動(dòng)物藥學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)地塞米松磷酸鈉對(duì)雄性小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響

1、河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）地塞米松磷酸鈉對(duì)雄性小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響姓名院（系）動(dòng)物科技學(xué)院 專業(yè)班級(jí)動(dòng)物藥學(xué)091指導(dǎo)教師2013年6月6日畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）任務(wù)書（指導(dǎo)教師填寫）填表時(shí)間：2011年1月12日學(xué)生姓名專業(yè)班級(jí)動(dòng)植檢072指導(dǎo)教師課題類型論文設(shè)計(jì)（論文）題目環(huán)境水平三苯基錫對(duì)雄性SD大鼠生殖毒性的研究主要研究?jī)?nèi)容本試驗(yàn)以青春期SD大鼠作為研究對(duì)象，采用低水平（0.5、5、50 g/kg）的三苯基錫（Triphenyltin，TPT），進(jìn)行54 d的暴露，比較對(duì)照組和各濃度暴露組大鼠體重、睪丸重、附睪重、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)，確定TPT對(duì)睪丸發(fā)育的影響；將附睪內(nèi)的精子進(jìn)行涂片觀察

2、并計(jì)算精子畸形率、精子相對(duì)數(shù)；檢測(cè)各組大鼠睪丸酶堿性磷酸酶（AKP）、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(-GT）和總抗氧化能力（T-AOC）水平，并采用石蠟切片和HE染色技術(shù)觀察各試驗(yàn)組睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)的變化，以初步探討TPT對(duì)雄性大鼠生殖的毒性作用及機(jī)理，為分析預(yù)測(cè)環(huán)境TPT污染對(duì)動(dòng)物以及人類健康的影響提供依據(jù)。主要技術(shù)指標(biāo)(或研究目標(biāo))1比較試驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠體重、睪丸重、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)；2精子數(shù)量及其畸形率、精子相對(duì)數(shù)；3檢測(cè)大鼠睪丸AKP、-GT和T-AOC水平；4通過本試驗(yàn)，掌握石蠟切片的制作技術(shù)；5觀察并總結(jié)染毒后大鼠睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)變化規(guī)律；6本項(xiàng)試驗(yàn)查閱20篇以上與本題有關(guān)的文獻(xiàn)資料；撰

3、寫不少于1萬字的論文；中文摘要400字以上，且譯成外文；獨(dú)立完成1萬字以上印刷字符與本題有關(guān)的外語譯文。進(jìn)度計(jì)劃2011年1月12日：下達(dá)畢業(yè)論文任務(wù)書；2011年1月12日2月25日：查閱資料，撰寫開題報(bào)告；2011年2月25日4月30日：購(gòu)買藥品和材料，預(yù)實(shí)驗(yàn)；正式實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)檢測(cè)分析；2011年5月1日6月：撰寫畢業(yè)論文；修改論文，預(yù)答辯。主要參考文獻(xiàn)1 呂華東，林麒有機(jī)錫污染及其毒性作用研究現(xiàn)狀J海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2007，13(03)：27-292 林春芳，呂華芳有機(jī)錫的生殖毒性和遺傳毒性研究進(jìn)展，海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2008，14（1）：23-253詹寧育，王心如，王沭沂辛硫磷與氰戊菊

4、酯對(duì)大鼠睪丸的聯(lián)合毒性作用J中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2001，19(4)：261-2654 D. Annanie, 黃玉瑤氯化二丁基錫對(duì)雄性小鼠睪丸和精子質(zhì)量的影響動(dòng)物學(xué)報(bào)J2000, 46(4): 392-3985 whalen MM, Wilson S, Gleghorn C, et a1. Brief exposure to triphenyhin produces irreversible inhibition of the cytotoxic functionof human naturals killer cells J. Environ Res, 2003, 92(3): 2l3

5、-2206 Golub M, Doherty J. Triphenyhin as a potential human endocrine disruptorJ. Taxical Environ Health B Crit Rev. 2004,7(4): 281-295教研室主任簽字：年月日地塞米松磷酸鈉對(duì)雄性小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響摘要為了研究環(huán)境水平三苯基錫（TPT）對(duì)雄性哺乳動(dòng)物生殖的毒性作用，本試驗(yàn)將20只雄性青春期SD大鼠隨機(jī)分為3個(gè)不同劑量的試驗(yàn)組(0.5、5、50 g/kg)和1個(gè)對(duì)照組(生理鹽水)。每3天灌胃一次，暴露54天，末次灌胃24 h后用10%水合氯醛麻醉并處死大鼠，處死前

6、稱量每只大鼠的體重，取睪丸和附睪并稱其重量，計(jì)算睪丸和附睪指數(shù)；制作精子涂片觀察附睪內(nèi)精子形態(tài)并統(tǒng)計(jì)其畸形率；采用石蠟切片和HE染色的方法觀察睪丸和附睪組織學(xué)變化特點(diǎn)；采用分光光度法測(cè)定睪丸中堿性磷酸酶（AKP）、總抗氧化能力（T-AOC）和-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(-GT）水平。結(jié)果顯示，TPT暴露組與對(duì)照組相比，低、中劑量組大鼠睪丸指數(shù)升高，高劑量組降低，而低、高劑量組大鼠附睪指數(shù)降低，中劑量組升高，但差異均不顯著(P<0.05)；精子畸形率隨藥物劑量的增加顯著升高；大鼠睪丸內(nèi)曲精小管直徑隨藥物劑量的增加而減小，曲精小管生精細(xì)胞和管腔內(nèi)精子數(shù)量均有不同程度減少；低、中劑量組AKP高于對(duì)照組，高

7、劑量組低于對(duì)照組，但差異不顯著（P<0.05）；低劑量組-GT活力和T-AOC顯著高于對(duì)照組，中劑量組與對(duì)照組相比變化不明顯，高劑量組顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。本試驗(yàn)證實(shí)了TPT在一定程度上影響了大鼠生殖器官和精子的生長(zhǎng)與發(fā)育，推測(cè)TPT對(duì)雄性哺乳動(dòng)物的生殖具有毒性作用。關(guān)鍵詞：環(huán)境水平，三苯基錫，雄性大鼠，生殖毒性文獻(xiàn):中華男科學(xué),2003年二月陳蕾蕾姚兵綜述黃宇烽審校REPRODUCTIVE TOXICITY OF ENVIRONMENTAL TRIPHENYLTIN ON MALE SD RATSABSTRACTTo study the effects ofenviro

