微生物學實驗指導MICROBIOLOGY EXPERIMENT G

1、實驗一實驗一 顯微鏡油鏡的使顯微鏡油鏡的使用和細菌形態(tài)的觀察用和細菌形態(tài)的觀察u目的要求目的要求u顯微鏡油鏡使用的原理顯微鏡油鏡使用的原理u實驗材料實驗材料u實驗程序?qū)嶒灣绦騯思考題思考題目目 的的 要要 求求u學習并掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)及維學習并掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)及維護的基本知識護的基本知識u使用油鏡觀察細菌的幾種基本形態(tài)使用油鏡觀察細菌的幾種基本形態(tài)u用懸滴法在高倍鏡或油鏡下觀察細菌的用懸滴法在高倍鏡或油鏡下觀察細菌的運動運動顯微鏡油鏡使用的原理顯微鏡油鏡使用的原理u普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡u歐林巴斯歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡u歐林巴斯歐林巴斯（OLYM

2、PUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡u顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的構(gòu)造 1.光學部分光學部分: :接目鏡接目鏡 、 接物鏡接物鏡 、 照明裝置照明裝置(聚光聚光鏡、鏡、 虹彩光圈、虹彩光圈、 反光鏡反光鏡等等). . 它使檢視物放大它使檢視物放大, ,造成造成物象物象. . 2.機械部分機械部分: :鏡座、鏡鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件件. .它起著支持它起著支持 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié) 固定固定等作用等作用. .普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡u顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍

3、數(shù)和分辨率 1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2. 顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：離的能力，可用公式表示為： D=/2nsin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點間物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。的最短距離。 ：可見光的波長（平均可見光的波長（平均0.550.55 m) m) n:n: 物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。射率。 ：鏡口角（即入射角）。鏡口角（即入射角）。普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡u油鏡使用的原理油鏡使

4、用的原理 油鏡，即油浸接物鏡。當油鏡，即油浸接物鏡。當光線由反光鏡通過玻片與光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相其折射率與玻片的相近近），則幾乎不發(fā)生折射，），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。而使物象更加清晰。實實 驗驗 材材 料料u顯微鏡（顯微鏡燈）、香柏油、二甲苯、顯微鏡（顯微鏡燈）、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。擦

5、鏡紙、吸水紙等。u細菌三種形態(tài)的染色標本。細菌三種形態(tài)的染色標本。u培養(yǎng)培養(yǎng)1218h的枯草桿菌（的枯草桿菌（B.subtilisB.subtilis) )u蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。實驗程序?qū)嶒灣绦颍@微鏡的使用）（顯微鏡的使用）u主要是油鏡的使用主要是油鏡的使用 1.用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。 2.調(diào)節(jié)光亮度調(diào)節(jié)光亮度 3.低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào)低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào) 4.依次再進行中倍、高倍觀察依次再進行中倍、高倍觀察 5.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后

6、，提升聚光鏡，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏鏡，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。油中，細調(diào)至看清物象為止。 6.換片：另換新片，必須從第三條開始操作。換片：另換新片，必須從第三條開始操作。 7.用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。全部復(fù)原。實驗程序?qū)嶒灣绦颍@微鏡的使用）（顯微鏡的使用）u顯微鏡保養(yǎng)和使用

7、中的注意事項：顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項： 1.不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。 2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度光潔度 3.觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。 4.觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，以

8、免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。圖。 5.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿?？蓡问帜茫豢蓛A斜拿。 6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片腐蝕鏡片。實驗程序?qū)嶒灣绦騃IIu細菌三種基本形態(tài)的觀察：細菌三種基本形態(tài)的觀察： 菌落形態(tài)觀察和個體形態(tài)觀察，這里主要指菌落形態(tài)觀察和個體形態(tài)觀察，這里主要指個體形態(tài)的觀察。個體形態(tài)的觀察。 1. 結(jié)合油鏡的使用，觀察三張細菌染色片（球結(jié)合油鏡的使用，觀察

9、三張細菌染色片（球狀菌、桿狀菌、和螺旋狀菌），邊觀察邊繪圖。狀菌、桿狀菌、和螺旋狀菌），邊觀察邊繪圖。 2. 看示范鏡：觀察雙球菌、四聯(lián)球菌，并繪圖。看示范鏡：觀察雙球菌、四聯(lián)球菌，并繪圖。實驗程序?qū)嶒灣绦蚣毦\動性的觀察（示范）：細菌運動性的觀察（示范）： 一般采用水浸片法、懸滴法、一般采用水浸片法、懸滴法、半固體培養(yǎng)法，常用水浸法半固體培養(yǎng)法，常用水浸法和懸滴法來觀察細菌的運動和懸滴法來觀察細菌的運動性。性。 1. 水浸片法水浸片法 2. 懸滴法懸滴法歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡uOLYMPUS生物顯微鏡是由日本進口生物顯微鏡是由日本進口的一種雙筒光學顯微鏡，

