實(shí)驗(yàn)四離體蛙心灌流

1、實(shí)驗(yàn)四：離體蛙心灌流實(shí)驗(yàn)四：離體蛙心灌流n【目的要求】n1、學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法。n2、觀察Na，K，Ca2及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。n【基本原理】n心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)需要一個(gè)適宜的內(nèi)環(huán)境（如Na，K，Ca2等的濃度及比例、pH值和溫度），而內(nèi)環(huán)境的變化則直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)。在體心臟還受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配，交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)速度加快，心率加快；迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率減慢。將失去神經(jīng)支配的離體心臟保持于適宜的理化環(huán)境中（如任氏液），在一定時(shí)間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動(dòng)節(jié)律性興奮和收縮。而

2、改變?nèi)问弦旱慕M成成分，離體心臟的活動(dòng)就會(huì)受到影響。因此可用人工灌流的方法，研究心勝活動(dòng)的規(guī)律及特點(diǎn)；還可觀察灌流液成分的改變對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。n【動(dòng)物、器材與試劑】（以下是每組所需的種類和數(shù)量）n蛙或蟾蜍1只、紗布1塊、毀髓針1支、眼科鑷1把、手術(shù)剪1把、眼科剪1把、蛙板1塊、蛙釘4只、玻璃分針1支、滴管7支、尖嘴滴管2支、細(xì)棉線2段30cm、解剖盤1只、任氏液至少150mL、蛙心夾1只、張力換能器（50g）1個(gè)、二道生理紀(jì)錄儀1臺(tái)、鐵支架1個(gè)、雙凹夾1個(gè)、萬能滑輪1個(gè)、小燒杯1個(gè)、斯氏蛙心套管1個(gè)、套管夾1個(gè)、0.65% NaCl 5mL、2% CaCl2 1mL、1% KCl 1mL、

3、1/10000腎上腺素2滴、1/10000乙酰膽堿2滴、300U/ml肝素2滴。n【方法與步驟】n1、離體蛙心的制備（斯氏蛙心插管法）n取一只蛙或蟾蜍，雙毀髓后背位置于蛙板上，暴露心臟。仔細(xì)識(shí)別心臟周圍的大血管。在主動(dòng)脈干下方穿雙線，一條在左主動(dòng)脈上端結(jié)扎作插管時(shí)牽引用；另一根在動(dòng)脈球上方打一活結(jié)備用（用以結(jié)扎和固定插管）。左手提起左主動(dòng)脈上方的結(jié)扎線，右手用眼科剪在結(jié)扎線下方、沿向心方向?qū)?dòng)脈上壁剪一斜口。選擇大小適宜的蛙心套管，然后將盛有少量(套管內(nèi)23cm高度)任氏液(內(nèi)加一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，由開口處插入動(dòng)脈圓錐，當(dāng)套管尖端到達(dá)動(dòng)脈圓錐基部時(shí)，應(yīng)將插管稍向后退(因主動(dòng)脈內(nèi)有螺旋

4、瓣會(huì)阻礙插管前進(jìn))，并將插管尾端稍向右主動(dòng)脈方向及腹側(cè)面傾斜，使插管尖端向動(dòng)脈球的背部后下方及心尖方向推進(jìn)，在心室收縮時(shí)經(jīng)主動(dòng)脈瓣進(jìn)入心室（圖10）。注意插管不可插得過深，插管的斜面應(yīng)朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此時(shí)可見血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動(dòng)而上下移動(dòng)，表明操作成功(否則需退回并重新插入)，用滴管吸去套管中的血液，換新鮮任氏液；穩(wěn)定住套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動(dòng)脈連同插入的套管用雙結(jié)扎緊(不得翻液)，再將結(jié)線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結(jié)扎線上方的血管。輕輕提起套管和心臟，著清靜脈竇的位置，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈竇與心臟的聯(lián)系，使心臟離體(切勿

5、損傷靜脈竇)，用任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致(1.52cm)，即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。n2、插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉(不要夾過多，以免因夾破心室而漏液)。再將蛙心夾上的系線繞過一個(gè)滑槍與張力傳感器相連。注：勿便灌流液滴到傳感器上。調(diào)節(jié)記錄儀上的收縮曲線的幅度適中。n3、實(shí)驗(yàn)觀察（圖11）n(1)記錄正常心搏曲線。n(2)改用0.65% NaCl溶液灌流，并作好加藥標(biāo)記，觀察心搏變化。待曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即吸去套管中的灌流液，同時(shí)做好沖洗標(biāo)記，并用新鮮任氏液清洗23次，待心搏恢復(fù)正常，注意：換液時(shí)切勿碰套管，以免影響描

6、記曲線的基線，同時(shí)保持灌流液面一致(以下同)。n(3)向套管內(nèi)加12滴2% CaCl2溶液（較細(xì)的套管需少加）溶液，作好加藥記號(hào)，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化。當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，應(yīng)立即吸去套管中的灌流液，并做好沖洗標(biāo)記，迅速用新鮮任氏液清洗23次，待心搏恢復(fù)正常。n(4)同法向套管內(nèi)加入12滴1% KCl溶液，記錄心搏曲線的變化。當(dāng)心搏曲線變化時(shí)，同法更換灌流液，待心搏恢復(fù)正常公n(5)同法記錄套管中加入12滴腎上腺素溶液(1/10000)后心搏曲線的變化。n(7)同法記錄套管中加入12滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線的變化。n【注意事項(xiàng)】n1、制備離體心臟標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇。

7、n2、蛙心夾應(yīng)在心室舒張期一次性夾住心尖，避免因夾傷心臟而導(dǎo)致漏液。n3、每一觀察項(xiàng)目都應(yīng)先描記一段正常曲線，然后再加藥并記錄其效應(yīng)。加藥時(shí)應(yīng)在心跳曲線上予以標(biāo)記，以便觀察分析。n4、各種滴管應(yīng)分開，不可混用。n5、在實(shí)驗(yàn)過程中，插管內(nèi)灌流液面高度應(yīng)保持恒定；儀器的各種參數(shù)一經(jīng)調(diào)好，應(yīng)不再變動(dòng)。n6、給藥后若效果不明顯，可再適量滴加，并密切注意藥物劑量添加后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。給藥量必須適度，加藥出現(xiàn)變化后，就應(yīng)立即更換任氏液，否則會(huì)造成不可挽回的后果，尤其是K稍有過量，即可導(dǎo)致難以恢復(fù)的心臟停跳。n7、標(biāo)本制備好后，若心臟功能狀態(tài)不好（不搏動(dòng)），可向插管內(nèi)滴加12滴2%CaCl2或1：10000腎上腺素，以促進(jìn)（起動(dòng)）心臟搏動(dòng)。在實(shí)驗(yàn)程序安排上也可考慮促進(jìn)和抑制心臟搏動(dòng)的藥物交換使用。n8、謹(jǐn)防灌流液沿絲線流入張力傳感器內(nèi)而損壞其電子元件。n【思考題】n1、心臟灌流說明心肌的哪些生理特性？n2、用實(shí)驗(yàn)說明