8、nment leveltriphenyltin (TPT) on mammalianmale reproductivetoxicity,20 healthy SD adult male rats were randomly divided into four groups. Different doses of triphenyltin (TPT) (0, 0.5, 5 and 50 g/kg) were administrated to the rats every 3 days for 54 days. The mouses were killed when they were anest

9、hetized with 10% chloral hydrate after the last test substance given for 24 h.Each rat's body weight, the weight of testis and epididymis were weighted, testis and epididymis index were calculated; sperm morphology was observed and the abnormal rate was calculated by epididymal sperm smears; the

10、 changes of the testis and epididymis were observed by paraffin sections and HE staining; the level of alkaline phosphatase(AKP),total antioxidant capacity(T-AOC)and -glutamyl GGT(-GT)in testicular enzyme weredetermined by spectrophotometion. Compared with the control group , it showed that, the tes

11、tis index of rat in low and middle dose group increased and that in high-dose group decreased, but epididymal index of rats in low and high dose group decreased and that in the middle dose group increased, the differences were not Significant (P<0.05); sperm abnormal rate increased with increasin

12、g TPT significantly; rat testis seminiferous tubule diameter increased with increasing TPT, but seminiferous tubule germ cells and sperm decreased varying degrees; compared with the control group, the level of AKP in testis of rats in low and middle dose group increased but that decreased in high do

13、se group, the difference was not significant (P<0.05); the level of -GT and T-AOC in testis of rats in low dose increased significantly, that in middle dose group did not change significantly, that in high dose group was significantly decreased (P<0.05). This experiment confirms TPT influences

14、 rat reproductive organs development and sperm growth, we presume TPT may have reproduction toxic to male mammals. KEY WORDS:Environmental level，Triphenyltin，Male Rat，Reproductive toxicity目錄1 前言11.1 有機(jī)錫化合物的性質(zhì)與應(yīng)用11.2 有機(jī)錫化合物的污染現(xiàn)狀11.3 有機(jī)錫化合物對(duì)機(jī)體的毒性作用11.4 睪丸結(jié)構(gòu)及精子的生成31.5 睪丸標(biāo)志性酶的功能31.6 本試驗(yàn)的目的及意義42 材料與方法42.

15、1 試驗(yàn)動(dòng)物及處理取材42.2 試驗(yàn)儀器與試劑5試驗(yàn)試劑5試驗(yàn)儀器52.3 檢測(cè)項(xiàng)目及方法5體重、睪丸、附睪、睪丸指數(shù)5精子畸形率的測(cè)定5組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察5各種生化指標(biāo)的測(cè)定62.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法63 結(jié)果63.1 TPT暴露后SD大鼠體重、睪丸和附睪重量及其臟器指數(shù)的變化63.2 TPT暴露后SD大鼠精子形態(tài)的變化83.3TPT暴露后SD大鼠睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)的變化93.4 TPT暴露后SD大鼠睪丸標(biāo)志性酶的變化134 討論144.1 TPT對(duì)SD大鼠生殖器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響144.2 TPT對(duì)SD大鼠睪丸標(biāo)志性酶的影響155 結(jié)論16參考文獻(xiàn)17致謝20外文資料譯文211 前言1.1 有機(jī)錫化合

16、物的性質(zhì)與應(yīng)用有機(jī)錫化合物是錫和碳元素直接結(jié)合所形成的金屬有機(jī)化合物。通式RnSnX4（n=14，R為烷基或芳香基），有烷基錫化合物和芳香基化合物兩類。所有有機(jī)錫化合物都具有四價(jià)結(jié)構(gòu)。在常溫條件下，有機(jī)錫化合物多以固體或液體形式存在，它們一般都具有一定的極性、疏水性與難揮發(fā)性等特點(diǎn)，這類化合物的特殊結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)決定了他們的環(huán)境行為、生態(tài)毒理等一系列特性。隨著人們對(duì)有機(jī)錫化合物研究的不斷深入，其應(yīng)用的領(lǐng)域也在不斷擴(kuò)大，目前已廣泛應(yīng)用于催化化學(xué)、藥物化學(xué)、聚氯乙烯(PVC)穩(wěn)定劑、防污涂料、木材及紡織品防腐劑、工農(nóng)業(yè)殺蟲劑和殺菌劑及日常用品的涂料和防霉劑等。在自然環(huán)境中，這些化合物與熱、光、水、

17、氧、臭氧等的作用，會(huì)迅速分解。碳元素增多其毒性降低，故三丁基錫（Tributyltin，TBT）和三苯基錫（Triphenyltin，TPT）常用于農(nóng)藥和漁具防污劑，增大了向環(huán)境的釋入量。TPT是人造化學(xué)品，是一種重要的有機(jī)錫化合物，一般為無色或白色的固體或液體，通常幾乎不溶。目前主要用作農(nóng)作物殺蟲劑和海洋防污涂料。1.2 有機(jī)錫化合物的污染現(xiàn)狀防污涂料的釋放是有機(jī)錫進(jìn)人海洋環(huán)境的直接來源，國(guó)內(nèi)外大量相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)錫化合物的環(huán)境污染及其分布有一定的規(guī)律，各水域之間的濃度水平有很大差別，在同一地區(qū)也不盡相同。污染嚴(yán)重的地區(qū)多是船只活動(dòng)頻繁的地區(qū)，在沉積物表層2 cm內(nèi)出現(xiàn)最大濃度，然后隨深

