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式室內(nèi)質(zhì)控其他方式“即刻法即刻法”質(zhì)控質(zhì)控（1）當(dāng)SI上限和SI下限 n3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失失控控”?！凹纯谭ā敝荒茉谇?0次內(nèi)使用，超出即可采用L-J質(zhì)控圖方法。 第二章第二章 HIV抗體檢測抗體檢測7.2 7.2 快速法抗體檢測質(zhì)控快速法抗體檢測質(zhì)控7.2.1 7.2.1 試劑內(nèi)對照試劑內(nèi)對照7.2.2 7.2.2 室內(nèi)質(zhì)控品對照室內(nèi)質(zhì)控品對照7.2.3 7.2.3 開展抗體相關(guān)檢測的實(shí)驗(yàn)室須參加開展抗體相關(guān)檢測的實(shí)驗(yàn)室須參加有有資質(zhì)機(jī)構(gòu)資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的組織的能力驗(yàn)證能力驗(yàn)證，或，或室間比對室間比對。質(zhì)控窗口內(nèi)的質(zhì)控帶，試劑自帶內(nèi)部過程質(zhì)控：

22、實(shí)驗(yàn)操作全部完成且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)；清潔的檢測區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控；如未有紅色質(zhì)控帶：試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該結(jié)果無效，須重做。外部外部質(zhì)控品可商用或自制質(zhì)控品：抗體陽性和陰性樣品；下列情況需做質(zhì)控：更換試劑批號、檢測人員、包裝、試劑廠家。除此之外，建議每個檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理損傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯誤、缺失或字跡模糊 （特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號和貨號，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或

23、污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn) （陽性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）；試劑質(zhì)量問題須報告省確證中心實(shí)驗(yàn)室。WBWB法法HIVHIV抗體確證實(shí)驗(yàn)質(zhì)控抗體確證實(shí)驗(yàn)質(zhì)控一、一、室內(nèi)室內(nèi)質(zhì)控質(zhì)控: 儀器質(zhì)控：儀器是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常，管路是否堵塞；儀器質(zhì)控：儀器是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常，管路是否堵塞； 過程質(zhì)控：過程質(zhì)控： 1、試劑質(zhì)控，強(qiáng)陽、弱陽、陰性對照；、試劑質(zhì)控，強(qiáng)陽、弱陽、陰性對照； 2、樣品質(zhì)控，有無交叉污染，相鄰的槽道是否、樣品質(zhì)控，有無交叉污染，相鄰的槽道是否出現(xiàn)完全一樣的條帶；出現(xiàn)完全一樣的條帶； 3、數(shù)據(jù)質(zhì)控，室溫、數(shù)據(jù)質(zhì)控，室溫253（ 20 需開空調(diào)需開空調(diào)），結(jié)果判讀需兩名判讀人和一名審核

24、人。），結(jié)果判讀需兩名判讀人和一名審核人。二、二、外部外部質(zhì)控：質(zhì)控：參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，即即室室間比對間比對，如全國艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室，如全國艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室HIV抗體血清學(xué)能力驗(yàn)抗體血清學(xué)能力驗(yàn)證。證。條帶位置條帶位置 試劑批號不同甚至同一批號不同盒子，同一條帶試劑批號不同甚至同一批號不同盒子，同一條帶的位置并不是相同的的位置并不是相同的早期感染帶型？（疑似）早期感染帶型？（疑似） Gp160+p24 gp120很弱或者沒有或還有其他很弱或者沒有或還有其他早期感染帶型？（疑似）早期感染帶型？（疑似）早期感染帶型？（疑似）早期感染帶型？（疑似）進(jìn)展帶型？

