實驗九 酶的特性

1、實驗九：酶的特性實驗九：酶的特性實驗?zāi)康模杭由顚γ傅男再|(zhì)的認(rèn)識。實驗內(nèi)容：1.溫度對酶活力的影響2.pH對酶活力的影響3.酶的激活及抑制劑4.酶的專一性溫度對酶活力的影響溫度對酶活力的影響一、原理：一、原理： 酶的催化作用受溫度的影響，在最適溫度下，酶的反應(yīng)速度最高。大多數(shù)動物酶的最適溫度為3740，植物酶的最適溫度為5060 。 酶對溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān)。由些酶的干燥制劑，雖加熱到100，其活性并無明顯改變，但在100的溶液中卻很快地完全失去活性。 低溫能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。二、器材：二、器材：1)試管及試管架2)恒溫水浴3)冰浴4)沸水浴三、試劑和材料：三、試劑和材

2、料：1)含0.2淀粉的0.3NaCl溶液150ml，需新鮮配制 2)稀釋200倍的唾液50ml：用蒸餾水漱口，以清除事物殘渣，再含一口蒸餾水，半分鐘后使其流入量筒并稀釋200倍，混勻備用。3)KI碘溶液50ml：將KI20g及碘10g溶于100ml水中。使用前稀釋10倍。四、操作方法：四、操作方法： 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈藍(lán)色。糊精按其分子的大小，淀粉和可溶性淀粉遇碘呈藍(lán)色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色或紅色。最簡單的糊精遇碘遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色或紅色。最簡單的糊精遇碘不呈顏色，麥芽糖遇碘也不呈色。在不同溫度下，淀粉被不呈顏色，麥芽糖遇碘也不呈色。在不同溫度下，淀粉被唾

3、液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈現(xiàn)的顏色來判斷。來判斷。取三支試管，編號后按下表加入試劑：取三支試管，編號后按下表加入試劑：管號管號123淀粉溶液（淀粉溶液（ml）1.51.51.5稀釋唾液（稀釋唾液（ml）11煮沸過的稀釋煮沸過的稀釋唾液（唾液（ml）1 搖勻后，將搖勻后，將1號、號、3號兩試管放入號兩試管放入37 恒恒溫水浴中，溫水浴中，2 2號試管放入冰中，號試管放入冰中，10min10min后去后去處，（將處，（將2 2號管內(nèi)液體分為兩半）用號管內(nèi)液體分為兩半）用KIKI碘碘溶液來檢驗溶液來檢驗1 1、2 2、3 3管內(nèi)淀粉被唾

4、液淀粉酶管內(nèi)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。記錄并解釋結(jié)果，將水解的程度。記錄并解釋結(jié)果，將2 2號管剩號管剩下的一半溶液放入下的一半溶液放入3737水浴中繼續(xù)保溫水浴中繼續(xù)保溫10min10min后，再用碘液實驗，結(jié)果如何？后，再用碘液實驗，結(jié)果如何？pH對酶活性的影響對酶活性的影響一、原理一、原理 酶的活力受環(huán)境酶的活力受環(huán)境pH的影響極為顯著。不同酶的最適的影響極為顯著。不同酶的最適pH值不同。本實驗觀值不同。本實驗觀察察pH對唾液淀粉酶活性的影響，唾液淀粉酶的最適對唾液淀粉酶活性的影響，唾液淀粉酶的最適pH約為約為6.8。二、器材二、器材1)試管及試管架試管及試管架2)吸管吸管3)滴管滴管

5、4)50ml錐形瓶錐形瓶5)恒溫水浴恒溫水浴三、試劑和材料三、試劑和材料1)新配制的溶于新配制的溶于0.3NaCl的的0.5淀粉溶液淀粉溶液 250ml2)稀釋稀釋200倍的新鮮唾液倍的新鮮唾液 100ml3)0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液磷酸氫二鈉溶液 600ml4)0.1mol/L檸檬酸溶液檸檬酸溶液 400ml5)KI碘溶液碘溶液 50ml6)pH試紙：試紙： pH=5、 pH=5.8、 pH=6.8、 pH=8四種四種四、操作方法：四、操作方法： 取四個標(biāo)有號碼的取四個標(biāo)有號碼的50ml錐形瓶。用吸管按下表添錐形瓶。用吸管按下表添加加0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和磷酸氫二鈉溶液和0.

6、1檸檬酸溶液以制備檸檬酸溶液以制備pH5.08.0的四種緩沖液。的四種緩沖液。 從四個錐形瓶中各取緩沖液從四個錐形瓶中各取緩沖液3ml，分別注入，分別注入4支支帶有號碼的試管中，隨后于每個試管中添加帶有號碼的試管中，隨后于每個試管中添加0.5淀淀粉溶液粉溶液2ml和稀釋和稀釋200倍的唾液倍的唾液2ml。向各試管中加入。向各試管中加入稀釋唾液的時間間隔各為稀釋唾液的時間間隔各為1min。將各試管內(nèi)容物混。將各試管內(nèi)容物混勻，并依次置于勻，并依次置于37 恒溫水浴中保溫。恒溫水浴中保溫。 第四管加入唾液第四管加入唾液2min后，每隔后，每隔1min由第由第3管取出一管取出一滴混和液，置于白瓷板上