18、度的增加而急劇下降，之后保持平緩下降的趨勢(shì)1。埃及Maryut湖沉積物中單丁基錫和二丁基錫與總丁基錫的比率隨深度的增加而增加2。我國(guó)長(zhǎng)江、黃河以及滇池、白洋淀等典型內(nèi)陸水域都發(fā)現(xiàn)了含量較高的丁基錫化合物的存在3；Forsyth和Casey（2003）在加拿大7個(gè)城市的主要超市軟體動(dòng)物產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)，TBT最高可達(dá)233ng/g。來自于亞洲東海岸和東南海岸的產(chǎn)品中的有機(jī)錫水平最高二丁基錫(DBT)和一丁基錫(MBT)濃度分別可達(dá)88和53 ng/g4。歐盟已經(jīng)先后發(fā)布過89/677/EEC、1999/51/EC和2002/62/EC，規(guī)定：“有機(jī)錫混合物用作游離締合的涂料中的生物殺滅劑時(shí)，不能在市場(chǎng)

19、上銷售?！毙抻啺秆a(bǔ)充，“2010年7月1日起，物品中不得使用錫含量超過0.1%的三取代有機(jī)錫化合物，如TBT和TPT。”由此可見，國(guó)際上對(duì)于有機(jī)錫潛在和存在的污染是高度重視的。1.3 有機(jī)錫化合物對(duì)機(jī)體的毒性作用有機(jī)錫化合物作為一種防污涂料被廣泛應(yīng)用于船體和海洋建筑的同時(shí)對(duì)環(huán)境的污染日趨嚴(yán)重，也導(dǎo)致海產(chǎn)品中殘留了大量的有機(jī)錫化合物。有機(jī)錫化合物可使海洋動(dòng)物性成熟和繁殖推遲，性畸變，致使其性別比例失調(diào)，威脅到它們的族群生存5，也可干擾哺乳動(dòng)物的內(nèi)分泌，導(dǎo)致生育力下降、胚胎畸形、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩還可誘發(fā)基因突變、染色體畸變和DNA損傷等遺傳毒性問題6；Grote et al.（2004）報(bào)道6 mg/

20、kg TPT影響青春期雄性大鼠的性發(fā)育7，林春芳等（2008）報(bào)道魚類生命早期階段暴露于TBT和TPT可引起胚胎發(fā)育畸形、孵化延遲或抑制、生育力下降、精子減少等生殖問題6；體外試驗(yàn)表明，TPT可以直接激活雄激素受體調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄，并能抑制參與類固醇激素代謝酶的活性。TPT對(duì)哺乳動(dòng)物是一種生殖毒物，對(duì)人類也可能具有內(nèi)分泌干擾作用8。對(duì)海洋的污染狀況、污染來源、有機(jī)錫化物對(duì)海洋生物以及人體健康的毒性等方面的試驗(yàn)證明：有機(jī)錫化合物，尤其是TPT和TBT，能夠引起雌性軟體動(dòng)物變性、哺乳細(xì)胞生殖毒性以及人類食用了含有機(jī)錫化合物的海產(chǎn)品后，通過食物鏈對(duì)人體健康可能造成極大損害，同時(shí)可以通過接觸聚氯乙烯塑料制品

21、等方式進(jìn)入人體，對(duì)人體健康可能造成潛在的危險(xiǎn)。2010年的一項(xiàng)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)錫甚至廣泛存在于人類住所灰塵中9。有機(jī)錫化合物一般可通過呼吸道、消化道和皮膚黏膜進(jìn)入機(jī)體，影響生物的生殖功能，干擾體內(nèi)激素的分泌造成生殖和遺傳的不良后果10。TBT和TPT對(duì)昆蟲、細(xì)菌、藻類等的毒性大，三甲基錫和三乙基錫對(duì)哺乳動(dòng)物毒性大。研究發(fā)現(xiàn)，三乙基錫進(jìn)入大鼠機(jī)體后，約50%能與血紅蛋白結(jié)合，肝和血液的濃度最高，腎、脾、心、腦和骨骼肌較少，經(jīng)口也呈類似分布。進(jìn)入機(jī)體的有機(jī)錫主要經(jīng)肝微粒體酶脫烷基二代謝轉(zhuǎn)化，最后大部分經(jīng)腎和消化道排出，本類物質(zhì)也可從唾液、乳汁排出，四乙基錫還可經(jīng)呼吸道黏膜排出11。Whalen(

22、2003)發(fā)現(xiàn)短期暴露于TPT會(huì)造成人類自然殺傷細(xì)胞(NK)的細(xì)胞毒功能的不可逆抑制。他們把新鮮、獨(dú)立的淋巴細(xì)胞暴露于二苯基錫(DPT)或TPT 1 h，然后脫離苯基錫培育6天。結(jié)果在750 nMTPT下暴露1 h后立即測(cè)定，發(fā)現(xiàn)會(huì)引起NK細(xì)胞毒功能抑制63±10%。但在暴露1 h后脫離24 h測(cè)定，細(xì)胞毒功能下降91±12%且6天后其抑制現(xiàn)象仍然存在12。有機(jī)錫化合物對(duì)生物體的主要損害為：中樞神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)造成腦白質(zhì)水腫，細(xì)胞能量利用中氧化磷酸化過程受障，胸腺和淋巴系統(tǒng)的抑制作用，細(xì)胞免疫性受妨害，激素分泌抑制引起糖尿病和高血脂病等。對(duì)人的毒性，局部對(duì)皮膚、呼吸道、角膜的刺激

23、作用，通過皮膚或腦水腫會(huì)引起全身中毒甚至死亡。1958年法國(guó)因用含三乙基錫的藥劑治療皮膚病而造成10%的死亡率（稱為斯特利農(nóng)時(shí)間）。TPT過度地暴露可能影響眼睛、免疫系統(tǒng)、肺、生殖系統(tǒng)、皮膚、咽喉和未出生的孩子，可能會(huì)導(dǎo)致癌癥6。有關(guān)報(bào)道指出人類每日通過海產(chǎn)品攝入的TPT在0.050.5 mg/kg，而出于對(duì)人類健康的考慮，WHO規(guī)定TBT和TPT的人體日允許攝入量為1.3和0.15g/kg 體重3。1.4 睪丸結(jié)構(gòu)及精子的生成生殖是生物的基本功能之一。高等動(dòng)物的生殖過程必須由雌、雄兩性個(gè)體共同完成。雄性生殖功能主要包括生精、保證性行為和調(diào)節(jié)生殖功能。睪丸為雄性的主要性器官，具有生精和內(nèi)分泌功

