計(jì)算藥學(xué)第5章(第1,2,3次課的課件,第1,2,3次課講到第73張幻燈片了,計(jì)算藥物分析)

1、第5章 分析測試中的質(zhì)量保證 1、 質(zhì)量管理體系和質(zhì)量保證質(zhì)量管理體系和質(zhì)量保證 2、 對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 3、 分析采樣理論分析采樣理論 4、 分析方法的驗(yàn)證分析方法的驗(yàn)證 5、 雜質(zhì)分析的指導(dǎo)原則雜質(zhì)分析的指導(dǎo)原則 （其中（其中2、4節(jié)為節(jié)為重點(diǎn)小節(jié)）重點(diǎn)小節(jié)）. 藥品質(zhì)量的重要性藥物作為一種特殊的商品，其質(zhì)量直接關(guān)系到人民的生命安全和健康水平相關(guān)新聞數(shù)據(jù)顯示，全國每年有20萬人死于藥品不良反應(yīng)齊二藥的亮甲菌素注射液事件安徽華源的“欣弗”事件花樣年華葬于“欣弗”之手5.1 質(zhì)量管理體系和質(zhì)量保證質(zhì)量管理體系和質(zhì)量保證 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 質(zhì)量保證是個綜合過程

2、，涉及到人員、技術(shù)、管理等各個方面。國際上經(jīng)過數(shù)百年工業(yè)大生產(chǎn)及其質(zhì)量管理的實(shí)踐，從早期的個人檢查把關(guān)，到50年代的統(tǒng)計(jì)質(zhì)量管理和近年來的全面質(zhì)量管理階段，在各個行業(yè)中已經(jīng)逐步形成了比較完整和成熟的質(zhì)量管理體系。 GMP、GSP、GCP、GLP等。藥品的生產(chǎn)、貯存、運(yùn)輸、銷售和使用都必須嚴(yán)格按照這些法令性文件進(jìn)行全面質(zhì)量控制和質(zhì)量保證的科學(xué)管理。 控制圖是經(jīng)常使用的質(zhì)量評定技術(shù)之一。最常用的控制圖是用同一標(biāo)準(zhǔn)方法對同一標(biāo)準(zhǔn)樣品測試20次以上，求出其平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差s,在坐標(biāo)紙上以為x中線，以2s為警戒線，以3s為控制限，依次標(biāo)繪實(shí)驗(yàn)點(diǎn)并連成線，即得到控制圖。 得到控制圖以后，日常分析中用標(biāo)準(zhǔn)物

3、質(zhì)測試的結(jié)果如落到控制限以外，就說明-樣品測試無效，應(yīng)找出原因，并采取措施糾正后重新用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校正。5.2 對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 2、 對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度的發(fā)展不確定度在國際的發(fā)展1927年海森堡仔細(xì)分析了微觀物理體系的實(shí)際行為，提出了指定和測量這類變量所能達(dá)到的準(zhǔn)確度存在一個基本極限，稱之為不確定度關(guān)系1963年美國國家標(biāo)準(zhǔn)局提出定量表示不確定度的建議1980年國際計(jì)量局作出實(shí)驗(yàn)不確定度的規(guī)定建議書INC-1向各國推薦了不確定度的表達(dá)原則，使不確定度在計(jì)算上有了共同基礎(chǔ)，也使各種計(jì)量不確定度的說明有了共同語言，對不確定度的表示方法取得了國際的同一1993年由

4、ISO與BIPM，IEC，IFCC，IUPAC，IUPAP，OIML合作出版測量不確定度表示導(dǎo)則（GUM），這是一個應(yīng)用性指南，在不確定度的術(shù)語定義、概念、評定方法和報告時的表達(dá)方式上都做出了更進(jìn)一步的統(tǒng)一規(guī)定不確定度在我國的發(fā)展1986年中國計(jì)量科學(xué)研究院發(fā)出不確定度應(yīng)用方法的通知，規(guī)定在基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)研究中，在測量和檢定工作中，應(yīng)采用不確定度作為誤差的數(shù)字指標(biāo)。1999年國家計(jì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布了技術(shù)規(guī)范JJF1059-1999測量不確定度評定與表示，作為國家標(biāo)準(zhǔn)公布施行 誤差與測量不確定度二者既有聯(lián)系，又有著本質(zhì)的區(qū)別。誤差理論是測量不確定度基礎(chǔ)，測量不確定度是經(jīng)典的誤差理論發(fā)展和完善的產(chǎn)物。

