DNA粗提取與鑒定實驗

1、1 1. .提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路選選用一定的用一定的 或或 方法分離具有不同方法分離具有不同_的生物大分子。的生物大分子。2 2. .提取提取DNADNA的思路的思路：利利用用DNADNA與與 、 和和 等在等在 和和 性質(zhì)方面的差異，提取性質(zhì)方面的差異，提取DNADNA，去除其他成分。，去除其他成分。一、提取一、提取DNADNA的方法的方法物理物理化學(xué)化學(xué)物理或化學(xué)性質(zhì)物理或化學(xué)性質(zhì)RNA蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)脂質(zhì)脂質(zhì)物理物理化學(xué)化學(xué)DNADNA粗提取與鑒定粗提取與鑒定 回扣基礎(chǔ)知識點回扣基礎(chǔ)知識點3 3. .原理原理(1)DNA(1)DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的和

2、蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的 溶液中溶液中溶解度不同。利用這一特點，選擇適當(dāng)?shù)娜芙舛炔煌?。利用這一特點，選擇適當(dāng)?shù)?就能使就能使DNADNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達到分離的目的。充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達到分離的目的。NaCl鹽濃度鹽濃度( (2 2) ) 能水解蛋白質(zhì)，但對能水解蛋白質(zhì)，但對DNADNA沒有影響。大多數(shù)蛋沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受白質(zhì)不能忍受 的高溫，而的高溫，而DNADNA在在 以上以上才會變性。洗滌劑能瓦解才會變性。洗滌劑能瓦解 ，但對，但對DNADNA沒有影響。沒有影響。( (3 3)DNA)DNA不溶于不溶于 ，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶

3、于，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于此溶液。此溶液。酒精酒精蛋白酶蛋白酶608080細(xì)胞膜細(xì)胞膜4 4. .DNADNA的鑒定的鑒定在在 的條件下，的條件下，DNADNA遇二苯胺會染成遇二苯胺會染成 。注意二苯胺試劑要注意二苯胺試劑要 。沸水浴沸水浴藍(lán)色藍(lán)色現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用通常選用通常選用2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液溶解細(xì)胞中的溶液溶解細(xì)胞中的_，此時雜質(zhì)，此時雜質(zhì)易沉淀；在易沉淀；在0.14 mol/LNaCl0.14 mol/LNaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度溶解度_，可使，可使_。DNADNA最小最小DNADNA析出析出1 1. .利用利用DNADNA的溶解特性粗提

4、取的溶解特性粗提取DNADNADNADNA與蛋白質(zhì)在不同濃度的與蛋白質(zhì)在不同濃度的NaClNaCl溶液中溶解度不同。溶液中溶解度不同。溶解特性溶解特性質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為2 2 mol/Lmol/LNaClNaCl溶液溶液質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為0.14 mol/L0.14 mol/LNaClNaCl溶液溶液DNADNA在在NaClNaCl溶液中，質(zhì)量濃溶液中，質(zhì)量濃度為度為0.14 mol/L0.14 mol/L時溶解時溶解度最小度最小溶解溶解析出析出蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)NaClNaCl的質(zhì)量濃度從的質(zhì)量濃度從2 2 mol/Lmol/L降低過程中，溶解降低過程中，溶解度逐漸增大度逐漸增大部分發(fā)生鹽析部

5、分發(fā)生鹽析溶解溶解考點一考點一 DNADNA提取與鑒定原理提取與鑒定原理DNADNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可將用這一原理，可將DNADNA與蛋白質(zhì)進一步分離。與蛋白質(zhì)進一步分離。NaClNaCl溶液溶液酒精酒精( (體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為95%95%的冷酒精的冷酒精) )DNADNA不溶不溶蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)NaClNaCl溶液質(zhì)量濃度從溶液質(zhì)量濃度從2 mol/L2 mol/L逐逐漸稀釋的過程中溶解度逐漸增大漸稀釋的過程中溶解度逐漸增大某些蛋白質(zhì)可溶某些蛋白質(zhì)可溶思考：為思考：為提取到提取到DNADNA，曾

6、先后使用不同濃度的，曾先后使用不同濃度的NaClNaCl溶液，則在溶液，則在質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液及溶液及0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中應(yīng)取溶液中應(yīng)取濾液，還是濾得的固體物？濾液，還是濾得的固體物？在質(zhì)量濃度為在質(zhì)量濃度為2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA呈溶解狀態(tài)，應(yīng)取濾呈溶解狀態(tài)，應(yīng)取濾液，在質(zhì)量濃度為液，在質(zhì)量濃度為0.14 mol/L NaCl0.14 mol/L NaCl溶液中溶液中DNADNA溶解度極低，溶解度極低，易析出，應(yīng)取固體物。易析出，應(yīng)取固體物。2.