24、能。附睪是精子濃縮、成熟、貯藏和轉(zhuǎn)運(yùn)的部位。在附睪內(nèi)精子的形態(tài)和代謝都發(fā)生變化，變得成熟，并獲得運(yùn)動(dòng)和受精能力。然而附睪生殖功能的實(shí)現(xiàn)有取決于附睪上皮細(xì)胞的吸收和分泌。睪丸是重要的內(nèi)分泌器官，主要分泌雄激素和抑制素。睪丸表面覆以睪丸被膜。睪丸被膜包括鞘膜臟層、白膜和血管膜3層。白膜為致密堅(jiān)硬的結(jié)締組織，在睪丸后緣增厚形成睪丸縱隔。縱隔的結(jié)締組織呈放射狀伸入睪丸實(shí)質(zhì)把睪丸分隔為多個(gè)分隔間，形成小葉隔，分隔間充滿了彎曲的上皮性管道，稱為曲細(xì)精管。生精小管在近睪丸縱隔處變?yōu)槎潭钡闹本」?，直精小管進(jìn)入睪丸縱隔相互吻合形成睪丸網(wǎng)。曲細(xì)精管周邊為一結(jié)締組織薄層，即基膜，由彈性纖維及一些平滑肌細(xì)胞構(gòu)成。

25、生精上皮是曲細(xì)精管內(nèi)的主要結(jié)構(gòu)，它由支持細(xì)胞和各期生精細(xì)胞組成，附著于基膜之上。生精細(xì)胞包括精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞及長(zhǎng)形精子細(xì)胞。它們依序由曲細(xì)精管的基底部向管腔排列。初級(jí)精母細(xì)胞經(jīng)過第一次減數(shù)分裂形成次級(jí)精母細(xì)胞，體積比初級(jí)精母細(xì)胞小，細(xì)胞和細(xì)胞核均為圓形，核內(nèi)染色質(zhì)呈細(xì)網(wǎng)狀，著色較淺，細(xì)胞質(zhì)少。次級(jí)精母細(xì)胞存在時(shí)間較短，很快進(jìn)入第二次減數(shù)分裂，形成兩個(gè)精子細(xì)胞（圓形），染色體數(shù)目減半，成為單倍體細(xì)胞。由于次級(jí)精母細(xì)胞存在的時(shí)間短，在切片中較少見。精子細(xì)胞靠近管腔，細(xì)胞質(zhì)少，核圓形，染色較深，它不再分裂，經(jīng)過復(fù)雜的形態(tài)演變后形成精子。支持細(xì)胞比生殖細(xì)胞大得多，而且

26、形態(tài)復(fù)雜，成體的支持細(xì)胞不再分裂，它們支持著整個(gè)生精上皮，附著于生精上皮的基底層，并穿過生殖細(xì)胞間伸向管腔，為精子發(fā)生提供了一個(gè)合適的環(huán)境。每一個(gè)支持細(xì)胞支持的生精細(xì)胞數(shù)目相對(duì)恒定，支持細(xì)胞的總數(shù)對(duì)最終睪丸的重量及精子產(chǎn)量都有影響4。1.5 睪丸標(biāo)志性酶的功能精子的發(fā)生與成熟依賴于其生存內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、相關(guān)激素和酶類的調(diào)節(jié)。睪丸內(nèi)的睪酮釋放后，被選擇性輸送到曲細(xì)精管中，與曲細(xì)精管Sertoli細(xì)胞內(nèi)的雄激素受體及管腔中的雄激素結(jié)合蛋白結(jié)合，促使精子發(fā)生和成熟13。機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在著密切聯(lián)系，該防御體系有酶促與非酶促兩個(gè)體系，許多酶是以微量元素為活性中心，例如：超氧化物

27、岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）等，非酶促反應(yīng)體系中主要為維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)。例如：VE、胡蘿卜素、VC、半胱氨酸、乳鐵蛋白等。這個(gè)體系的防護(hù)氧化作用主要通過三條途徑：（1）消除自由基和活性氧以免引發(fā)脂質(zhì)過氧化：（2）分解過氧化物，阻斷過氧化鏈；（3）除去起催化作用的金屬離子。防御體系各成分之間相互起到了協(xié)同作用，以及代償作用與依賴作用14。堿性磷酸酶（AKP）是動(dòng)物代謝過程中重要的調(diào)控酶，能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類底物包括核酸、蛋白、生物堿等。而該脫去磷酸基團(tuán)的過程被稱為

28、去磷酸化或脫磷酸化。它是一種非特異性磷酸水解酶，磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，將磷酸基團(tuán)加到對(duì)應(yīng)底物分子上15。AKP能催化磷酸單脂的水解及磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，對(duì)動(dòng)物的生存具有重要的意義16。1.6 本試驗(yàn)的目的及意義近十多年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)多種有機(jī)錫化合物對(duì)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的影響有很多研究17。Thayser(1984)最早報(bào)道有機(jī)錫化合物對(duì)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)有抑制作用18。Sherman等（1988）發(fā)現(xiàn)高劑量三丁基錫和二丁基錫化合物引起小鼠胸腺和脾臟萎縮，小鼠體重降低；低劑量TBT對(duì)淋巴細(xì)胞功能也有抑制作用19。Annanie等（1988）報(bào)道TB

29、T對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響，并發(fā)現(xiàn)氯化二丁基錫影響最大20。關(guān)于有機(jī)錫化合物對(duì)哺乳動(dòng)物生殖系統(tǒng)影響的研究很少，只有Alam等（1993）報(bào)道過DBTL（二月桂酸二丁基錫）對(duì)大鼠繁殖的影響，而對(duì)哺乳動(dòng)物精子影響未見報(bào)道21。有資料表明，由于環(huán)境污染，人類的精子質(zhì)量明顯下降22,23。但是對(duì)于環(huán)境水平下的TPT含量對(duì)雄性哺乳動(dòng)物生殖的影響及機(jī)制還沒有比較全面的研究報(bào)道。本試驗(yàn)以青春期SD大鼠作為研究對(duì)象，采用低水平（0.5、5、50 g/kg）的TPT灌胃染毒，進(jìn)行54 d的暴露，稱量每只大鼠的體重、睪丸和附睪重量并計(jì)算睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)，精子涂片觀察附睪內(nèi)精子形態(tài)并計(jì)算畸形率，采用石蠟切片和HE染色

