血細(xì)胞分析儀

1、深 圳 大 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告 課程名稱： 體外診斷儀器原理與實(shí)踐 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱： 血細(xì)胞分析儀 學(xué)院： 醫(yī)學(xué)院 專業(yè)： 醫(yī)療器械工程 指導(dǎo)教師： 報(bào)告人： 學(xué)號(hào)： 班級(jí)： 實(shí)驗(yàn)時(shí)間： 2014-05-09 實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交時(shí)間： 教務(wù)部制實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1. 介紹血細(xì)胞分析儀的計(jì)數(shù)原理、血紅蛋白濃度測(cè)定原理。2. 記錄血細(xì)胞分析儀的測(cè)試流程。3.簡(jiǎn)單分析血細(xì)胞分析儀檢測(cè)報(bào)告中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板以及白細(xì)胞分類的意義。方法、步驟：實(shí)驗(yàn)儀器:三分類血細(xì)胞分析儀:一、簡(jiǎn)要操作指南及注意事項(xiàng) 1、 開機(jī)前的準(zhǔn)備 檢查試劑是否足量，有無渾濁變質(zhì)，試劑管道有無扭結(jié)，并倒空廢液瓶 2、 開機(jī) 打開機(jī)器后部的

2、開關(guān)，等待機(jī)器自動(dòng)沖洗內(nèi)部管路后，自動(dòng)測(cè)量本底并出現(xiàn)計(jì)數(shù)界面 3、 本底檢查 出現(xiàn)計(jì)數(shù)界面后，機(jī)器將自動(dòng)測(cè)量的本底數(shù)值顯示在屏幕上，本底結(jié)果要求： WBC0.3 RBC0.03 HGB1 PLT10 如果本底沒有達(dá)到儀器的要求，儀器將會(huì)提示“本底異常”請(qǐng)執(zhí)行清洗或維護(hù)程序 4、 全血測(cè)量 A. 在計(jì)數(shù)界面下，按模式鍵，將模式設(shè)置為“全血” B. 混勻抗凝血后，送到采樣針下，讓采樣針插入抗凝血 C. 按開始鍵，開始對(duì)樣本計(jì)數(shù) 二、三分類血細(xì)胞分析儀原理和主要結(jié)構(gòu)及其參數(shù)意義:所謂三分類 是把白細(xì)胞分成大中小,測(cè)量方法是基于庫爾特原理.計(jì)數(shù)原理-庫爾特原理: 庫爾特原理也叫電阻抗法 , 其主要原理

3、是依據(jù)電解質(zhì)溶液中懸浮顆粒在通過計(jì)數(shù)小孔時(shí) , 引起電阻變化 , 在恒流電路中 , 電阻的變化引起電壓的變化來進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定的。 如圖 1 所示, 將等滲電解質(zhì)溶液稀釋的細(xì)胞懸液倒入一個(gè)不導(dǎo)電的容器中, 再將鑲有寶石小孔的管子插入到細(xì)胞懸液中, 在小孔管內(nèi)側(cè)充滿稀釋液,并在其內(nèi)外各置一個(gè)電極。當(dāng)細(xì)胞通過小孔時(shí), 由于血細(xì)胞具有非傳導(dǎo)性的性質(zhì), 因此, 將引起內(nèi)、外電極間的電阻增加, 產(chǎn)生一個(gè)脈沖。若在兩電極間加上一個(gè)恒流源, 則這個(gè)電阻的變化就轉(zhuǎn)換成了電壓的變化。脈沖變化的次數(shù)代表血細(xì)胞通過小孔的個(gè)數(shù), 其脈沖的高度表征細(xì)胞體積的大小。 綜上可知:不同脈沖波的大小表示細(xì)胞體積的不同.不

4、同脈沖波的數(shù)量即為細(xì)胞的個(gè)數(shù) 庫爾特原理主要由測(cè)量杯、小孔管、內(nèi)外電極等組成。其中 , 小孔管（主要是紅寶石孔）下圖是整個(gè)測(cè)量系統(tǒng)的主要部分 , 它決定了血球分析儀的測(cè)量準(zhǔn)確度。小孔越小(大概100米那樣) , 測(cè)量準(zhǔn)確度越高 , 但易造成堵孔 ; 小孔越大 ,測(cè)量準(zhǔn)確度越低 , 但不易堵孔。目前市場(chǎng)上銷售的利用電阻抗法設(shè)計(jì)的血球分析儀的競(jìng)爭(zhēng)焦點(diǎn)就在于把小孔做得小而不易堵孔 ,為了實(shí)現(xiàn)細(xì)胞逐個(gè)通過可采用鞘流法,根據(jù)兩側(cè)鞘流的流速不同使細(xì)胞一個(gè)個(gè)的進(jìn)入孔內(nèi)從而不造成堵孔和細(xì)胞并排進(jìn)入的誤差的問題(如下圖): 其排堵方法大致有反沖法和電灼燒法兩種 , 或二者兼而有之。測(cè)量系統(tǒng)得到的電平信號(hào)經(jīng)放大、