7、2.利用利用DNADNA對酶、高溫及洗滌劑的耐受性提取對酶、高溫及洗滌劑的耐受性提取DNA(DNA(見下表見下表) )DNADNA蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白酶蛋白酶沒影響沒影響水解水解高溫高溫80 80 以上才會變性以上才會變性606080 80 會變性會變性洗滌劑洗滌劑沒影響沒影響瓦解細(xì)胞膜瓦解細(xì)胞膜特別提醒特別提醒(1)(1)甲基綠可將甲基綠可將DNADNA染成綠色，且不需水浴加熱。二苯胺鑒定染成綠色，且不需水浴加熱。二苯胺鑒定DNADNA屬于顏色反應(yīng)，需要水浴加熱屬于顏色反應(yīng)，需要水浴加熱5 min5 min，可使，可使DNADNA呈藍(lán)色。呈藍(lán)色。(2)(2)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變成

8、淺藍(lán)色，影響二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變成淺藍(lán)色，影響鑒定效果。鑒定效果。歸納歸納 DNADNA的粗提取原理及目的歸納的粗提取原理及目的歸納基本原理基本原理方法方法目的目的DNADNA在不同濃度的在不同濃度的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度不同，在質(zhì)量濃度不同，在質(zhì)量濃度為度為0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度最低度最低溶于溶于NaClNaCl溶溶液中并稀釋液中并稀釋NaClNaCl溶液質(zhì)量濃度為溶液質(zhì)量濃度為2 2 mol/Lmol/L時，時，DNADNA溶解，而部分蛋溶解，而部分蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析而生成沉淀，通白質(zhì)發(fā)生鹽析而

9、生成沉淀，通過過濾可除去部分蛋白質(zhì)及不過過濾可除去部分蛋白質(zhì)及不溶于溶于NaClNaCl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)當(dāng)當(dāng)NaClNaCl溶液稀釋至質(zhì)量濃度溶液稀釋至質(zhì)量濃度為為0.14 mol/L0.14 mol/L時，時，DNADNA析析出，過濾可除去溶于出，過濾可除去溶于NaClNaCl中的中的部分蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)部分蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)DNADNA不被蛋白酶所不被蛋白酶所水解水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)DNADNA不溶于酒精溶不溶于酒精溶液液加入冷卻酒加入冷卻酒精精( (體積分體積分?jǐn)?shù)為數(shù)為95%)95%)DNADNA析出，除去溶于酒精的蛋

10、析出，除去溶于酒精的蛋白質(zhì)白質(zhì)1.1.蛋蛋白酶能將蛋白質(zhì)水解而使染色質(zhì)中的白酶能將蛋白質(zhì)水解而使染色質(zhì)中的DNADNA分離出來。下列分離出來。下列藥品可達到上述同一目的的是藥品可達到上述同一目的的是( () )A A. .蒸餾水蒸餾水 B B. .NaClNaCl溶液溶液C C. .NaOHNaOH溶液溶液 D D. .鹽酸鹽酸2.(20132.(2013江蘇江蘇) )某同學(xué)用洋蔥進行某同學(xué)用洋蔥進行DNADNA粗提取和鑒定實驗，操作粗提取和鑒定實驗，操作錯誤的是錯誤的是 ( )( )A.A.加入洗滌劑后用力進行快速、充分的研磨加入洗滌劑后用力進行快速、充分的研磨B.B.用蛋白酶純化過濾后的研

11、磨液中的用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNADNAC.C.加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌D.D.加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱B BA A學(xué)以致用學(xué)以致用3.3.關(guān)于關(guān)于DNADNA粗提取與鑒定實驗的有關(guān)說法正確的是粗提取與鑒定實驗的有關(guān)說法正確的是( )( )A.A.充分溶解充分溶解DNADNA的鹽溶液是的鹽溶液是0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B.B.實驗中提取較純凈的實驗中提取較純凈的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的特點不溶于酒精的特點C.C.對最后提取出對最后提取出DNADNA用二苯胺試