30、的方法觀察睪丸和附睪組織學(xué)變化，用分光光度法測(cè)定睪丸中堿性磷酸酶（AKP）、總抗氧化能力（T-AOC）和-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（-GT）水平；以初步探討TPT對(duì)雄性大鼠生殖機(jī)能的影響及其生殖毒性的作用機(jī)理，為分析預(yù)測(cè)環(huán)境TPT污染對(duì)動(dòng)物以及人類健康的影響提供依據(jù)。2 材料與方法2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組處理選健康的SPF級(jí)青春期SD大鼠20只（鄭州大學(xué)試驗(yàn)中心提供），隨機(jī)分為4組：3個(gè)不同劑量(0.5、5、50 g/kg)的處理組和對(duì)照組，每組5只。各TPT處理組均用配好的濃度液灌胃，對(duì)照組給予等量溶劑（生理鹽水和無水乙醇），每3日1次，暴露54 d。末次染毒24 h后用10%的水合氯醛麻醉動(dòng)物，眼眶采血

31、后處死，取雙側(cè)睪丸，稱重，分別進(jìn)行睪丸的形態(tài)學(xué)觀察。將一側(cè)睪丸和附睪放入多聚甲醛固定液中固定，另一側(cè)睪丸和附睪放入-20冰箱中凍存用于標(biāo)志性酶活性的測(cè)定。2.2 試驗(yàn)儀器與試劑試驗(yàn)試劑；蘇木精，分析純（AR），購(gòu)于成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20080725；伊紅，分析純（AR），購(gòu)于天津市津科精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20080727；二甲苯，分析純（AR），購(gòu)于煙臺(tái)市雙雙化工有限公司，批號(hào)：20111116；無水乙醇，分析純（AR），購(gòu)于天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：2012-4-15；氯化鈉（AR）,購(gòu)于天津市凱通化學(xué)試劑有限公司；磷酸氫二鈉（AR）, 購(gòu)于天津市凱通化學(xué)試劑有限公司;磷

32、酸氫二鈉（AR），購(gòu)于天津市凱通化學(xué)試劑有限公司；中性樹膠，購(gòu)于上海標(biāo)本模型廠，批號(hào)：20080109；即用型SABC免疫組化染色試劑盒，購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司；多聚賴氨酸，購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司；雄激素受體，購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。試?yàn)儀器202-1 型手搖式組織切片機(jī)、Olympus BH-1 型顯微鏡、MIE顯微圖像處理軟件（購(gòu)于山東易創(chuàng)電子有限公司）、101型電熱恒溫干燥箱、電子萬用爐，單孔二列電熱恒溫水浴鍋、電子天平、移液槍、烤片臺(tái)等。2.3 檢測(cè)項(xiàng)目及方法2.3.1組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察石蠟切片制作：取多聚甲醛固定的組織，修塊后流水沖洗過

33、夜75%乙醇（2h）80%乙醇（3h）90%乙醇（2h）95%乙醇（1h）95%乙醇（1h）100%乙醇（1h）100%乙醇（30min）二甲苯（觀察透明效果）蠟（1h）蠟（30min）包埋。HE染色：二甲苯種脫蠟10min二甲苯中脫蠟5 min100%酒精中脫二甲苯5min100%酒精中脫二甲苯5min95%酒精中5min85%酒精中5min75%酒精中5min蒸餾水中洗3 min蘇木素染色5min流水沖洗5min0.5%鹽酸分化2040s流水沖洗5min流水沖洗510min鏡檢著色滿意后放入蒸餾水清洗70%酒精5min85%酒精5min伊紅染色23min95%酒精5min95%酒精5min

34、100%酒精中10min100%酒精中5min二甲苯中10min二甲苯中10min中性樹膠封片。2.3.2 雄激素陽性灰度值測(cè)定免疫組織化學(xué)：1. 載玻片用多聚賴氨酸處理以防脫片。撈片后置烤箱58-60oC,30-60min以使切片緊密粘附。2. 切片常規(guī)脫蠟至水。3. 3%的雙氧水室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。4. 熱抗原修復(fù)：將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0），電爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(PH7.2-7.6)洗滌12次。5. 滴加5%BSA封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體，不洗。6. 滴加稀釋50倍的一抗（小鼠Ig

35、G），37oC 1.5小時(shí)。7. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG, 20-37oC 20分鐘。PBS(PH702-7.6)洗2分鐘×3次8. 滴加試劑SABC，20-37Oc 20分鐘。PBS(PH7.2-7.6) 洗5分鐘×4次。9. DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒（AR1022）.取1ml蒸餾水，加試劑盒中A,B,C試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌。10. 蘇木精輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差（Mean±S

36、.E.）表示。用單因素方差分析的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)采用Dunnet't法，以=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。3 結(jié)果3.1 光鏡觀察結(jié)果TPT暴露后，低劑量組大鼠體重顯著高于對(duì)照組，中劑量組的體重低于于對(duì)照組，高劑量組體重高于對(duì)照組，但差異均不顯著（P<0.05）；與對(duì)照組相比，睪丸和附睪重量均有所增加，但差異均不顯著（P<0.05）（表1）。睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)與對(duì)照組相比，低劑量和中劑量組的睪丸指數(shù)較對(duì)照組大，高劑量組較對(duì)照組減小（圖1），附睪指數(shù)相比沒有明顯變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析沒有顯著性差異（P<0.05）（圖2）。表1 TPT暴露后SD大鼠體重、睪丸重和