5、閾值調(diào)節(jié)、甄別、整形后進(jìn)行計(jì)數(shù) , 得到 RBC、WBC、PLT 的數(shù)量。但三者的計(jì)數(shù)原理又略有不同。白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí) , 機(jī)內(nèi)微型計(jì)算機(jī)按體積大小將白細(xì)胞從 3045fl 分為 256 個(gè)通道 , 每個(gè)通道為1164fl。根據(jù)細(xì)胞大小被分別放在不同的通道中得到白細(xì)胞體積的直方圖 , 根據(jù)體積大小可分為不同的細(xì)胞群 , 第一群主要是淋巴細(xì)胞 , 第二群主要是單核細(xì)胞 , 第三群為粒細(xì)胞 , 這就是“三分群法”也就是常說的三分類。 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理同白細(xì)胞計(jì)數(shù)原理大致相同。在紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的同時(shí) , 把各脈沖幅度相加 , 得到紅細(xì)胞的總體積 , 經(jīng)計(jì)算得到紅細(xì)胞的平均體積。血紅蛋白的測(cè)量通常用比色法得到。

6、紅細(xì)胞的平均體積 (MCV) , 紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量 (MCH) , 平均血紅蛋白濃度 (MCHC) , 紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW) 都是通過計(jì)算得來的。血小板計(jì)數(shù)時(shí) , 微型計(jì)算機(jī)按體積分成 64 個(gè)通道 , 范圍為 228fl 之間 , 血小板的平均體積(MPV) 是計(jì)算得來的 .血紅蛋白測(cè)定原理-朗伯比爾定律. 在儀器的內(nèi)部,當(dāng)儀器把血液樣本吸進(jìn)來的時(shí)候會(huì)分成兩個(gè)杯子(通道)。一個(gè)是測(cè)量紅細(xì)胞和血小板的（因?yàn)榧t細(xì)胞和血小板的體積比較容易根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度區(qū)分，白細(xì)胞造成的影響可以忽略因?yàn)榧t細(xì)胞的數(shù)量比較大）。另外一個(gè)杯子是測(cè)量血紅蛋白和白細(xì)胞的，白細(xì)胞依然使用庫爾特原理計(jì)數(shù)，而血紅蛋白的

7、測(cè)定我們知道紅細(xì)胞通過溶血素可以使紅細(xì)胞破裂釋放血紅蛋白出來，然后其與溶血?jiǎng)┙Y(jié)合形成血紅蛋白衍生物 , 進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng) , 在特定波長(zhǎng) (一般在 530550nm) 下比色 ,吸光度的變化與液體中 Hb 含量成比例 ,儀器便可顯示 Hb 濃度。不同系列的血液分析儀配套溶血?jiǎng)┡浞讲煌?, 形成的血紅蛋白衍生物也不同 , 但大多數(shù)的最大吸收光譜接近 540nm ，所以血紅蛋白的含量用朗伯比爾定律可以將測(cè)得的吸光度換算成濃度。 A=KCL其中A是吸光度無單位 K是摩爾吸光系數(shù)單位L/(MOL*CM) C是物質(zhì)的濃度單位MOL/L L是 光徑單位是CM由于A可以測(cè)定 K已知 L已知從而可以計(jì)算出

8、C。達(dá)到測(cè)量的目的。左圖是機(jī)器的內(nèi)部局部結(jié)構(gòu)圖，核心的是在第二個(gè)管子，是吸取血液樣本的，每次只能吸收15L的樣本，非常精確。右側(cè)的管子是裝清洗液用的以ML為單位，所以不需要非常精確。相關(guān)參數(shù)意義:紅細(xì)胞直方圖，是反映紅細(xì)胞大小或任何相當(dāng)于紅細(xì)胞顆粒分布圖，正常呈光滑的正態(tài)曲線，其峰值即MCV值，細(xì)胞大小分布在25-175fl范圍。峰左移，為小紅細(xì)胞性貧血;峰右移，為大紅細(xì)胞貧血。由于儀器還同時(shí)提供許多其他參數(shù)，所以可明顯提高疾病診斷的準(zhǔn)確性。白細(xì)胞直方圖，是一條有兩個(gè)峰的光滑曲線，從左至右的分布分別為淋巴細(xì)胞，中間細(xì)胞,中性粒細(xì)胞，其分布范圍相應(yīng)為35-90fL, 160-400fL。但其他與