12、劑鑒定時需用酒精燈直接加熱用二苯胺試劑鑒定時需用酒精燈直接加熱D.D.實驗操作過程中先后兩次加入蒸餾水的作用相同實驗操作過程中先后兩次加入蒸餾水的作用相同4.4.下列關(guān)于下列關(guān)于DNADNA粗提取與鑒定的說法正確的是粗提取與鑒定的說法正確的是 ( )( )A.A.析出析出DNADNA時要緩慢地加蒸餾水，當(dāng)析出黏稠物時即不再加水時要緩慢地加蒸餾水，當(dāng)析出黏稠物時即不再加水B.B.在探究洗滌劑對植物細(xì)胞在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNADNA提取的影響實驗中，自變量是提取的影響實驗中，自變量是洗滌劑和食鹽洗滌劑和食鹽C.C.提取的提取的DNADNA溶解后加入二苯胺試劑即可染成藍(lán)色溶解后加入二苯胺試劑即可

13、染成藍(lán)色D.D.將含有將含有DNADNA的濾液放在的濾液放在60607575的恒溫水浴箱中保溫后過濾，的恒溫水浴箱中保溫后過濾，能去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)能去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)A AD D1 1. .實驗材料的選取實驗材料的選取選選用用 含量相對較高的生物組織。含量相對較高的生物組織。2 2. .破碎細(xì)胞，獲取含破碎細(xì)胞，獲取含DNADNA的濾液的濾液(1)(1)動動物細(xì)胞的破碎物細(xì)胞的破碎以雞血為例以雞血為例在雞血細(xì)胞液中加入一定量的在雞血細(xì)胞液中加入一定量的 ，同時用玻璃棒，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集攪拌，過濾后收集 即可。即可。二、二、DNADNA粗提取實驗流程粗提取實驗流程 DNADNA蒸餾水蒸餾水

14、濾液濾液(2)(2)植物細(xì)胞的破碎植物細(xì)胞的破碎以洋蔥為例以洋蔥為例先將洋蔥切碎，然后先將洋蔥切碎，然后加入一定量加入一定量 _；進行充進行充分分 和和 _，過濾后收集研磨液。過濾后收集研磨液。攪拌攪拌研磨研磨洗滌劑和食鹽洗滌劑和食鹽思考：思考：用用豬的血液與雞的血液提取豬的血液與雞的血液提取DNADNA哪個效果更好？哪個效果更好？用雞的血液；因為雞血細(xì)胞核用雞的血液；因為雞血細(xì)胞核DNADNA含量豐富，材料易得，而豬含量豐富，材料易得，而豬的紅細(xì)胞無細(xì)胞核的紅細(xì)胞無細(xì)胞核DNADNA含量少。含量少。思考：思考：1 1. .為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？蒸

15、餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，就加速入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂了雞血細(xì)胞的破裂( (細(xì)胞膜和核膜的破裂細(xì)胞膜和核膜的破裂) )，從而釋放出，從而釋放出DNADNA。2 2. .加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNADNA的釋放；的釋放；食鹽的主要成分是食鹽的主要成分是NaClNaCl，有利于，有利于DNADNA

16、的溶解。的溶解。3 3. .在處理植物組織時需要進行研磨，其目的是什么？如果研磨在處理植物組織時需要進行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生什么影響？不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生什么影響？破碎細(xì)胞壁，使破碎細(xì)胞壁，使DNADNA更多地溶解在更多地溶解在NaClNaCl溶液中溶液中, ,研磨不充分會使研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的細(xì)胞核內(nèi)的DNADNA釋放不完全，提取的釋放不完全，提取的DNADNA量少，影響實驗結(jié)果，量少，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。3.3.去除濾液中的雜質(zhì)去除濾液中的雜質(zhì)最初獲得的最初獲得

17、的DNADNA濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進一步提濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進一步提純純DNADNA。具體做法如下：。具體做法如下：方案一：濾液方案一：濾液NaCl(2 mol/L)NaCl(2 mol/L)過濾除去雜質(zhì)過濾除去雜質(zhì)加入蒸餾水加入蒸餾水使使NaClNaCl溶液濃度為溶液濃度為0.14 mol/LDNA0.14 mol/LDNA析出析出過濾得到過濾物過濾得到過濾物放到放到2 mol/LNaCl2 mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNADNANaClNaCl溶解液溶解液方案二：濾液方案二：濾液嫩肉粉嫩肉粉( (木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶)靜置靜置101015 min15

