顯微鏡的使用和海洋細(xì)菌的觀察實驗報告

1、實驗一 顯微鏡的使用和海洋細(xì)菌的觀察一、目的要求：1、了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造。2、學(xué)習(xí)顯微鏡的正確使用維護(hù)。3、觀察不同細(xì)菌形成菌落特征。4、學(xué)習(xí)活細(xì)菌形態(tài)的觀察方法。二、實驗說明 顯微鏡是微生物研究的工具，顯微鏡種類繁多，有光學(xué)顯微鏡、 相差、暗視野、熒光及電子顯微鏡等。 但它們的原理和結(jié)構(gòu)基本相同。 下面以普通光學(xué)顯微鏡為例簡要介紹其原理及結(jié)構(gòu)。（一）原理 一般顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)由兩部分組成。1、成像系統(tǒng)由目鏡、物鏡組成。物鏡將標(biāo)本作第一次放大，然 后目鏡再將第一次放大的實像作第二次放大。2、照明系統(tǒng)由光源、光圈調(diào)節(jié)器和聚光鏡組成。光源可選用人 工光源，人工光源由鎢鹵素?zé)舭l(fā)出，經(jīng)光圈調(diào)節(jié)器

2、調(diào)解后，然后聚光 鏡將外來光線聚在標(biāo)本上，從而照明了標(biāo)本，便于觀察。（二）結(jié)構(gòu)由光學(xué)部分（光圈調(diào)節(jié)器、 聚光器、物鏡和目鏡）和機(jī)械部分（鏡 座、鏡筒、鏡臂、轉(zhuǎn)換器、載物臺、推動器、粗動螺旋和微動螺旋）組成（圖1-2）,主要部分件有:19231820621141312 1891目頭3ms固緊螺野 旦轉(zhuǎn)換器5呦垣戦物臺了沫光4升障手輪g彖光鏡固緊螺宵 9聚光魂（帶孔輕光珮10TK光境II売厲卿12電源開去慣聞稱動手鴕同粼向移動手輪徴動調(diào)攜銘筍16租動洞嫌罐翅 標(biāo)本片夾持器】$鏡骨！9單目頭（鶴爲(wèi)）加取人忝fi頭（慣簡）兇一三目頭沁舷圖10-24顯徽鑽的結(jié)構(gòu)1、 目鏡 通常備有5X、10X、16X,

3、 般選用10X。2、物鏡 它對分辯力有著決定性影響。一般低倍鏡（10X）、高倍鏡（40X）和油鏡（100X）,通常按順序安裝在轉(zhuǎn)換器上。3、聚光鏡 具有使樣品明亮的集光作用，同時還影響物像的分辯力和反差，若將聚光鏡的光圈開放到超過物鏡的數(shù)值孔徑時，便產(chǎn)生光斑，若收擾光圈，分辯力下降但反差增大。4、載物臺 又稱鏡臺，載放樣品用。一般都裝有一個推進(jìn)器，可由移動手輪作橫向或縱向移動載玻片。5、粗、細(xì)調(diào)旋轉(zhuǎn) 是調(diào)節(jié)載物臺或鏡筒上下移動的裝置。細(xì)調(diào)旋扭轉(zhuǎn)動一圈的升降值為0.2mm,刻值為0.002 mm。（三）顯微鏡性能1、數(shù)值孔徑 顯微鏡分辯力的高低決定于光學(xué)系統(tǒng)的各種條件, 但起決定性影響的是物鏡。

4、物鏡的性能可用數(shù)值孔徑（N.A來表示）。 數(shù)值孔徑又叫開口率,它與顯微鏡的分辯力成正比,與焦深成反比, 與鏡像亮度平方根成正比。2、分辨力 分辨力系指分辨物體細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力。 D 值愈小, 分辨力愈高,物像愈清晰。3、 放大倍數(shù) 顯微鏡放大倍數(shù)（V）等于物鏡放大率（V1）和 目鏡放大率（V2）的乘積 V=V2X V2。4、焦深在顯微鏡下觀察一個標(biāo)本時,焦點對在某一像面時,物 像最清晰,這像面為目的面。在視野內(nèi)除目的面外,還能在目的面的 上面和下面看見物像, 這兩個面之間的距離稱為焦深。 物鏡的焦深和 開口率及放大率成反比,即開口率和放大率愈大,焦深愈小。因此調(diào) 節(jié)高倍鏡比調(diào)節(jié)低倍鏡要仔細(xì),否則

5、容易使物像滑過而找不到。三、實驗器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、酒精燈、接種環(huán)。以改良Zobell 2216E培養(yǎng)基采用涂布法分離的海洋細(xì)菌，海水樣 品采自唐山附近海域。四、實驗方法步驟一）顯微鏡使用1、取鏡 打開鏡箱、右手握住鏡臂，取出顯微鏡，用左手托住 鏡座放于平穩(wěn)的實驗臺上。 鏡檢者姿勢應(yīng)端正， 觀察時兩眼必須同時 睜開，以減少疲勞。2、調(diào)光 打開電源開關(guān)。（ 1 ）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器，使鏡頭與載玻臺 相距 0.5cm。（2）觀察光源強(qiáng)弱，調(diào)節(jié)光源強(qiáng)弱、光圈及升降聚光鏡即可。 使視野內(nèi)光線均勻明亮。3、低倍鏡觀察 將待測標(biāo)本置載物臺上，用卡尺夾住，移動推 動器，使觀察標(biāo)本處于

6、物鏡正下方。轉(zhuǎn)動粗螺旋，使載物臺上升（或 鏡筒下降）至距標(biāo)本0.5cm處，由目鏡觀察，然后慢慢下降載物臺（或 上升鏡筒）直至出現(xiàn)模糊像后，用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至物像清晰為止。4、高倍鏡觀察 低倍鏡觀察至清晰物像后，將觀察的部位移至 視野中央，轉(zhuǎn)換高低鏡，然后用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至物像清晰。（二）活細(xì)菌觀察生活的細(xì)菌在顯微鏡下是透明的， 不易觀察。 因此觀察時應(yīng)減弱 光照、增加反差，才能獲得較好的效果。如果光照很強(qiáng)，細(xì)菌和周圍 液體的差別就難以辯別。取載玻片一塊， 加無菌海水一滴， 用接種環(huán)取少許菌在水滴中沾 幾下，當(dāng)水滴微渾時即將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒去多余菌體， 然 后蓋上玻片。鏡檢時先用低倍鏡調(diào)焦，然后轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。五、實驗結(jié)果將菌落觀察及顯微鏡鏡檢結(jié)果填入下表中。菌落1菌落2菌落3顏色大小菌落形態(tài)隆起邊緣數(shù)量菌體形態(tài)說明：1、菌落大小估算即可2、形態(tài)可采用點狀、圓形、紡錘形、不規(guī)則、假根狀、絲狀等 !詞語。3、隆起可采用扁平、拱起、凸