5、誤差是客觀存在的測量結(jié)果對被測量真值的偏差，是無法準(zhǔn)確得到的，測量不確定度與人們對被測量的認(rèn)識程度有關(guān)，是由人們經(jīng)過分析和評定得到的，可以對測量結(jié)果作出定量評定。有可能測量結(jié)果的誤差很小，但由于認(rèn)識不足，而認(rèn)為不確定度很大；也有可能誤差較大，由于分析估計(jì)不足，相反給出偏小的不確定度 不確定度與誤差測量誤差測量不確定度定義反映測量結(jié)果偏離真值的程度反映測量結(jié)果的分散性程度來源隨機(jī)效應(yīng)和系統(tǒng)效應(yīng)隨機(jī)性和模糊性表示符號非正即負(fù)恒為正值獲得途徑通過約定真值獲得估計(jì)值由實(shí)驗(yàn)、資料、經(jīng)驗(yàn)評定分類隨機(jī)誤差、系統(tǒng)誤差、粗大誤差A(yù)類評定、B類評定合成方法各誤差分量的代數(shù)和平方和之后開根結(jié)果修正可用系統(tǒng)誤差估計(jì)值

6、修正結(jié)果不能對結(jié)果進(jìn)行修正結(jié)果說明屬于給定的測量結(jié)果屬于合理賦予被測量的任意值自由度無作為不確定度評定是否可靠的指標(biāo)置信概率無需按置信概率給出置信區(qū)間 測量不確定度的重要性已經(jīng)得到廣泛的認(rèn)識，一個完整的定量分析結(jié)果應(yīng)該包含不確定度信息，它是定量分析結(jié)果的重要組成部分，是評價分析結(jié)果可信度的重要參數(shù)。 此外，測量方法的不確定度在方法學(xué)研究等方面也能提供有益的指導(dǎo)，如提供分析過程主要誤差的來源信息、解決方案等。 化學(xué)測量不僅要給出測量過程中所使用的各種參考標(biāo)準(zhǔn)的不確定度，而且要給出測量結(jié)果的不確定度 藥品檢驗(yàn)工作中的作用 對照品及標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的標(biāo)注 物理化學(xué)常數(shù)測定的結(jié)果（吸光系數(shù)、折光率等） 樣品

7、測定結(jié)果的表示 中央藥品檢驗(yàn)所做的工作。測量不確定度的估算過程開始說明被測量 識別不確定度源 組合現(xiàn)有數(shù)據(jù)包含的不確定度源進(jìn)行簡化 量化通過組合的組分 量化剩下的組分 將不確定度組分轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)偏差 復(fù)核 計(jì)算合成不確定度 計(jì)算擴(kuò)展不確定度 結(jié)束標(biāo)準(zhǔn)不確定度的A類評定貝塞爾公式：其正平方根就表示 的分散性 。 稱為樣本標(biāo)準(zhǔn)差或?qū)嶒?yàn)標(biāo)準(zhǔn)差。測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為nkkkxxnxs122)(11)(kxkxsnxsxuk計(jì)算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號 說明 x標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (x)相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (x)/x m水m樣終點(diǎn)f水的重量樣品的重量終點(diǎn)的偏差溫度/濕度的校正因子10mg87.5mg100%1

8、0.0960.0960.130.00420.00960.00110.00130.0042計(jì)算擴(kuò)展不確定度計(jì)算擴(kuò)展不確定度Uc按95置信概率，包含因子采用2 ：最終結(jié)果表示為：該樣品的水分含量為： （0.090.002%）%001. 0%09. 0011. 0%011. 0)(011. 0)10042. 0()10013. 0()5 .87096. 0()10096. 0()()()()()(22222222水分水分終點(diǎn)終點(diǎn)水分水分樣樣水水uffuummummuu%002. 02001. 0cU5.3 分析采樣理論 采樣的重要性采樣的重要性 采樣是分析測試工作的笫一步。分析的過程是通過樣本研究總

9、體性質(zhì)的過程，測試結(jié)果的誤差和采樣誤差密切相關(guān)。 當(dāng)分析測量的不確定度降低到樣本不確定度的13或者更少時， 沒有必要再進(jìn)一步提高分析測試的精密度。 根據(jù)誤差傳遞理論，結(jié)果誤差要取決于精密度最差的單次測量度，僅僅提高單次測量的精密度常常是沒有意義的。但人們常常花大力氣研究如何改善分析方法的精密度，而忽略了采樣方法的正確性。 采樣方法 采樣方法應(yīng)選取盡可能少的樣本而使獲結(jié)果最大程度地反映被研究總體的特征。 對于不同類型的分析對象，取樣的具體操作一般都有行業(yè)規(guī)定的方法。如藥品的分析取樣，在國家藥典附錄和藥品生產(chǎn)管理規(guī)范實(shí)施指南中都有明確的規(guī)定。數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法是正確采樣的理論依據(jù)。5.4 分析方法的驗(yàn)證