25、進(jìn)展帶型？AIDS（晚）期帶型？（晚）期帶型？ ENV帶強(qiáng)度保持恒定，帶強(qiáng)度保持恒定，p24缺失或強(qiáng)度明顯降低缺失或強(qiáng)度明顯降低AIDS（晚）期帶型？（晚）期帶型？第二章第二章 HIV抗體檢測抗體檢測6.2 確證報告確證報告6.2.1 WB及及 RIBA/LIA報告報告急性期急性期無癥狀期無癥狀期窗口期窗口期HIV抗原、抗體變化圖抗原、抗體變化圖Anti-P24Anti-gp41/120(anti-gp36)HIV RNAAnti-Ag1周周 2周周.1月月 2月月.1年年 2年年 3年年.10年年.艾滋病期艾滋病期Anti-Ab獻(xiàn)血員中一例陽性獻(xiàn)血員中一例陽性送檢時間：送檢時間：2010年年

26、12月月備注：備注：9.13獻(xiàn)血，酶免陰性，核酸陽性。獻(xiàn)血，酶免陰性，核酸陽性。12.18檢測，酶免陽性，核酸陽性。檢測，酶免陽性，核酸陽性。建議仔細(xì)詢問發(fā)生高危行為的時間。建議仔細(xì)詢問發(fā)生高危行為的時間。工欲善其事工欲善其事必先利其器必先利其器加樣器的使用加樣器的使用準(zhǔn)備準(zhǔn)備設(shè)定移液量設(shè)定移液量安裝吸頭安裝吸頭按壓至第一停點(diǎn)位置按壓至第一停點(diǎn)位置吸液吸液貼貼壁壁輕輕按壓放液輕輕按壓放液貼貼壁壁按壓至第一停點(diǎn)后，再按壓第二停點(diǎn)，按壓至第一停點(diǎn)后，再按壓第二停點(diǎn)，排盡吸頭殘余液體排盡吸頭殘余液體松開按鈕，彈回至原來的位置松開按鈕，彈回至原來的位置按壓吸頭推頂，退除吸頭按壓吸頭推頂，退除吸頭加樣器

27、的使用加樣器的使用正向加樣法正向加樣法反向加樣法反向加樣法加樣器加樣器-注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，使用根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，使用帶濾芯帶濾芯的的吸頭，可吸頭，可防止交叉污染防止交叉污染。日本日本W(wǎng)ATSON ：低吸附、高精度、無：低吸附、高精度、無RNA酶、酶、無無DNA酶、無熱源、加長吸頭酶、無熱源、加長吸頭 、帶濾芯已消毒、帶濾芯已消毒吸取液體時應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液吸取液體時應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開按鈕，將吸液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開，嘴壓掉后再將拇指松開，

28、避免液體回吸避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時，在調(diào)整取液量的旋鈕時，不要用力過猛不要用力過猛，并應(yīng)注，并應(yīng)注意計數(shù)器顯示的數(shù)值意計數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過其可調(diào)范圍不要超過其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時使用，吸頭連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時使用，吸頭有有液體液體時時不可平放或倒置不可平放或倒置。加樣器加樣器-注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 操作時要操作時要慢慢和和穩(wěn)穩(wěn)，吸嘴，吸嘴浸入液體深度浸入液體深度要要合適合適，吸液過程盡，吸液過程盡量保持不變；量保持不變；改吸不同液體、樣品或試劑改吸不同液體、樣品或試劑前要前要換新?lián)Q新吸嘴；吸嘴；發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液吸嘴內(nèi)有殘液時必須更時必須更換換；新吸

29、嘴使用前應(yīng)先預(yù)測。；新吸嘴使用前應(yīng)先預(yù)測。為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕時保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時不可將移時保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；吸嘴中有液體時不可將移液器平放；液器平放；5ML及及10ML移液器一定要加移液器一定要加濾芯濾芯。切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。使用了酸性或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸使用了酸性或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈。餾水清洗活塞及密封圈。加樣器加樣器-注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液嘴不能連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理擺放合理，以方便操作，以方便操作過程、過程、避免污染避免污染為原則。為原則。連續(xù)可調(diào)式連續(xù)可調(diào)式移液器移液器在使用完畢后應(yīng)置于移液器架上，在使用完畢后應(yīng)置于移液器架上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取在取液之前，所取液體液體應(yīng)在應(yīng)在室溫室溫（15-25 C）平衡平衡；液體；液體溫度與室溫有異時，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不溫