18、min過過濾獲得濾獲得DNADNA濾液濾液方案三：濾液方案三：濾液60607575處理處理過濾獲得過濾獲得DNADNA濾液濾液方案一的原理是方案一的原理是_；方案二的原理是方案二的原理是_；方案三的原理是方案三的原理是_。DNA在不同濃度在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同的變性溫度不同思考：思考：1.1.過濾時應(yīng)當(dāng)選用濾紙還是尼龍布？過濾時應(yīng)當(dāng)選用濾紙還是尼龍布？ 選用尼龍布進行過濾選用尼龍布進行過濾2.2.方案二與方案三的原理有什么不同？方案二與方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶

19、分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNADNA與蛋與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是白質(zhì)分開；方案三利用的是DNADNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNADNA分離。分離。3.3.為什么反復(fù)地溶解與析出為什么反復(fù)地溶解與析出DNADNA，能夠去除雜質(zhì)？，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解用高鹽濃度的溶液溶解DNADNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使質(zhì)；用低鹽濃度使DNADNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)

20、溶解與析出質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNADNA，就能夠除去與，就能夠除去與DNADNA溶溶解度不同的多種雜質(zhì)解度不同的多種雜質(zhì)4 4. .DNADNA的進一步提純的進一步提純利利用用DNADNA不溶于不溶于冷卻冷卻的的 這一原理，可從溶液中這一原理，可從溶液中析出較純凈的析出較純凈的DNADNA，此時，此時DNADNA的狀態(tài)為的狀態(tài)為 。5 5. .DNADNA的鑒定的鑒定將將呈絲狀物的呈絲狀物的DNADNA溶解于溶解于5 mL5 mL質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為 溶液溶液中，再加入中，再加入4 mL4 mL的的 試劑，試劑， 加熱加熱5 min5 min，冷卻后觀察溶液的顏色。注意要同時設(shè)置冷卻

21、后觀察溶液的顏色。注意要同時設(shè)置 實驗。實驗。酒精溶液酒精溶液白色絲狀物白色絲狀物2mol/L的的NaCl二苯胺二苯胺沸水沸水對照對照1 1. .實驗材料的選取實驗材料的選取本本實驗用實驗用雞血細(xì)胞雞血細(xì)胞作實驗材料有兩個原因：一是因為雞血細(xì)胞作實驗材料有兩個原因：一是因為雞血細(xì)胞的核的核DNADNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水漲破，含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水漲破，而用動物肝臟細(xì)胞等作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備而用動物肝臟細(xì)胞等作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。要求較高，操作繁瑣，歷時較長?？键c二考點二 實驗設(shè)計實驗設(shè)計（1 1

22、）不同生物的組織中）不同生物的組織中DNADNA含量不同含量不同在選取材料時，應(yīng)本著在選取材料時，應(yīng)本著DNADNA含量高、材料易得、便于提取的原則。含量高、材料易得、便于提取的原則。（2 2）材料不同所采用的提取方法不同）材料不同所采用的提取方法不同植物組織：取材植物組織：取材研磨研磨過濾過濾沉淀。沉淀。在切碎的洋蔥中加入在切碎的洋蔥中加入一定量的洗滌劑和食鹽一定量的洗滌劑和食鹽(洗滌劑能夠溶解細(xì)胞膜洗滌劑能夠溶解細(xì)胞膜)，充分?jǐn)嚢韬脱?，充分?jǐn)嚢韬脱心?，過濾后收集磨，過濾后收集研磨研磨液液雞血：制備雞血細(xì)胞液雞血：制備雞血細(xì)胞液提取核提取核DNADNA溶解細(xì)胞核內(nèi)溶解細(xì)胞核內(nèi)DNADNA析析

23、出并濾取出并濾取DNADNADNADNA再溶解再溶解提取較純凈的提取較純凈的DNADNA。2 2. .提取提取DNADNA的具體步驟的具體步驟 (2)(2)溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNADNA：濾液質(zhì)量濃度為：濾液質(zhì)量濃度為2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液 (3)(3)過濾：除去不溶的雜質(zhì)，得濾液過濾：除去不溶的雜質(zhì)，得濾液 (4)(4)析出含析出含DNADNA的黏稠物：向濾液中緩緩加入蒸餾水，并用玻的黏稠物：向濾液中緩緩加入蒸餾水，并用玻璃棒輕輕沿一個方向不停地攪拌，直到絲狀物不再增加時，璃棒輕輕沿一個方向不停地攪拌，直到絲狀物不再增加時，停止加水停止加水( (此時此時NaC