10、分析方法的驗(yàn)證5.4.1 概述概述 為了保證分析測試結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，必須要有分析方法的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。世界各國和一些國際組織都十分重視分析方法的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。 如國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（）下設(shè)近二百個技術(shù)委員會，每年都頒布若干新的標(biāo)準(zhǔn)方法，每五年都對已經(jīng)有的標(biāo)準(zhǔn)方法修訂一次；美國官方化學(xué)家協(xié)會（）已經(jīng)研究并頒布了數(shù)千種官方標(biāo)準(zhǔn)分析方法； 由各國政府組織的藥典委員會頒布收載的醫(yī)藥品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)即藥典是具有法律效力的藥品國家標(biāo)準(zhǔn)。 對標(biāo)準(zhǔn)方法以及科研工作中建立的方法都應(yīng)有一定的方法和數(shù)據(jù)證實(shí)其可靠性和可行性。這是所建立的方法能被同行重復(fù)和驗(yàn)證，發(fā)表以后能被他人應(yīng)用，得到普及，具有實(shí)用價值的重要基礎(chǔ)。

11、為了保證分析測試結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，必須對建立的方法進(jìn)行系統(tǒng)科學(xué)的驗(yàn)證(validation)。 方法學(xué)研究 在醫(yī)藥行業(yè), 最早提出對藥品檢驗(yàn)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證的是美國藥典。美國藥典從1990年版起增加了一個附錄“法定方法的驗(yàn)證(Validation of compendial methods)”。 按照該項(xiàng)附錄的規(guī)定，任何一個新方法的建立或改進(jìn)，都必須有足夠的理由說明其必需性，和有足夠的資料證明其可靠性和可行性，并經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)程序的證實(shí)，其目的就是把藥品檢驗(yàn)方法的建立和改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)化，以保證方法的準(zhǔn)確可靠。 新藥質(zhì)量研究的有關(guān)規(guī)定新藥質(zhì)量研究的有關(guān)規(guī)定 現(xiàn)行版藥典及現(xiàn)行版藥典及ICHICH 有關(guān)文件

12、有關(guān)文件 ICH files for quality (Q2，Q3） 藥典附錄藥典附錄: 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證3. 藥典附錄藥典附錄: 藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則4.藥典附錄藥典附錄: 雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則5. SFDA: 藥品注冊管理辦法藥品注冊管理辦法(2002-437， 號文號文+附件附件1、2）6. SFDA: SFDA: 原料藥質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則原料藥質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則7.SFDA7.SFDA: : 制劑質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則制劑質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則 5.4.2 人用藥品注冊技術(shù)要求國

13、際協(xié)調(diào)會（人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議 International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use ( 1991年建立年建立)籌備籌備: 國際協(xié)調(diào)小組（國際協(xié)調(diào)小組（PDG）：）： 1989年建立，美國、歐洲、日本年建立，美國、歐洲、日本 1 1ICHICH成立的背景成立的背景 不同國家，對新藥上市前要進(jìn)行審批的實(shí)現(xiàn)時間是不同的。美國在不同國家，

14、對新藥上市前要進(jìn)行審批的實(shí)現(xiàn)時間是不同的。美國在30年代發(fā)生了年代發(fā)生了磺磺胺醑劑胺醑劑事件，事件，F(xiàn)DA開始對上市藥品進(jìn)行審批；日本政府在開始對上市藥品進(jìn)行審批；日本政府在50年代才開始對上市藥品年代才開始對上市藥品進(jìn)行注冊；歐盟在進(jìn)行注冊；歐盟在60年代發(fā)生年代發(fā)生反應(yīng)停反應(yīng)停（Thalidomide）慘案后，才認(rèn)識到新的一代）慘案后，才認(rèn)識到新的一代合成藥既有療效作用，已存在潛在的風(fēng)險性。于是，許多國家在六、七十年代分別合成藥既有療效作用，已存在潛在的風(fēng)險性。于是，許多國家在六、七十年代分別制定了制定了產(chǎn)品注冊的法規(guī)、條例和指導(dǎo)原則產(chǎn)品注冊的法規(guī)、條例和指導(dǎo)原則。 為了嚴(yán)格管理藥品為了嚴(yán)