37、附睪重的變化(n=5)體重（g）睪丸重（g）附睪重（g）Control358.69±48.44a2.95±0.21ab1.05±0.05aTPT 0.5 g/kg389.84±14.71a3.41±0.14a1.12±0.03aTPT 5 g/kg335.96±27.98a2.89±0.07b1.10±0.04aTPT 50 g/kg363.78±19.23a3.13±0.17ab1.10±0.05a注：上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖1TPT暴露后SD大鼠

38、睪丸指數(shù)的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖2 TPT暴露后SD大鼠附睪指數(shù)的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）3.2 地塞米松磷酸鈉處理后曲精小管直徑變化TPT暴露后SD大鼠的精子畸形率隨暴露劑量的增加而增大，且高劑量組與對(duì)照組和低劑量組間差異顯著（P<0.05）（表2、圖4）。SD大鼠正常精子的結(jié)構(gòu)完整，頭、體、尾正常（圖4-1），TPT暴露后SD大鼠的精子出現(xiàn)如下畸形現(xiàn)象：體部分叉（圖4-2）、無尾（圖4-3）、頸部膨大（圖4-4）、彎頸（圖4-5）、前鉤變形（圖4-6）、無頭（圖4-7）、多個(gè)相連（圖4-8）、頭頸折轉(zhuǎn)（圖

39、4-9）、頭尾相連（圖4-10）、尾部彎曲（圖4-11）。表2 TPT暴露后SD大鼠附睪精子畸形率的變化(n=5)樣本數(shù)觀察精子數(shù)畸形率（%）Control5100019.89±0.23aTPT 0.5 g/kg5100022.63±0.14aTPT 5 g/kg5100027.42±0.31abTPT 50 g/kg5100030.27±0.40b注：上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖3 TPT暴露后SD大鼠精子畸形率的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖4伊紅染色的附睪精子照片正常精子(1)和不正常的精子（

40、211）：（2）體部分叉；（3）無尾；（4）頸部膨大；（5）彎頸；（6）前鉤變形；（7）無頭；（8）多個(gè)相連；（9）頭頸折轉(zhuǎn)；（10）頭尾相連；（11）尾部彎曲。3.3 地塞米松磷酸鈉對(duì)雄激素分泌的影響光鏡下對(duì)HE染色后觀察到睪丸和附睪組織病理變化為：低劑量處理組SD大鼠睪丸曲精小管直徑高于對(duì)照組，中劑量組和高劑量組均小于對(duì)照組，且高劑量組更明顯，有嚴(yán)格的劑量依賴性但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異不顯著（P<0.05）（圖5）。對(duì)照組睪丸精曲小管結(jié)構(gòu)清楚，被膜正常，結(jié)構(gòu)完整，管腔大小一致，支持細(xì)胞、生精細(xì)胞排列規(guī)整，各級(jí)生精細(xì)胞由外到內(nèi)依次為精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、生精細(xì)胞、精子，并且分化

41、良好，腔內(nèi)可見較多成熟精子。支持細(xì)胞呈不規(guī)則的高柱狀或錐狀，細(xì)胞底部附著在基膜上，頂部伸達(dá)腔面。睪丸間質(zhì)疏松，組織正常，血管周圍可見散在的間質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞較大，呈圓形或不規(guī)則狀，核圓形（圖6 A1、A2）；染毒組大鼠睪丸組織均有不同程度的損傷，主要表現(xiàn)為曲細(xì)精管內(nèi)大量生精細(xì)胞壞死，細(xì)胞核固縮凝聚，并出現(xiàn)空泡樣結(jié)構(gòu)。具體為：低劑量組大多數(shù)曲細(xì)精管排列正常，基膜正常，支持細(xì)胞正常，少數(shù)曲精小管的各級(jí)生精細(xì)胞數(shù)目減少；中劑量組大多數(shù)曲精小管排列正常，少數(shù)稀疏，間質(zhì)較正常組增寬，各級(jí)生精細(xì)胞數(shù)目減少，管腔內(nèi)精子數(shù)減少；高劑量組曲精小管排列稀疏，間質(zhì)較正常組明顯增寬，部分基膜脫落，曲精小管的各級(jí)生精細(xì)胞數(shù)

42、目呈不同程度的減少，嚴(yán)重時(shí)只有一層，管腔內(nèi)精子數(shù)明顯減少（圖6 B1D2）。對(duì)照組大鼠的附睪管排布緊密，腔內(nèi)精子豐富，分布均勻，管周結(jié)締組織豐富（圖6 a）；TPT處理組出現(xiàn)生精上皮變薄，少數(shù)管腔細(xì)胞排列紊亂，間隙增大，輸出小管、附睪管上皮明顯變薄，細(xì)胞減少，管間疏松，間隙增大的現(xiàn)象，損傷程度隨著處理劑量的增加而逐漸加劇，呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)（圖6 bd）。圖5 TPT暴露后SD大鼠曲精小管直徑的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖6 TPT暴露后SD大鼠睪丸和附睪組織結(jié)構(gòu)照片A1、A2為對(duì)照組睪丸圖片；B1、B2為低劑量組睪丸圖片；C1、C2為中劑量組睪丸圖片；D1、

43、D2為高劑量組睪丸圖片；a為對(duì)照組附睪尾圖片；b為低劑量組附睪尾圖片；c為中劑量組附睪尾圖片；d為高劑量組附睪尾圖片3.4 TPT暴露后SD大鼠睪丸標(biāo)志性酶的變化TPT暴露后，比較各暴露組與對(duì)照組標(biāo)志性酶結(jié)果（表3）可發(fā)現(xiàn)，低劑量組大鼠睪丸-GT活力較對(duì)照組顯著增高，高劑量組大鼠睪丸-GT活力較對(duì)照組顯著降低，中劑量組與對(duì)照組無顯著差異（P<0.05）（圖7）。低劑量組大鼠睪丸T-AOC較對(duì)照組顯著增高，高劑量組大鼠睪丸T-AOC較對(duì)照組顯著降低，中劑量組與對(duì)照組無顯著差異（P<0.05）（圖8）。高劑量組大鼠睪丸AKP較對(duì)照組低，低、中劑量組較對(duì)照組沒有明顯變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均無顯

