實(shí)驗(yàn)四_血凝和血凝抑制試驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 血凝和血凝抑制試驗(yàn)血凝和血凝抑制試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理和操作方法，能夠正確判定試驗(yàn)結(jié)果并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。二、血凝試驗(yàn)二、血凝試驗(yàn)（ HA）血凝現(xiàn)象：有些病毒可凝集某些動(dòng)物（如雞、鵝、豚鼠、綿羊）和人的紅細(xì)胞(RBC)原理：血凝素與RBC表面相應(yīng)受體結(jié)合，引起RBC凝集，用以測(cè)定病毒的含量用以測(cè)定病毒的含量HAHA試驗(yàn)的原理示意圖試驗(yàn)的原理示意圖 用途：確定病毒的含量； 計(jì)算病毒的血凝價(jià)，為血凝抑制試驗(yàn)做準(zhǔn)備血凝價(jià)：能使血球產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度血凝單位試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料雞新城疫病毒雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，用生理鹽水洗滌3-

2、5次，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，用生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液備用滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反應(yīng)板、微量移液器、滅菌塑料吸頭操作步驟操作步驟1. 在血凝板第一排的1-12孔加入50l生理鹽水。2. 在第1孔中加入50l病毒，混勻后吸50l到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50l；最后兩孔（11、12）為紅細(xì)胞對(duì)照。3. 將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1-12孔中每孔加入50l。4. 手工震蕩，37靜置30min (室溫40分鐘 )后觀察結(jié)果 孔孔 號(hào)號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（ C） 12（ C） 生生 理理 鹽鹽 水水 （ l） 50 50 50 5

3、0 50 50 50 50 50 50 50 50 病病 毒毒 懸懸 液液 （ l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 / / 1% 紅紅 細(xì)細(xì) 胞胞 （ l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 棄50l 結(jié)果判定血凝價(jià) A:26 B:25 C:22 D:27ABCD以以50%50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價(jià)，即為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價(jià)，即一個(gè)血凝單位一個(gè)血凝單位。血凝價(jià)血凝價(jià): :1:2561:256三、血凝抑制試驗(yàn)（ HI） 原理：抗體與血凝素結(jié)

4、合，封閉血凝素，使之不能與紅細(xì)胞結(jié)合HIHI試驗(yàn)的原理圖試驗(yàn)的原理圖 用途: 用于檢測(cè)血清中抗體含量用于檢測(cè)血清中抗體含量； 鑒定病毒的型、亞型； 血凝抑制價(jià)：能完全抑制血球凝集的最高血清稀釋度即為該血清的血凝抑制價(jià)試驗(yàn)材料4個(gè)血凝單位雞新城疫病毒雞紅細(xì)胞：同上被檢血清(采自被檢雞的血清)滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反應(yīng)板、微量移液器、滅菌塑料吸頭1. 在血凝板的1-12孔加入25l生理鹽水，最后2孔加50l。2. 第1孔加入待檢血清25l，混勻后吸25l至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄25l。3. 在1-10孔，每孔加稀釋好的25l 4個(gè)血凝單位的病毒懸液，室溫靜置30分鐘 4. 將紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1-12孔中每孔加入50l5. 手工震蕩1min，在37靜置30min(室溫40分鐘)后觀察結(jié)果操作步驟判定結(jié)果：判定結(jié)果：能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)，以的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)，以2 2的指數(shù)表示。（上圖抗體結(jié)果從上至下依次為：的指數(shù)表示。（上圖抗體結(jié)果從上至下依次為