15、格管理藥品,必須對藥品的研制、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、進(jìn)品等進(jìn)行審批，形成必須對藥品的研制、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、進(jìn)品等進(jìn)行審批，形成了了藥品的注冊制度藥品的注冊制度。隨著制藥工業(yè)趨向隨著制藥工業(yè)趨向國際化國際化并尋找新的全球市場，各國藥品注冊的并尋找新的全球市場，各國藥品注冊的技術(shù)要求技術(shù)要求不同，以不同，以至使制藥行業(yè)要在國際市場銷售一個藥品，需要至使制藥行業(yè)要在國際市場銷售一個藥品，需要長時間和昂貴的多次重復(fù)試驗(yàn)和重長時間和昂貴的多次重復(fù)試驗(yàn)和重復(fù)申報，導(dǎo)致新藥研究和開發(fā)的費(fèi)用逐年提高，醫(yī)療費(fèi)用也逐年上升復(fù)申報，導(dǎo)致新藥研究和開發(fā)的費(fèi)用逐年提高，醫(yī)療費(fèi)用也逐年上升。因此，為了。因此，為了降低藥價并

16、使新藥能早日用于治療病人，各國政府紛紛將降低藥價并使新藥能早日用于治療病人，各國政府紛紛將“新藥申報技術(shù)要求的合新藥申報技術(shù)要求的合理化和一致化的問題理化和一致化的問題”提到議事日程上來了。提到議事日程上來了。 不同國家對藥品注冊要求各不相同不同國家對藥品注冊要求各不相同，這不僅不利于病人在藥品的，這不僅不利于病人在藥品的安全性、有效性和安全性、有效性和質(zhì)量質(zhì)量方面得到科學(xué)的保證及國際技術(shù)和貿(mào)易交流，同時也造成制藥工業(yè)和科研、生方面得到科學(xué)的保證及國際技術(shù)和貿(mào)易交流，同時也造成制藥工業(yè)和科研、生產(chǎn)部門人力、物力的浪費(fèi)，不利于人類醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。產(chǎn)部門人力、物力的浪費(fèi)，不利于人類醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。

17、 由由美國、日本和歐盟三方的政府藥品注冊部門和制藥行業(yè)在美國、日本和歐盟三方的政府藥品注冊部門和制藥行業(yè)在1990年發(fā)起建立年發(fā)起建立ICH 美、日、歐開始了雙邊對話，研討協(xié)調(diào)的可能性，直至美、日、歐開始了雙邊對話，研討協(xié)調(diào)的可能性，直至1989年在巴黎召開的國家藥品管理當(dāng)局會議（年在巴黎召開的國家藥品管理當(dāng)局會議（ICDRA）后，才開）后，才開始制定具體實(shí)施計(jì)劃。此后三方政府注冊部門與國際制藥工始制定具體實(shí)施計(jì)劃。此后三方政府注冊部門與國際制藥工業(yè)協(xié)會聯(lián)合會（業(yè)協(xié)會聯(lián)合會（IFPMA）聯(lián)系，討論由注冊部門和工業(yè)部門）聯(lián)系，討論由注冊部門和工業(yè)部門共同發(fā)起國際協(xié)調(diào)會議可能性。共同發(fā)起國際協(xié)調(diào)會

18、議可能性。 1990年年4月歐洲制藥工業(yè)聯(lián)合會（月歐洲制藥工業(yè)聯(lián)合會（EFPIA）在布魯塞爾召開由）在布魯塞爾召開由三方注冊部門和工業(yè)部門參加的國際會議，討論了三方注冊部門和工業(yè)部門參加的國際會議，討論了ICH目標(biāo)目標(biāo)和任務(wù)，成立了和任務(wù)，成立了ICH指導(dǎo)委員會。指導(dǎo)委員會。 會議決定每兩年召開一次會議決定每兩年召開一次ICH會議會議，由三方輪流主辦。，由三方輪流主辦。 第一次指導(dǎo)委員會協(xié)調(diào)了選題，一致認(rèn)為應(yīng)以安全性、質(zhì)量第一次指導(dǎo)委員會協(xié)調(diào)了選題，一致認(rèn)為應(yīng)以安全性、質(zhì)量和有效性三個方面制定的技術(shù)要求作為藥品能否批準(zhǔn)上市的和有效性三個方面制定的技術(shù)要求作為藥品能否批準(zhǔn)上市的基礎(chǔ)，并決定起草文