9、淋巴、粒細(xì)胞相似的顆粒都可干擾白細(xì)胞直方圖，在慢性淋巴細(xì)胞白血病、再障等淋巴細(xì)胞峰抬高，急慢性粒細(xì)胞白血病時(shí)粒細(xì)胞峰抬高，淋巴細(xì)胞峰降低甚至消失。血小板直方圖，是一條光滑的傾向左側(cè)的偏態(tài)曲線。正常分布范圍在2-25fL之間，與血小相當(dāng)?shù)钠渌w粒也可在其范圍出現(xiàn)。在慢性特發(fā)性血小板減少性紫殿時(shí)，血小板數(shù)量減少，巨大血小板增多，表現(xiàn)為曲線峰右移。三、三分類血細(xì)胞分析儀耗材:稀釋液（內(nèi)置電容傳感器檢測(cè)液面高度）廢棄罐（內(nèi)置電容傳感器檢測(cè)液面高度）溶血素（內(nèi)置電容傳感器檢測(cè)液面高度）清洗液（內(nèi)置電容傳感器檢測(cè)液面高度）同上，其他各種清洗液4、 實(shí)驗(yàn)過程1.清洗血液探頭，開機(jī)自檢2.采集血液3. 把機(jī)器

10、設(shè)置為全血模式（藍(lán)底）4.把血液樣本沒過探頭，然后按下藍(lán)色的按鈕5. 觀察結(jié)果6結(jié)果分析從上述原理我們知道 純測(cè)出來的數(shù)據(jù)只有WBC RBC PLT的數(shù)目和HB的濃度.其他數(shù)值都是計(jì)算的出來的結(jié)果.我們主要要看的也就是這四項(xiàng),重點(diǎn)看白細(xì)胞,我自己的血液測(cè)得的結(jié)果如上圖,表示全部都正常.后來我又再測(cè)了一次,還是正常,說明機(jī)器的重復(fù)性比較良好,其他同學(xué)測(cè)得有些是PLT偏高有些HB濃度偏高,可能因素也有很多不過并沒有什么大礙,以下也列出了可能的原因.PLT偏高:偏高的原因第一是前段時(shí)間有過出血，血小板參與止血，生成過多，此時(shí)還沒恢復(fù)正常水平。如果是因?yàn)檫@個(gè)，那過些天就會(huì)恢復(fù)正常。第二就是與骨髓造血功

11、能有關(guān)。第三是與激素有關(guān)，促血小板生成素分泌過多。HB偏高:飲水過少或出汗過多，排除水分過多可導(dǎo)致暫時(shí)性的血液濃縮，造成紅細(xì)胞和血紅蛋白輕度升高。5、 血細(xì)胞分析儀檢測(cè)報(bào)告中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板以及白細(xì)胞分類的意義報(bào)告單中白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)可以確定某些疾病，比如：一、白細(xì)胞：1.中性粒細(xì)胞：增多和減少的臨床意義與白細(xì)胞計(jì)數(shù)相同2.淋巴細(xì)胞：多見于病毒或細(xì)菌感染3.嗜酸性粒細(xì)胞：增多見于變態(tài)反應(yīng)，寄生蟲病4.嗜堿性粒細(xì)胞：增多見于慢性粒細(xì)胞性白血病、何杰金氏病、癌轉(zhuǎn)移、鉛鉍中毒、等。5.單核細(xì)胞：增多見于某些細(xì)菌感染2、 紅細(xì)胞和血紅蛋白：增多1相對(duì)性增多：由于某些原因使血漿中水分丟失，血液濃縮，