10、它使用方便，的一種雙筒光學顯微鏡，它使用方便，分辨率高，并且有立體感。是目前研分辨率高，并且有立體感。是目前研究微生物的良好工具。究微生物的良好工具。u顯微鏡的結(jié)構(gòu)顯微鏡的結(jié)構(gòu)錄 像 演 示錄 像 演 示歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）生物顯微鏡）生物顯微鏡 （顯微鏡的使用方法（顯微鏡的使用方法 ）u1. 接通電源。接通電源。 2. 打開主開關(guān)。打開主開關(guān)。 3. 移動電壓調(diào)整旋，使亮度移動電壓調(diào)整旋，使亮度適中。適中。 4. 把標本固定在再物臺上。把標本固定在再物臺上。 5. 放松粗調(diào)鎖擋。放松粗調(diào)鎖擋。 6. 用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和微控制鈕來進行對焦。微控制鈕來進

11、行對焦。 7. 調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度差。差。 8. 再適當調(diào)節(jié)照明度。再適當調(diào)節(jié)照明度。 9. 使焦點正確地對準標本。使焦點正確地對準標本。u10. 鎖緊粗調(diào)鎖擋。鎖緊粗調(diào)鎖擋。 11. 調(diào)節(jié)孔徑光欄。調(diào)節(jié)孔徑光欄。 12. 依次用低、中、高倍鏡依次用低、中、高倍鏡觀察。觀察。 13. 油鏡觀察：與普通光學油鏡觀察：與普通光學顯微鏡方法一致。顯微鏡方法一致。 14. 觀察完畢，復(fù)原：先將觀察完畢，復(fù)原：先將電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)閉主電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)閉主開關(guān)，切斷電源，放開粗調(diào)開關(guān)，切斷電源，放開粗調(diào)鎖擋。油鏡的處理與普通光鎖擋。油鏡的處理與普通光學顯微鏡方法一致。學顯

12、微鏡方法一致。 15. 放入保存箱中。放入保存箱中。歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡u相差顯微鏡的工作原理相差顯微鏡的工作原理 相差顯微鏡具有一個特殊的相差顯微鏡具有一個特殊的由環(huán)狀光圈與聚光鏡組合的由環(huán)狀光圈與聚光鏡組合的轉(zhuǎn)盤聚光鏡，通過這個特殊轉(zhuǎn)盤聚光鏡，通過這個特殊的裝置，就可把光波的相位的裝置，就可把光波的相位差異變?yōu)檎穹町悾瑥亩共町愖優(yōu)檎穹町?，從而使人們?nèi)庋奂茨苡^察到活細胞人們?nèi)庋奂茨苡^察到活細胞的細微結(jié)構(gòu)，并有立體感。的細微結(jié)構(gòu)，并有立體感。常用來觀察活細胞結(jié)構(gòu)，鞭常用來觀察活細胞結(jié)構(gòu)，鞭毛的運動等。毛的運動等。u相差顯微鏡的裝置相差顯微鏡的裝置 1. 環(huán)狀光圈環(huán)狀光圈 2. 相差物鏡（具有環(huán)狀相差物鏡（具有環(huán)狀相板）相板） 3. 定中心望遠鏡（亦稱定中心望遠鏡（亦稱輔助目鏡）輔助目鏡） 4. 輔助固定扳手輔助固定扳手 5. 綠色濾光片綠色濾光片歐林巴斯（歐林巴斯（OLYMPUS）相差顯微鏡）相差顯微鏡u相差顯微鏡的使用方法相差顯微鏡的使用方法 1. 相差裝置的安裝相差裝置的安裝 ：轉(zhuǎn)盤聚光鏡：轉(zhuǎn)盤聚光鏡 綠色濾光片綠色濾光片 2. 相差物鏡的安裝相差物鏡的安裝 3. 安放標本安放標本 4. 對光對光 5. 調(diào)焦：用粗調(diào)控制鈕和微調(diào)控制鈕調(diào)節(jié)焦，看清調(diào)焦：用粗調(diào)控制鈕和微調(diào)控制鈕調(diào)節(jié)焦，看清物象時為止物象時為止 6. 旋轉(zhuǎn)