19、件。同時，每個文件成立了專家工作組基礎(chǔ)，并決定起草文件。同時，每個文件成立了專家工作組（EWG），討論科學(xué)技術(shù)問題。后來，隨著工作的深入開展，），討論科學(xué)技術(shù)問題。后來，隨著工作的深入開展，認(rèn)為電子通訊和術(shù)語的統(tǒng)一，應(yīng)作為互讀文件的基礎(chǔ)。因此，認(rèn)為電子通訊和術(shù)語的統(tǒng)一，應(yīng)作為互讀文件的基礎(chǔ)。因此，增加了增加了“綜合學(xué)科綜合學(xué)科”，并成立了子課題。，并成立了子課題。 2 2概況及組織機(jī)構(gòu)概況及組織機(jī)構(gòu) ICH是由歐盟、美國和日本三方的藥品注冊部門和生是由歐盟、美國和日本三方的藥品注冊部門和生產(chǎn)部門組成，六個參加單位分別為：產(chǎn)部門組成，六個參加單位分別為： -歐盟，歐盟，European Unio

20、n (EU) -歐洲制藥工業(yè)協(xié)會聯(lián)合會，歐洲制藥工業(yè)協(xié)會聯(lián)合會，European Federation of Pharmaceutical Industries Associations (EFPIA) -日本厚生省，日本厚生省，Ministry of Health and Welfare，Japan (MHW) -日本制藥工業(yè)協(xié)會，日本制藥工業(yè)協(xié)會，Japan Pharmaceutical Manufacturers Association (JPMA) -美國食品與藥品管理局，美國食品與藥品管理局，US Food and Drug Administration(FDA) -美國藥物研究和生

21、產(chǎn)聯(lián)合會，美國藥物研究和生產(chǎn)聯(lián)合會，Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PRMA) 世界衛(wèi)生組織（World Health Organization, WHO）、歐洲自由貿(mào)易區(qū)（European Free Trade Area, EFTA）和加拿大衛(wèi)生保健局（Canadian Health Protection Branch, CHPB）作為觀察員觀察員； 國際制藥工業(yè)協(xié)會聯(lián)合會（International Federation of Pharmaceutical Manufacturers Associations, I

22、FPMA）作為制藥工業(yè)的保護(hù)傘保護(hù)傘組織組織參加協(xié)調(diào)會。 ICH秘書處設(shè)在日內(nèi)瓦日內(nèi)瓦IFPMA總部總部。 ICH由指導(dǎo)委員會、專家工作組和秘書處組成： （1）指導(dǎo)委員會）指導(dǎo)委員會 （the Streering Committee, SC）指導(dǎo)委員會共有14名成員，由六個參加單位和IFPMA各派兩名代表組成。指導(dǎo)委員會主要領(lǐng)導(dǎo)ICH會議并協(xié)調(diào)工作進(jìn)展。每年召開2-3次會議，分別由主辦國管理部門的代表主持會議，三個觀察員組織可分別排1名代表列席指導(dǎo)委員會會議。指導(dǎo)委員會對2和4兩個關(guān)鍵階段進(jìn)行討論，做出決定。 （2）專家工作組）專家工作組 （Expert Working Groups, EWG

23、）專家工作組是指導(dǎo)委員會的技術(shù)顧問，六個主辦單位對每個起草文件的專題派若干專家參加，其中1名任專題組長。 (3）秘書處）秘書處秘書處設(shè)在日內(nèi)瓦IFPMA總部。主要負(fù)責(zé)指導(dǎo)委員會及專家工作組會議的準(zhǔn)備工作和有關(guān)文件的起草，并負(fù)責(zé)與各組的協(xié)調(diào)員聯(lián)系，以保證將討論的文件按時發(fā)送到有關(guān)人員。藥品質(zhì)量控制規(guī)范文件藥品質(zhì)量控制規(guī)范文件通用方法通用方法賦形劑（賦形劑（12個品種）標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一個品種）標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一減少動物試驗(yàn)減少動物試驗(yàn)加強(qiáng)體內(nèi)等效性研究加強(qiáng)體內(nèi)等效性研究注重提高維生素等營養(yǎng)保健藥品的質(zhì)量注重提高維生素等營養(yǎng)保健藥品的質(zhì)量加強(qiáng)藥品安全保障加強(qiáng)藥品安全保障(說明書的規(guī)范化等說明書的規(guī)范化等)新分析檢

24、測技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用新分析檢測技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用3. ICH3. ICH協(xié)調(diào)工作的原則及進(jìn)展協(xié)調(diào)工作的原則及進(jìn)展 協(xié)調(diào)的專題共分四個類別：協(xié)調(diào)的專題共分四個類別： -安全性（安全性（safety，包括藥理、毒理、藥代等試驗(yàn)），以，包括藥理、毒理、藥代等試驗(yàn)），以“S”表示，現(xiàn)已制定表示，現(xiàn)已制定16個文件；個文件； -質(zhì)量（質(zhì)量（Quality，包括穩(wěn)定性、驗(yàn)證、雜質(zhì)、規(guī)格等），包括穩(wěn)定性、驗(yàn)證、雜質(zhì)、規(guī)格等），以以“Q”表示，現(xiàn)已制定表示，現(xiàn)已制定12個文件；個文件； -有效性（有效性（Efficacy，包括臨床試驗(yàn)中的設(shè)計(jì)、研究報告、，包括臨床試驗(yàn)中的設(shè)計(jì)、研究報告、GCP等），以等），以“E