44、著差異（P<0.05）（圖9）。表3 TPT暴露后SD大鼠睪丸標(biāo)志性酶的變化樣本數(shù)-GT(U/gprot)T-AOC（U/mgprot）AKP(U/gprot)control553.93±8.73a1.84±0.13a134.23±23.69aTPT 0.5 g/kg597.02±14.82b2.69±0.16c143.71±19.90aTPT 5 g/kg559.35±3.67a1.61±0.24a147.43±14.70aTPT 50 g/kg534.87±2.11c0.74±

45、;0.14b107.72±10.54a注：上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖7 TPT暴露后SD大鼠睪丸-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活力的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖8 TPT暴露后SD大鼠睪丸總抗氧化能力的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母的組間表示差異顯著（P0.05）圖9 TPT暴露后SD大鼠睪丸堿性磷酸酶的變化(n=5)上標(biāo)沒有相同字母表的組間示差異顯著（P0.05）4 討論4.1 TPT對(duì)SD大鼠生殖器官生長(zhǎng)發(fā)育的影響有資料報(bào)道，在1.420 mg/(kg·d)的劑量范圍內(nèi)，TPT就能對(duì)大鼠生殖功能和形態(tài)產(chǎn)生不良影響。較高劑量時(shí)，

46、睪丸和卵巢組織均發(fā)生病理學(xué)變化，并能導(dǎo)致大鼠不育5。體重是綜合反應(yīng)動(dòng)物全身健康狀況的最基本指標(biāo)之一。本試驗(yàn)中，隨著TPT劑量的增加，雄性大鼠體重先升高后降低。染毒組體重的變化說明低劑量的TPT對(duì)大鼠生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，而高劑量的TPT對(duì)大鼠的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生抑制作用。動(dòng)物在不同年齡段，其臟器系數(shù)值有一定規(guī)律24，當(dāng)受到有害物質(zhì)影響時(shí)，該比值將發(fā)生改變。本試驗(yàn)中，低劑量和中劑量組的體重及睪丸系數(shù)較對(duì)照組大，高劑量組低于對(duì)照組；附睪系數(shù)變化不明顯。精子發(fā)生包括從精原細(xì)胞到精子形成這一連續(xù)增殖分化的過程，對(duì)有害因素的作用十分敏感，環(huán)境化學(xué)物可在不同的階段干擾精子的發(fā)生過程。因此，評(píng)價(jià)精子的數(shù)量、活動(dòng)能力和形態(tài)

47、可以反映環(huán)境因素對(duì)雄性生殖最終的毒性效應(yīng)，是雄性生殖毒性評(píng)價(jià)不可缺少的觀察終點(diǎn)25。足夠的精子數(shù)量是維持正常生育力的重要前提，精子數(shù)量的減少常常是各種化學(xué)物質(zhì)對(duì)各級(jí)生精細(xì)胞生長(zhǎng)與發(fā)育產(chǎn)生毒性作用的結(jié)果。精子運(yùn)動(dòng)是精子通過雌性生殖管道到達(dá)受精部位所必需的，被認(rèn)為是生育力最有預(yù)測(cè)性的指標(biāo)之一26。精子形態(tài)是評(píng)價(jià)化學(xué)物質(zhì)對(duì)精子遺傳物質(zhì)產(chǎn)生不良的潛在性影響的間接指標(biāo)25。精子形態(tài)的改變反映雄性生殖細(xì)胞的遺傳損傷，精子畸形率的高低，可反映該化學(xué)毒物的生殖毒性和對(duì)生殖細(xì)胞潛在的致突變性27。精子數(shù)量和活力的變化是反應(yīng)雄性生殖異常的早期指標(biāo)，精子數(shù)量減少將導(dǎo)致雄性不育，精子頭畸形率增高將導(dǎo)致雌鼠受孕率下降和

48、子代畸形率增加。本試驗(yàn)結(jié)果顯示暴露組大鼠附睪內(nèi)精子的畸形率呈上升趨勢(shì)，并且與TPT劑量有嚴(yán)格的依賴性，精子數(shù)量隨著藥物劑量的增加明顯減少，表明TPT干擾精子正常生長(zhǎng)與成熟，對(duì)精子生成具有潛在的不利影響。睪丸曲細(xì)精管的支持細(xì)胞有多種功能，包括支持營(yíng)養(yǎng)生精細(xì)胞，參與血一睪屏障的形成，分泌少量液體，有助于精子的運(yùn)動(dòng)等，而各級(jí)生精細(xì)胞是精子形成的前提。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著TPT染毒劑量的增加，曲精小管萎縮，間質(zhì)不同程度的增寬，各級(jí)生精細(xì)胞減少，管腔內(nèi)精子數(shù)降低，部分管腔內(nèi)精子缺失。有研究報(bào)道28-31，有機(jī)砷、有機(jī)鉛和有機(jī)汞等有機(jī)金屬化合物對(duì)小鼠精子的毒性很強(qiáng)，能明顯降低小鼠精子質(zhì)量。氯化二丁基錫能引

49、起小鼠睪丸萎縮，降低精子質(zhì)量，毒性強(qiáng)度與有機(jī)金屬化合物相似。其影響機(jī)理可能與該化合物抑制試驗(yàn)動(dòng)物的生殖生理功能、酶系活性以及破壞生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系32。因此推測(cè)TPT產(chǎn)生毒性效應(yīng)的作用機(jī)制之一可能是TPT透過血睪屏障而作用于生精細(xì)胞，雄性生殖器官是TPT毒性作用的主要靶器官，影響睪丸正常的生精過程，從而干擾精子的生長(zhǎng)、發(fā)育和能量代謝過程。4.2 TPT對(duì)SD大鼠睪丸標(biāo)志性酶的影響精子發(fā)生需要經(jīng)歷一系列復(fù)雜的變化過程，每個(gè)階段都依賴于能量的供應(yīng)。由于酶的催化是能量產(chǎn)生不可缺少的重要條件，因此正常的精子數(shù)量和質(zhì)量有賴于生精過程中各種酶活性的維持33。闡明化學(xué)物質(zhì)對(duì)睪丸各類細(xì)胞標(biāo)志酶的影響，有助

