天然產(chǎn)物化學(xué)課程論文

1、天然產(chǎn)物化學(xué)課程設(shè)計(jì)論文天然產(chǎn)物化學(xué)課程設(shè)計(jì)論 文題 目：香椿葉中槲皮素的提取分離與鑒定 姓 名： 劉子發(fā) 學(xué) 號： 20130401310019 院 系： 材料與化工 專 業(yè)： 13應(yīng)用化學(xué) 完成日期：2016 年 05月 16 日香椿葉中槲皮素的提取分離與測定摘 要 本文主要介紹了槲皮素的結(jié)構(gòu)和各種物化性質(zhì)及其藥理作用，繼而對槲皮素的提取分離方法進(jìn)行綜述，還敘述了黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定方法。后續(xù)提出實(shí)驗(yàn)方案，對香椿葉中槲皮素的提取分離以及測定方法進(jìn)行了研究，用萃取的方法從香椿葉中提取黃酮類化合物，然后再運(yùn)用聚酰胺色譜柱法分離出槲皮素。接著對分離出的物質(zhì)測定與結(jié)構(gòu)鑒定。關(guān)鍵詞 ：槲皮素；紫外

2、光譜；超聲提取法；香椿葉；萃?。痪埘０飞V法Abstract This article mainly introduced the structure and various physical and chemical properties of quercetin and its pharmacological action, then for extraction and separation methods of quercetin were summarized, also describes the structure identification methods of flavon

3、oids. Subsequent experiment scheme is put forward, the cedrela sinensis leaves in the extraction and separation of quercetin and determination method were studied, with the extraction method to extract flavonoid compounds from cedrela sinensis leaves, and then using the method of polyamide column ch

4、romatography separation of quercetin. And then to isolate the material identification and structure determination.Keywords：Quercetin；ultraviolet spectrum；ultrasonic extraction；cedar leaf；extraction；polyamide column chromatography1. 文獻(xiàn)綜述1.1 槲皮素結(jié)構(gòu)及物化性質(zhì) 槲皮素是一種多羥基黃酮類化合物，化學(xué)名為3，3，4，5， 7- 五羥基黃酮，具有多種生物學(xué)活性及很

5、高的藥用價值。槲皮素廣泛存在于植物的花、葉、果實(shí)中，已知有 100 多種中草藥中含有槲皮素，如槐米、槐花、 圖1丹皮、香椿葉、菊花、田基黃、車前子、桑寄生、仙鶴草、杠板歸、絞股藍(lán)、山楂、貫葉連翹、菟絲子、銀杏葉、刺五加、白花蛇舌草、雞冠花、魚腥草、余甘子、三白草、番石榴葉、蜜柑草、紫花地丁、垂盆草等。槲皮素，又名櫟精，槲皮黃素，溶于冰醋酸，堿性水溶液呈黃色，幾乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。二水合物為黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇），在95-97°C成為無水物，熔點(diǎn)314°C（分解）。能溶于冷乙醇（1:290），易溶于熱乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，不溶于

6、水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等，堿性水溶液呈黃色，幾乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。黃色針狀結(jié)晶, 槲皮素屬黃酮類化合物，多以甙的形式存在，經(jīng)酸水解可得到槲皮素?？勺鳛樗幤?，具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。櫟精為五羥黃酮，其分子中2、3位間有雙鍵，37、47位處有2個羥基故具有能作為金屬螯合作用或油脂等氧化過程中產(chǎn)生的游離基團(tuán)接受體的功能，可作為油脂、抗壞血酸的抗氧化劑。此外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動脈，增加冠脈血流量等作用。用于治療慢性支氣管炎。對冠心病及高血壓患者也有輔助治療作用。1.2槲皮素等中藥的基本提取方法與原理用于中藥有效成分的提

7、取方法主要是溶劑提取法,溶劑提取法是指利用溶劑對中藥不同成分的溶解性差異,將有效成分提取出來,對不需要的成分盡量少的溶解,從而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。現(xiàn)今中藥中大部分的有效成分,均可以采用溶劑提取法來進(jìn)行提取。溶劑提取法的原理很簡單。將中藥浸泡于溶劑中,溶劑通過擴(kuò)散和滲透作用進(jìn)入到藥物的細(xì)胞內(nèi),將可溶性物質(zhì)溶解。此時細(xì)胞內(nèi)外形成了目標(biāo)成分的濃度差,于是目標(biāo)成分在細(xì)胞內(nèi)外間不斷交換,直至細(xì)胞內(nèi)外濃度達(dá)到動態(tài)平衡。將此溶液濾出,繼續(xù)多次加入新的溶劑,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。傳統(tǒng)的溶劑提取法包括煎煮法、浸漬法、滲流法、回流法、連續(xù)回流提取法、升華法等'。但傳