25、”表示，現(xiàn)已制定表示，現(xiàn)已制定14個文件；個文件； -綜合學(xué)科（綜合學(xué)科（Multidisciplinary，包括術(shù)語、管理，包括術(shù)語、管理 等），以等），以“M”表示，現(xiàn)已制定表示，現(xiàn)已制定4個文件。個文件。Quality Safety Efficacy Analytical Validation Impurities Stability tests guidance for setting specifications for new drugs and products ICH 已就藥品安全性、質(zhì)量、有效性等頒發(fā)了近50個文件，其中有關(guān)藥品的質(zhì)量及穩(wěn)定性

26、、標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證等內(nèi)容的文件以“Q”編號，和我們分析質(zhì)量控制密切相關(guān)的主要是Q開頭的10余個文件； 其中Q2A介紹了有關(guān)分析方法質(zhì)量控制的術(shù)語，Q2B則介紹了方法學(xué)研究的具體要求和方法。目前，這兩個文件已成為國際公認(rèn)的對醫(yī)藥品分析方法進(jìn)行驗(yàn)證的基本原則。 5.4.3 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 （中國藥典2000、2005年版附錄 A ）1 1、 概述概述目的：目的： 證明方法的科學(xué)性和可行性，證明方法的科學(xué)性和可行性， 符合相應(yīng)檢測要求符合相應(yīng)檢測要求要求：要求：按規(guī)定分析項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容設(shè)計(jì)和完成實(shí)驗(yàn)按規(guī)定分析項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容設(shè)計(jì)和完成實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果均應(yīng)記載過程和結(jié)果均應(yīng)記載 在藥品標(biāo)準(zhǔn)研究資料中

27、在藥品標(biāo)準(zhǔn)研究資料中 意義意義: 規(guī)范化、科學(xué)性、通用性規(guī)范化、科學(xué)性、通用性應(yīng)用：應(yīng)用： 驗(yàn)證分析方法 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草。生產(chǎn)工藝或制劑處方變更時對原分析方法修訂。證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求 規(guī)定了建立或改進(jìn)方法必須按標(biāo)準(zhǔn)格式遞交報告； 要求清楚地介紹建立或改進(jìn)方法的目的、必要性及其特點(diǎn)，完整地?cái)⑹龇椒?，列出所需的儀器、試劑藥品、操作步驟、注意事項(xiàng)、計(jì)算公式等； 要求列出按標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)Ψ治龇椒ㄟM(jìn)行驗(yàn)證的方法、數(shù)據(jù)和結(jié)論，以充分證實(shí)所建立分析方法的可靠性和可行性。2、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目 鑒別試驗(yàn)； 雜質(zhì)定量或限度檢查； 原料或制劑中有效成分含量測定； 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑

28、等）的測定； 溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測試方法。 3、驗(yàn)證內(nèi)容 準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、 專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性 準(zhǔn)確度（accuracy）準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。 測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。 回收試驗(yàn) 空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M%100AMR空白回收率 加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M%100APMR 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制

29、備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。 含量測定方法的準(zhǔn)確度含量測定方法的準(zhǔn)確度 原料藥原料藥可用已知純度的對照品或可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。進(jìn)行比較。 制劑制劑可用含己知量被測物的各組可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與另一個

30、已建立準(zhǔn)確度的方法定，或與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。比較結(jié)果。 中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在9595105%105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在繁多時，可要求在9090110%110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。RSDRSD一般在一般在2%2%以內(nèi)。以內(nèi)。 雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如果不能得到雜質(zhì)或雜質(zhì)進(jìn)行測定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)

31、果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。成熟的方法進(jìn)行比較。 精密度（精密度（precisionprecision） 精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（間的接近程度。用偏差（d d）、標(biāo)準(zhǔn)偏）、標(biāo)準(zhǔn)偏差差( (SDSD) )、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差( (RSDRSD) )（變異系（變異系數(shù)，數(shù)，CVCV）表示。）表示。 允許誤差 容量分析（中和法、非水滴定法、銀量法、絡(luò)合滴定法、重氮化法、氧化還原法）0.3%；重量法 0.5%； 氧瓶燃燒法 0.5%；凱氏定氮法 1%;儀器分析 3% 重