24、lNaCl質(zhì)量濃度約為質(zhì)量濃度約為0.14 mol/L)0.14 mol/L)(5)(5)過濾：用過濾：用多層紗布多層紗布過濾，含過濾，含DNADNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上(6)DNA(6)DNA的黏稠物再溶解：將其溶解在質(zhì)量濃度為的黏稠物再溶解：將其溶解在質(zhì)量濃度為2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶溶液中液中(7)(7)過濾：用過濾：用兩層紗布兩層紗布濾得含濾得含DNADNA的濾液的濾液(8)(8)對對DNADNA進一步提純：向濾液中加入與濾液體積相等的、進一步提純：向濾液中加入與濾液體積相等的、冷卻冷卻的的體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為95%95%的酒精，靜置的酒精

25、，靜置2 23 min3 min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，即粗提取的即粗提取的DNADNA(9)DNA(9)DNA的鑒定的鑒定比較比較加入物質(zhì)加入物質(zhì)結(jié)果結(jié)果圖示圖示實驗實驗組組均加入：均加入：4 mL4 mL二苯胺二苯胺試劑試劑質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液溶液5 mL5 mL絲狀物絲狀物(DNA)(DNA)溶液溶液逐漸逐漸變藍(lán)變藍(lán)對照對照組組不不變變藍(lán)藍(lán)共共“兩次蒸餾水，三次過濾，兩次析出，六次攪拌兩次蒸餾水，三次過濾，兩次析出，六次攪拌”討論：討論：兩次蒸餾水兩次蒸餾水第一次：細(xì)胞吸水脹破第一次：細(xì)胞吸水脹破 第二次：使第

26、二次：使 DNADNA黏稠物析出黏稠物析出此實驗過程中有幾次使用蒸餾水？幾次過濾，幾次析出，幾次攪此實驗過程中有幾次使用蒸餾水？幾次過濾，幾次析出，幾次攪拌？分別在哪一步？拌？分別在哪一步？三次過濾三次過濾第一次：第一次： DNADNA存在于濾液里存在于濾液里 第一步第一步第二次：第二次： DNADNA被留在紗布上被留在紗布上 第四步第四步第三次：第三次： DNADNA存在于濾液里存在于濾液里 第六步第六步過濾時使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)，過濾時使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)，第二次要第二次要用其濾出的黏稠物有關(guān)，所以要使用多層紗布，用其濾出的黏稠物有關(guān)，所以要使用多層紗布，第

27、一次和第第一次和第三次均要用其濾液，使用的紗布為三次均要用其濾液，使用的紗布為1 12 2層層兩次析出兩次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液含雜質(zhì)多溶液含雜質(zhì)多第三步第三步第二次：用冷卻的第二次：用冷卻的9595的酒精的酒精第七步第七步六次攪拌：第一、二、三、五、七步六次攪拌：第一、二、三、五、七步其中除第八步外，其中除第八步外，其余均要朝一個方向攪拌其余均要朝一個方向攪拌，在第，在第三、五步三、五步攪動還要輕緩攪動還要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，這樣才能保證得，玻璃棒不要直插燒杯底部，這樣才能保證得到完整的到完整的DNADNA討論：實驗

28、結(jié)果不明顯，可能是什么原因？討論：實驗結(jié)果不明顯，可能是什么原因？1.1.材料未充分研磨成糊狀材料未充分研磨成糊狀2.2.加入酒精后振動或攪拌時過猛，加入酒精后振動或攪拌時過猛，DNADNA被破壞被破壞3.3.二苯胺配制時間過長，最好現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變二苯胺配制時間過長，最好現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺會變成淺藍(lán)色成淺藍(lán)色4.4.析出含析出含DNADNA的黏稠物中，蒸餾水不能一次快速倒入，否的黏稠物中，蒸餾水不能一次快速倒入，否則會影響結(jié)果則會影響結(jié)果5.5.實驗中多個步驟要用玻璃棒進行攪拌，不同步驟中用法實驗中多個步驟要用玻璃棒進行攪拌，不同步驟中用法不同，做實驗時如果不注意，會影響實驗結(jié)果不

29、同，做實驗時如果不注意，會影響實驗結(jié)果特別提醒特別提醒(1)(1)做做該實驗時，不能用豬血代替雞血，因為哺乳動物成熟該實驗時，不能用豬血代替雞血，因為哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，不能提取的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，不能提取DNADNA。(2)(2)制備雞血細(xì)胞液時，要注意向雞血中加檸檬酸鈉，防止制備雞血細(xì)胞液時，要注意向雞血中加檸檬酸鈉，防止血液凝固血液凝固, ,靜置后上層是血漿，下層為所需要的血細(xì)胞。靜置后上層是血漿，下層為所需要的血細(xì)胞。(3)(3)漲破細(xì)胞的方法：向血細(xì)胞中加入蒸餾水，血細(xì)胞溶液漲破細(xì)胞的方法：向血細(xì)胞中加入蒸餾水，血細(xì)胞溶液的濃度大于蒸餾水的濃度，從而使血細(xì)胞大量吸水而