50、于解釋靶細(xì)胞的定位和精子發(fā)生障礙的機(jī)制34。AKP主要存在于精原細(xì)胞、胚胎期初級(jí)精母細(xì)胞及各級(jí)生精細(xì)胞與支持細(xì)胞的交界面上，參與睪丸生殖細(xì)胞增殖、分裂與分化時(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸，生精細(xì)胞的分裂活動(dòng)密切相關(guān)、并參與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)向各級(jí)生精細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)，AKP活性下降勢(shì)必干擾各級(jí)生精細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和能量供應(yīng)35，其活力在精原細(xì)胞和早期發(fā)育時(shí)期的初級(jí)精母細(xì)胞較強(qiáng)36。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各暴露組AKP的活力與對(duì)照組相比變化不明顯。-GT是睪丸支持細(xì)胞的特異標(biāo)志酶，主要存在于支持細(xì)胞上，它的活性與支持細(xì)胞的功能息息相關(guān)37。支持細(xì)胞在精子發(fā)生過程中具有提供營(yíng)養(yǎng)、支持和保護(hù)的作用，有利于生殖細(xì)胞順利發(fā)育成為成熟的精子，-

51、GT活性的降低表明支持細(xì)胞機(jī)能受到了損傷38。本研究結(jié)果表明，低劑量暴露組-GT的活力出現(xiàn)代償性升高，高劑量組明顯降低，說明高劑量組對(duì)支持細(xì)胞受到了嚴(yán)重?fù)p傷。抗氧化物是指與可氧化的底物相比以低劑量存在時(shí)，能顯著地延緩或阻止對(duì)底物氧化性損傷的物質(zhì)。正常機(jī)體內(nèi)存在一套有效的抗氧化防御系統(tǒng)，可以清除氧自由基及其代謝產(chǎn)物。組織T-AOC既可以反映機(jī)體清除氧自由基的能力，也容易測(cè)其含量39。低劑量處理組大鼠睪丸T-AOC較對(duì)照組高，中、高劑量組大鼠睪丸T-AOC低于對(duì)照組。通過以上睪丸內(nèi)酶含量的變化，表明TPT干擾了各級(jí)生精細(xì)胞的能量代謝過程，導(dǎo)致精子的發(fā)育和成熟過程中能量供應(yīng)障礙。這些酶活性的變化可能

52、與本試驗(yàn)所觀察到的生精過程受損（精子畸形率增加、數(shù)量減少）存在著一定關(guān)聯(lián)。5 結(jié)論本試驗(yàn)通過對(duì)不同劑量TPT暴露后SD大鼠的睪丸指數(shù)、附睪指數(shù)、精子形態(tài)、生殖器官組織形態(tài)和標(biāo)志性酶水平變化的研究，顯示了中、高劑量（5、50g/kg）TPT影響了睪丸正常的生精過程，干擾了精子的生長(zhǎng)、發(fā)育和能量代謝過程，導(dǎo)致大鼠精子數(shù)量和活度下降，精子畸形率增加，對(duì)雄性大鼠的生精功能已經(jīng)產(chǎn)生了損害作用，提示TPT對(duì)雄性哺乳動(dòng)物的生殖具有毒性作用。參考文獻(xiàn)1 劉稷燕，江桂斌，徐明德南極長(zhǎng)城灣附近和臺(tái)灣以南部分海域水樣中丁基錫化合物分析J環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2002，22(2)：2672692 全燮，陳碩有機(jī)錫污染物在海洋

53、沉積物中的遷移和轉(zhuǎn)化J海洋環(huán)境科學(xué)，1995，14(4)：2l263 江桂斌，劉稷燕，周群芳，等我國(guó)部分內(nèi)陸水域有機(jī)錫污染現(xiàn)狀初探J境科學(xué)學(xué)報(bào)，2000，20(5)：6366384 Paul S Cooke, Denise R Holsberger, Raphael J Witorsch, et al. Chapin Thyroid hormone, glucocorticoids, and prolactin at the nexus of physiology, reproduction, and toxicologyJToxicology and Applied Pharmacology

54、,2004,194: 309-3355 宋美芳，李杰有機(jī)錫的污染及其生殖毒性J環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2005，22(6)：5495516 林春芳，呂華芳有機(jī)錫的生殖毒性和遺傳毒性研究進(jìn)展，海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2008，14(1)：23257 Grote K, Stahlschmidt B, Talsness C E, et al. Effects of organotin compounds on pubertal male ratsJ. Toxicology,2004,202: 145-1588 Golub M, Doherty J. Triphenyhin as a potential human

55、 endocrine disruptorJ. Taxical Environ Health B Crit Rev. 2004,7(4): 281-2959 Forsyth DS, Casey V, Butyhin compounds in retail mollusc productsJ. Food Additives Contaminants, 2003, 20(5): 445-45210 夏元洵化學(xué)物質(zhì)毒性全書M上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1991，10611 呂華東，林麒有機(jī)錫污染及其毒性作用研究現(xiàn)狀J海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2007，13(03)：272912 whalen MM, Wil

56、son S, Gleghorn C, et a1. Brief exposure to triphenyhin produces irreversible inhibition of the cytotoxic functionof human naturals killer cells J. Environ Res, 2003, 92(3): 2l3-22013 葛秦生臨床生殖內(nèi)分泌學(xué)M北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2001，78914 許立，劉曉暉，張莉人參總皂苷對(duì)小鼠睪丸NO、NOS及總抗氧化能力的影響J2006，9：152515 王秋穎堿性磷酸酶特性及其應(yīng)用的研究進(jìn)展中國(guó)畜牧獸醫(yī)2011，

57、38(1)：15716016 張輝，張海蓮堿性磷酸酶在水產(chǎn)動(dòng)物中的作用河北漁業(yè)J2003，131(5)：121417 Nicotera F. M Pierluigui Tributyltin stimulates in rats thymocytes. Biochem, Biophy. 1990, 283(1): 46-5018 Thayer J S Organotin Compounds and Living Organisms 1984. New York: Academic Press. Incectiveness of the compounds against leukemia.App.Organomet. Chem. 1988, 2(01): 65-7219 Penninks A H. W