12、使紅細(xì)胞和血紅蛋白含量相對(duì)增多。如連續(xù)劇烈嘔吐、大面積燒傷、嚴(yán)重腹瀉、大量出汗等；另見于慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退、尿崩癥、甲狀腺功能亢進(jìn)等。2絕對(duì)性增多：由各種原因引起血液中紅細(xì)胞和血紅蛋白絕對(duì)值增多，多與機(jī)體循環(huán)及組織缺氧、血中促紅細(xì)胞生成素水平升高、骨髓加速釋放紅細(xì)胞有關(guān)。（1）生理性增多：見于高原居民、胎兒和新生兒、劇烈勞動(dòng)、恐懼、冷水浴等。（2）病理性增多：由于促紅細(xì)胞生成素代償性增多所致，見于嚴(yán)重的先天性及后天性心肺疾病和血管畸形，如法洛四聯(lián)癥、紫紺型先天性心臟病、阻塞性肺氣腫、肺源性心臟病、肺動(dòng)-靜脈瘺以及攜氧能力低的異常血紅蛋白病等。在另一些情況下，病人并無組織缺氧，促紅細(xì)胞生醫(yī)學(xué)

13、教 育網(wǎng) 收集 整理成素的增多并非機(jī)體需要，紅細(xì)胞和血紅蛋白增多亦無代償意義，見于某些腫瘤或腎臟疾病，如腎癌、肝細(xì)胞癌、腎胚胎瘤以及腎盂積水、多囊腎等。減少：1生理性減少：3個(gè)月的嬰兒至15歲以前的兒童，因生長(zhǎng)發(fā)育迅速而致造血原料相對(duì)不足，紅細(xì)胞和血紅蛋白可較正常人低1020。妊娠中、后期由于孕婦血容量增加使血液稀釋，老年人由于骨髓造血功能逐漸減低，均可導(dǎo)致紅細(xì)胞和血紅蛋白含量減少。2病理性減少：（1）紅細(xì)胞生成減少所致的貧血：1）骨髓造血功能衰竭：再生障礙性貧血、骨髓纖維化等伴發(fā)的貧血。2）因造血物質(zhì)缺乏或利用障礙引起的貧血：如缺鐵性貧血、鐵粒幼細(xì)胞性貧血、葉酸及維生素B12缺乏所致的巨幼細(xì)

14、胞性貧血。（2）因紅細(xì)胞膜、酶遺傳性的缺陷或外來因素造成紅細(xì)胞破壞過多導(dǎo)致的貧血，如遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、地中海性貧血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、異常血紅蛋白病、免疫性溶血性貧血、心臟體外循環(huán)的大手術(shù)及一些化學(xué)、生物因素等引起的溶血性貧血。（3）失血：急性失血或消化道潰瘍、鈞蟲病等慢性失血所致的貧血。三、血小板 (一)生理性增高或降低  1.劇烈運(yùn)動(dòng)后血小板增高，飽餐后也有增高，冬季略增高。  2.婦女月經(jīng)前血小板降低。  3.少年較成年人血小板偏低。  4.新生兒血小板數(shù)目較少，到3個(gè)月后至成人水平。 5.靜脈血血小板略高于外周血。 

15、;(二)病理性減少：  (1)骨髓造血功能受損而導(dǎo)致血小板生成減少，如再生障礙性貧血、急性白血病、放射病、抗癌藥的應(yīng)用等。  (2)血小板破壞過多而致的血小板減少，如特發(fā)性血小板減少性紫癜、脾亢、體外循環(huán)等。  (3)血小板消耗過多而致的血小板減少，如彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、血栓性血小板減少性紫癜。  (4)家族性血小板減少，如巨大血小板綜合征。增多： (1)組織受損及術(shù)后特別是脾切除后血小板可增高。 (2)血小板持續(xù)增高見于慢性粒細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、血小板增多癥、真性紅細(xì)胞增多癥、惡性腫瘤的早

16、期。 (3)急性反應(yīng)，如急性感染、急性失血、急性溶血等。深圳大學(xué)學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告用紙實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1.血液細(xì)胞分析是目前臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用最多的檢測(cè)項(xiàng)目之一。在庫爾特原理發(fā)明之前 , 臨床檢驗(yàn)一直延用手工計(jì)數(shù)法。50 年代后期 , 世界上第一臺(tái)血細(xì)胞分析儀問世后 , 使血液細(xì)胞檢驗(yàn)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化成為可能。目前 , 紅細(xì)胞和血小板的檢測(cè)原理主要是庫爾特原理 ; 白細(xì)胞的分類方法主要有容量、電導(dǎo)、光散射法 (VCS 法) , 阻抗與射頻技術(shù)聯(lián)合法 , 光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。2.血細(xì)胞分析儀的參數(shù)只有WBC,RBC,PLT,HB是直接測(cè)定的，其他都是計(jì)算的出來的3.本血液分析儀主要使用了庫爾特原理和朗伯比爾定律4.本機(jī)器內(nèi)置了很多