32、復(fù)性重復(fù)性(repeatability):(repeatability):在相同在相同條件下，由同一個分析人員測定所得條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用少用9 9次測定結(jié)果評價，如制備三個次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作度當(dāng)作100%100%，至少測，至少測6 6次進(jìn)行評價。次進(jìn)行評價。 中間精密度中間精密度 同一實(shí)驗(yàn)室，不同同一實(shí)驗(yàn)室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。得結(jié)果的精密度。 重現(xiàn)性重現(xiàn)性(reproduci

33、bility)(reproducibility)不同不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。精密度。 數(shù)據(jù)要求：需報告數(shù)據(jù)要求：需報告RDRD，RSDRSD和可和可信限。信限。 檢測限檢測限（limit of detectionlimit of detection， LODLOD） 檢測限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)檢測限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測物能被檢測出的最低條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。濃度或含量。 屬限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定屬限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。定濃度即可。 非儀器分

34、析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。被可靠地檢測出的最低濃度或量。信噪比法信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（的最低濃度或量。一般以信噪比（S/NS/N）3131或或2121時的相應(yīng)濃度或注入儀器時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。的量確定檢測限。 （1）空白值0時；測

35、定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差b。將b乘以三倍；在工作曲線上求出3b相對應(yīng)的濃度Xb；即為方法的檢出值；（2）空白值不等于0；測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差b ；將b 乘以三倍；在工作曲線上求出3 b 相對應(yīng)的濃度Xb ；將求得的對應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。 定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為101時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可按1984年國際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IVPAC)規(guī)定：用儀器所測空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為

36、估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測定下限。 儀器分析：通過測定一組空的樣品的背景信號后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差S。以1OS來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗(yàn)證） 非儀器分析：通過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個樣品中被測物可被準(zhǔn)確和精密測定出的最低濃度（量）。注意問題 檢測限、定量限和靈敏度的區(qū)別檢測限、定量限和靈敏度的區(qū)別 消除空白的局限性消除空白的局限性檢測限、定量限和靈敏度的區(qū)別檢測限、定量限和靈敏度的區(qū)別 檢測限（detection limit）系指試樣中被測物能被檢測出的最低量 ； 定量限（quantitation limit）系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具定量分析方

37、法應(yīng)達(dá)到的準(zhǔn)確度和精密度。 靈敏度(sensitivity)指的是分析信號隨組分含量變化的大小。 一個分析方法的靈敏度常用校正曲線的斜率表一個分析方法的靈敏度常用校正曲線的斜率表示。校正曲線的斜率越大，單位濃度信號改變示。校正曲線的斜率越大，單位濃度信號改變值越大，則方法靈敏度越高。值越大，則方法靈敏度越高。 嚴(yán)格來說，方法的靈敏度還和實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的分布有嚴(yán)格來說，方法的靈敏度還和實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的分布有關(guān)，若實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和校準(zhǔn)點(diǎn)的誤差即殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏關(guān)，若實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和校準(zhǔn)點(diǎn)的誤差即殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差為差為SE，則可按斜率，則可按斜率SE計(jì)算靈敏度。計(jì)算靈敏度。 這里應(yīng)注意靈敏度并不表示該方法最低檢測這里應(yīng)注意靈敏度并不表示

38、該方法最低檢測的量。的量。 離子選擇性電極法：靈敏度和測定離子電荷有關(guān)；檢測限則根據(jù)電極響應(yīng)原理和響應(yīng)膜的溶度積有關(guān) 如電極法測定-，反映靈敏度的響應(yīng)斜率為，檢測限約為；而測定的響應(yīng)斜率為，檢測限約為0.005。若-和2+的校準(zhǔn)曲線殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差基本相同，測定-的靈敏度比測定2+要高一倍，但檢測限要比測2+差得多。消除空白的局限性消除空白的局限性 分析空白往往對痕量分析的準(zhǔn)確度、精密度和檢測下限起著決定性的作用。 分析空白廣義上實(shí)際包括樣品的玷污（正空白）、樣品的損失（負(fù)空白）和儀器噪音。 在痕量和超痕量分析中，把樣品的玷污而引起的正空白稱為分析空白。分析空白對痕量分析結(jié)果的準(zhǔn)確度起著決定性的

39、作用，其影響程度和被測組分的含量水平直接有關(guān)。105ng空白值對測定結(jié)果準(zhǔn)確度的影響空白值對測定結(jié)果準(zhǔn)確度的影響 若為常規(guī)分析，應(yīng)該預(yù)先建立起分析空白的控制圖，扣除控制圖中的空白統(tǒng)計(jì)平均值； 若未能建立控制圖，也應(yīng)該扣除空白值，空白值應(yīng)取對多個空白樣本測試的空白平均值。 專屬性（專屬性（specificityspecificity）選擇性（選擇性（selectivityselectivity）的量度）的量度 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，能反映該方法在有下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，