7、，加滴混和液，置于白瓷板上，加1小滴小滴KI碘溶液，檢碘溶液，檢驗淀粉的水解程度。待混和液變?yōu)樽攸S色時，向所驗淀粉的水解程度。待混和液變?yōu)樽攸S色時，向所有試管依次添加有試管依次添加12滴滴KI碘溶液。添加碘溶液。添加KI碘溶碘溶液的時間間隔從第一管起，亦均為液的時間間隔從第一管起，亦均為1min。 觀察各試管內(nèi)容物呈現(xiàn)的顏色，分析觀察各試管內(nèi)容物呈現(xiàn)的顏色，分析pH對唾液對唾液淀粉酶活性的影響。淀粉酶活性的影響。錐形瓶錐形瓶號碼號碼0.2mol/L磷酸氫二磷酸氫二鈉（鈉（ml）0.1 mol/L檸檸檬酸（檬酸（ml）pH15.154.855.026.053.955.837.722.286.84

8、9.720.288.0唾液淀粉酶的活化和抑制唾液淀粉酶的活化和抑制一、原理一、原理 酶的活性受活化劑或抑制劑的影響。氯離子為唾液淀粉酶酶的活性受活化劑或抑制劑的影響。氯離子為唾液淀粉酶的活化劑，銅離子為其抑制劑。的活化劑，銅離子為其抑制劑。二、器材：二、器材：1)恒溫水浴恒溫水浴2)試管及試管架試管及試管架三、試劑和材料：三、試劑和材料：1)0.1的淀粉溶液的淀粉溶液 150ml2)稀釋稀釋200倍的新鮮唾液倍的新鮮唾液 150ml3)1NaCl溶液溶液 50ml4)1硫酸銅溶液硫酸銅溶液 50ml5)1硫酸鈉溶液硫酸鈉溶液 50ml6)KI碘溶液碘溶液 100ml 四、操作方法：四、操作方法

9、：管號管號12340.1的淀粉溶液（的淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5稀釋唾液（稀釋唾液（ml）0.50.50.50.51硫酸銅溶液（硫酸銅溶液（ml）0.51NaCl溶液（溶液（ml）0.51硫酸鈉溶液（硫酸鈉溶液（ml）0.5蒸餾水（蒸餾水（ml）0.537 恒溫水浴、保溫恒溫水浴、保溫10minKI碘溶液（滴）碘溶液（滴）23232323現(xiàn)象現(xiàn)象注：保溫時間可根據(jù)各人唾液淀粉酶活力調(diào)整解釋說明，說明本實驗第3管的意義酶的專一性酶的專一性一、原理一、原理 酶具有高度的專一性。本實驗以唾液淀酶具有高度的專一性。本實驗以唾液淀粉酶和蔗糖酶的作用為例，來說明酶的專粉酶和蔗糖酶的作用為例，

10、來說明酶的專一性。一性。 淀粉和蔗糖無還原性，唾液淀粉酶水淀粉和蔗糖無還原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成由還原性的麥芽糖，但不能催解淀粉生成由還原性的麥芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解產(chǎn)化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解產(chǎn)生還原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉生還原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用的水解。用Benedict試劑檢查糖的還原性。試劑檢查糖的還原性。二、器材：二、器材：1)恒溫水浴恒溫水浴2)沸水浴沸水浴3)試管及試管架試管及試管架三、試劑和材料：三、試劑和材料：1)2蔗糖溶液蔗糖溶液 150ml2)溶于溶于0.3NaCl的的1淀粉溶液（需新鮮配制）淀粉溶液（需新

11、鮮配制） 150ml3)稀釋稀釋200倍的新鮮唾液倍的新鮮唾液 100ml4)蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液 100ml 將啤酒廠的鮮酵母用水洗滌將啤酒廠的鮮酵母用水洗滌23次（離心），然后放在濾紙上自然次（離心），然后放在濾紙上自然干燥。取干酵母干燥。取干酵母100g，置于乳缽內(nèi)，添加適量蒸餾水及少量細(xì)沙，置于乳缽內(nèi)，添加適量蒸餾水及少量細(xì)沙，用力研磨，提取約用力研磨，提取約1h，再加蒸餾水使總體積約為原體積的，再加蒸餾水使總體積約為原體積的10倍。離倍。離心，將上清液保存于冰箱中備用。心，將上清液保存于冰箱中備用。5)Benedict氏試劑氏試劑 200ml 無水硫酸銅無水硫酸銅1.74g溶于溶于1

12、00ml熱水中，冷卻后稀釋至熱水中，冷卻后稀釋至150ml。取檸檬。取檸檬酸鈉酸鈉173g，無水碳酸鈉，無水碳酸鈉100g和和600ml水共熱，溶解后冷卻并加水至水共熱，溶解后冷卻并加水至850ml。再將冷卻的。再將冷卻的150ml硫酸銅溶液傾入。本試劑可長久保存。硫酸銅溶液傾入。本試劑可長久保存。四、操作方法：四、操作方法：1.淀粉酶的專一性：管號管號1234561淀粉溶液（滴）淀粉溶液（滴）4442蔗糖溶液（滴）蔗糖溶液（滴）444稀釋唾液（稀釋唾液（ml）11煮沸過的稀釋唾液煮沸過的稀釋唾液（ml）11蒸餾水（蒸餾水（ml）1137 恒溫水浴恒溫水浴15minBenedict試劑（試劑（ml）111111沸水浴沸水浴23min現(xiàn)象現(xiàn)象 解釋實驗結(jié)果（提示：唾液除含淀粉酶外還含有少量麥芽糖酶）解釋實驗結(jié)果（提示：唾液除含淀粉酶外還含