常用抗凝劑及其配置法

1、常用抗凝劑的配制及用法在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常需動(dòng)物的全身抗凝， 采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)目鼓?劑抗凝。對(duì)抗凝劑的要求是：用量少、溶解度大、不帶進(jìn)干擾實(shí)驗(yàn)的雜質(zhì)。一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很強(qiáng) ,作死亡復(fù)蘇等實(shí)驗(yàn)時(shí) ,常用它作動(dòng)物全身抗凝劑，肝素 的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力， 阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等 作用，從而使血液不發(fā)生凝固。（2）配制和用量純的肝素10mg能抗凝65125 ml血液（按Img等于125U, 1020U能抗1 ml 血液計(jì) ）。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時(shí)間長(zhǎng)短不等，因而其抗凝 效果也不相同。一般可配成 1 肝素生理鹽溶液,用時(shí)取

2、 01 毫升于試管內(nèi), 100 C烘干，每管能抗凝510ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤(rùn)一下 管壁,直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。 在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作全身抗凝時(shí), 一般劑量 為：大白鼠 2530mg/200 300g 體質(zhì)量，兔 10mgkg 體質(zhì)量，狗 5 10mgkg 體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋 白質(zhì)各部分的測(cè)定時(shí)， 不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素 12500U， 相當(dāng)于 100mg 。（3）注意事項(xiàng)做全血 DNA 提取的時(shí)候抗凝劑不能采用肝素！因?yàn)楦嗡厥蔷酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng) 的抑制劑！二、草酸鹽合劑（1）原理草酸胺能使血細(xì)胞略為膨大， 而草酸鉀

3、能使血細(xì)胞微縮小， 因此草酸銨與草 酸鉀按 3： 2 比例配置，可使血細(xì)胞體積保持不變；加福爾馬林則能防止微生物 在血中繁殖。此抗凝劑最適于作紅細(xì)胞比積測(cè)定。（2）配制方法及用量草酸銨 1 2g 、草酸鉀 0 8g 、福爾馬林 1 0 m l 、蒸餾水加至 100ml 每毫 升血加草酸鹽合劑0 1ml（即相當(dāng)草酸銨1. 2mg，草酸鉀0. 8mg）。根據(jù)取血量將計(jì)算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取05ml 于試管，烘干后每管可使 5ml 血不凝固。（3）注意事項(xiàng)草酸的作用在于能夠沉淀血凝過程中所必需的鈣離子， 而達(dá)到抗凝目的。 用 時(shí)注意加的量應(yīng)適中， 不能過多， 以免妨礙去蛋白質(zhì)血

4、濾液的制取。 不適用于血 液內(nèi)鈣或鉀的測(cè)定，也不能用于血液非蛋白氮測(cè)定。三、枸櫞酸鈉常配成35%水溶液。也可直接加粉劑，每毫升血加35mg ,即可達(dá)到抗 凝目的。枸櫞酸鈉可使鈣失去活性，防止凝血。但其抗凝作用較差，堿性較強(qiáng)，不宜 作化學(xué)檢驗(yàn)之用。 僅可用于紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定。 急性血壓測(cè)定實(shí)驗(yàn)所用枸櫞酸 鈉為 56溶液。四、草酸鉀（一）原理和注意事項(xiàng)草酸鉀為最常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結(jié)合， 形成不溶解的草酸鈣， 使血液不凝固。 常用于非蛋白氮測(cè)定， 但不適用于測(cè)定鉀 和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故應(yīng)注意。（二）配制及使用方法取草酸鉀 10g

5、 ，加蒸餾水少許使溶解，再加蒸餾水至 100ml 。配制成 10 水溶液，如每管加 0.1ml 則可使 510ml 血不凝。一般如作微量檢驗(yàn)，用血量較 少，可配制成 2溶液，如每管加 01ml 可使 12ml 血液不凝。五、乙二胺四乙酸二鈉鹽（ EDTA）EDTA 對(duì)血液中鈣離子有很大的親和力，能與鈣離子絡(luò)合而使血液抗凝。每0.8mg 可抗凝 1ml 血液。除不能用于血漿中鈣、鈉及含氮物質(zhì)之測(cè)定外，適用 于多種抗凝。六、（酸性）檸檬酸葡萄糖溶液B （ACD）（用于新鮮抽提或者是凍存的血 樣品， 實(shí)驗(yàn)室常用 ）檸檬酸鈉： 1.32% （ M/V ）檸檬酸：0.48% (M/V)葡萄糖： 1.47

6、% （M/V）ACD抗凝劑為：檸檬酸0.48g、檸檬酸鈉1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml , 滅菌后備用一般 20ML 新鮮血液中加入 3.5ML ACD 抗凝劑。比例依次類推！血液可以在 0 度條件下保存數(shù)天，或者是零下 70 度條件下無限期保存！從全血中制備基因組DNA, ACD做為抗凝劑要優(yōu)于EDTA,因?yàn)樗幽鼙?存高分子質(zhì)量的DNA，然而，血樣常常被收集于用定量 EDTA作為抗凝劑的小 管中。在大多數(shù)美國(guó)的醫(yī)院中， 收集血樣的小管均用顏色標(biāo)明是否含有抗凝劑， 紫 色頂管蓋的小管一般含有抗凝劑， 通常是 EDTA 的干粉。 黃色頂蓋的小管不含抗 凝劑。在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，前者一般用于收集血樣用于制備基因組的DNA，后者用于收集血樣作為用EB病毒的永生化