40、能反映該方法在有共存物時對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力，是指該法用于復(fù)雜共存物時對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時是否受到相互干擾程度的度量。樣品分析時是否受到相互干擾程度的度量。鑒別反應(yīng) 能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。問題: 比較以下鑒別方法的專屬性 官能團(tuán)化學(xué)鑒別; 高效液相色譜保留; 薄層液相色譜比移值; 紫外分光光度法; 紅外分光光度法 含量測定和雜質(zhì)測定 加有雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品。 破壞性試驗(yàn) 粗品 所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測試結(jié)果

41、的差別即反映方法的專屬性。色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦說明專屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明各組份的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求 線性（Linearity） 在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 線性通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率來表示。 數(shù)據(jù)要求：至少需要5個濃度考察線性，需提供相關(guān)系數(shù)，列出回歸方程和線性圖。 一般|0.99，可認(rèn)為線性關(guān)系可符合常規(guī)分析要求。 亦可由根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合的方程y=axn+b中n的大小來確定；有文獻(xiàn)報道應(yīng)用色譜定量方法時0.9n99.599.5) )或?qū)φ掌房蓟驅(qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏龋鄬?biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于察方法的精密度，相對

42、標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.20.2；進(jìn)行回收率試驗(yàn)，；進(jìn)行回收率試驗(yàn)，回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之間之間。 UV UV法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測定，其定，其RSDRSD一般不大于一般不大于1 1。制劑的測定，回收率一般應(yīng)在制劑的測定，回收率一般應(yīng)在9898102102之間。之間。 線性：吸光度線性：吸光度A A一般在一般在0.7，濃度點(diǎn)濃度點(diǎn)n n5 5。用濃度。用濃度c c對對A A作線性回歸處作線性回歸處理，得一直線方程，理，得一直線方程，r r應(yīng)達(dá)到應(yīng)達(dá)到0.9999(n0.9999(n5)5)，方程的截距應(yīng)近

43、于零。，方程的截距應(yīng)近于零。 HPLC HPLC法：要求法：要求RSD2RSD0.1%及一類新藥）及一類新藥）其 它 雜 質(zhì) 檢 查 的 要 求 在生產(chǎn)過程中如使用有害的有機(jī)溶劑，應(yīng)按照藥典規(guī)定的有機(jī)溶劑殘留量檢查法檢查，并應(yīng)符合規(guī)定。 對制劑一般還要求應(yīng)符合制劑通則項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。 對注射用無菌粉末應(yīng)進(jìn)行澄明度等的檢查。在用色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時，首先應(yīng)按藥典附錄要求考察系在用色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時，首先應(yīng)按藥典附錄要求考察系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。常用以下幾種方法進(jìn)行方法考察：統(tǒng)適用性試驗(yàn)。常用以下幾種方法進(jìn)行方法考察： l 如能獲得已知雜質(zhì)作對照，可在原料中加入適量，證明能如能獲得已知雜質(zhì)作對照，可在

44、原料中加入適量，證明能達(dá)到分離。達(dá)到分離。 l 如雜質(zhì)未知，或不能獲得雜質(zhì)作對照，則可用含雜質(zhì)的樣如雜質(zhì)未知，或不能獲得雜質(zhì)作對照，則可用含雜質(zhì)的樣品（或未經(jīng)精制的粗品原料）進(jìn)行試驗(yàn)，證明能達(dá)到分離。品（或未經(jīng)精制的粗品原料）進(jìn)行試驗(yàn)，證明能達(dá)到分離。 l 破壞性試驗(yàn)破壞性試驗(yàn) 可用已精制的原料藥經(jīng)光照或溫度、濕度等可用已精制的原料藥經(jīng)光照或溫度、濕度等影響或經(jīng)酸、堿加熱分解、氧化后的樣后進(jìn)行試驗(yàn)，證明能影響或經(jīng)酸、堿加熱分解、氧化后的樣后進(jìn)行試驗(yàn)，證明能達(dá)到分離。達(dá)到分離。 以上三種考察方法并可與其他方法作比較，以決定方法以上三種考察方法并可與其他方法作比較，以決定方法的選擇。的選擇。 有機(jī)溶劑殘留量，基于某些有機(jī)溶劑具有致癌、致突變的性質(zhì)，應(yīng)避免或限制作用。如果生產(chǎn)工藝中使用了應(yīng)避免使用的苯、四氯化碳、1，2二氯乙烷