30、漲破。的濃度大于蒸餾水的濃度，從而使血細(xì)胞大量吸水而漲破。不能用生理鹽水，因為血細(xì)胞溶液的濃度與生理鹽水的濃度不能用生理鹽水，因為血細(xì)胞溶液的濃度與生理鹽水的濃度相當(dāng)，所以血細(xì)胞在生理鹽水中不能吸收水分。相當(dāng)，所以血細(xì)胞在生理鹽水中不能吸收水分。(4)(4)兩次加入蒸餾水，第一次是為了使血細(xì)胞吸水漲破兩次加入蒸餾水，第一次是為了使血細(xì)胞吸水漲破, ,釋放釋放出核內(nèi)的出核內(nèi)的DNADNA；第二次是為了降低氯化鈉的濃度，有利于；第二次是為了降低氯化鈉的濃度，有利于DNADNA的析出。的析出。(5)(5)兩次析出兩次析出DNADNA的方法：的方法：第一次是加入蒸餾水，降低氯化鈉的濃度，促使第一次是加

31、入蒸餾水，降低氯化鈉的濃度，促使DNADNA析出；析出；第二次是加入冷酒精，因為第二次是加入冷酒精，因為DNADNA不溶于酒精溶液。不溶于酒精溶液。( (6 6) )在在DNADNA粗提取中三次過濾時，粗提取中三次過濾時，DNADNA存在的部分及所用的紗存在的部分及所用的紗布層數(shù)不同：布層數(shù)不同：第一次過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液，是為了得到含第一次過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液，是為了得到含DNADNA的濾液，使用的紗布為的濾液，使用的紗布為1 12 2層。層。第二次過濾含有黏稠物的第二次過濾含有黏稠物的NaClNaCl溶液，是為了得到從低濃度的溶液，是為了得到從低濃度的NaClNaCl溶

32、液中析出的附著在紗布上的含溶液中析出的附著在紗布上的含DNADNA的黏稠物，所用的的黏稠物，所用的紗布為多層。紗布為多層。第三次過濾溶解有第三次過濾溶解有DNADNA的的NaClNaCl溶液，目的是為了使溶液，目的是為了使DNADNA再溶解，再溶解，所以只要用兩層紗布即可。所以只要用兩層紗布即可。1.(20121.(2012江蘇江蘇) )下列關(guān)于下列關(guān)于“DNADNA粗提取與鑒定實驗粗提取與鑒定實驗”的敘述，的敘述，正確的是正確的是 ( )( )A.A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度B.B.將將DNADNA絲狀物放入

33、二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)C.C.常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNADNA的提取的提取D.D.用玻棒緩慢攪拌濾液會導(dǎo)致用玻棒緩慢攪拌濾液會導(dǎo)致DNADNA獲得量減少獲得量減少2 2. .(2011(2011江蘇江蘇) )在利用雞血進行在利用雞血進行“DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定”的實驗中，下列相關(guān)敘述正確的是的實驗中，下列相關(guān)敘述正確的是 ( ( ) ) A A. .用蒸餾水將用蒸餾水將NaClNaCl溶液質(zhì)量濃度調(diào)至溶液質(zhì)量濃度調(diào)至0.14 mol/L0.14 mol/L，濾去析，濾去析出物出物B B. .調(diào)

34、節(jié)調(diào)節(jié)NaClNaCl溶液質(zhì)量濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除溶液質(zhì)量濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質(zhì)部分雜質(zhì)C C. .將絲狀物溶解在質(zhì)量濃度為將絲狀物溶解在質(zhì)量濃度為2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中，加入溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色二苯胺試劑即呈藍(lán)色D D. .用菜花替代雞血作為實驗材料，其實驗操作步驟相同用菜花替代雞血作為實驗材料，其實驗操作步驟相同C C課堂鞏固課堂鞏固B B3.3.下圖為下圖為“DNADNA粗提取和鑒定粗提取和鑒定”實驗的相關(guān)操作。這些操作目的實驗的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是正確的是( () )A A. .是洗滌紅細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)是洗滌紅細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)B B. .是溶解是溶解DNADNA