8、統(tǒng)的溶劑提取法工藝復(fù)雜、流程長,具有許多固有的缺點(diǎn)。下面分別介紹一下傳統(tǒng)的溶劑提取方法及其優(yōu)缺點(diǎn)。煎煮法,是將經(jīng)過處理的藥材,加入適量水加熱煮沸次,使其有效成分煎出,這也是一種簡便、常用的方法。該法能煎出大部分有效成分,但煎出液雜質(zhì)較多,容易霉變、腐敗,并且一些不耐熱或揮發(fā)性成分在煎煮過程中易被破壞、揮發(fā)而損失。浸漬法,是最常見的簡便浸出方法。除特別規(guī)定外,浸漬法一般在常溫下進(jìn)行。其最適用于有效成分遇熱揮發(fā)或易被破壞的藥材。缺點(diǎn)是操作時間長,且往往不易完全浸出有效成分。滲渡法,是用流動的溶劑滲過藥粉而進(jìn)行提取。由于隨時保持相對大的濃度差,故提取效率高,浸出液比較澄清,缺點(diǎn)是溶劑消耗量太大,費(fèi)時

9、,且操作較為麻煩。回流法,是在應(yīng)用乙醇等易揮發(fā)有機(jī)溶劑時,為減少溶劑消耗,提高效率而采用的方法。在回流時要加熱,故對受熱易破壞成分不適用,且溶劑消耗量仍大,操作較麻煩。連續(xù)回流法,又稱索氏提取法。索氏提取器由冷凝器、燒瓶以及帶有虹吸管的提取器這三部分組成。此種方法克服了簡單回流法提取時溶劑量大、操作繁瑣的缺點(diǎn),但仍需較長時間加熱,對受熱易破壞的成分不適用。升華法,是利用中藥中有些成分具有升華的性質(zhì),直接對固體加熱,將可升華的成分氣化,氣體遇冷又凝固為固體,從而達(dá)到提取的目的。但此種方法僅限具有升華性質(zhì)的某些成分使用,并且在升華過程中常伴有揮發(fā)性焦油狀物產(chǎn)生,并粘附在升華物上,不易除去。近年來,

10、一些新的提取分離技術(shù)己開始引入中藥有效成分提取的研究中。這些新方法、新技術(shù)包括超聲提取法、超臨界流體提取法、微波輔助提取法、半仿生提取法、酶法、反膠團(tuán)溶劑提取法、雙水相提取技術(shù)、空氣爆破法、破碎提取法和液泛法等。許多研究結(jié)果表明,與傳統(tǒng)方法相比,這些技術(shù)有產(chǎn)率高、純度高、速度快、物耗能耗少等特點(diǎn),有著廣闊的研究和應(yīng)用前景。本節(jié)將對超聲提取法和超高壓提取法進(jìn)行較深入的介紹。1.3微波提取法 微波技術(shù)在人們的生產(chǎn)生活中應(yīng)用越來越廣泛，此法在黃酮類物質(zhì)的提取上也取得了良好的效果。它的原理是利用磁控管所產(chǎn)生的每秒245億次超高頻率的快速震動，使藥材內(nèi)分子間相互碰撞、擠壓，這樣有利于藥材有效成份的浸出。

11、龔盛昭等用微波協(xié)同提取槐米中蘆丁的研究表明，協(xié)同提取10 min，其提取率941。在銀杏葉中提取黃酮，用60乙醇溶液做萃取溶劑，僅僅用微波處理15 min，用70水浴浸提1 h便可與70水裕浸提4h的黃酮得率相當(dāng)，這大大地降低了成本和時間。微波在提取過程中具有反應(yīng)高效性和強(qiáng)選擇性等特點(diǎn)，而且操作簡便，副產(chǎn)物少，產(chǎn)率高及產(chǎn)物易提純等優(yōu)點(diǎn)；并且浸出過程中藥材細(xì)粉不凝聚，不糊化，克服了熱水法易凝聚易糊化的不足。但微波技術(shù)不適于熱敏性物質(zhì)的提取，而且高頻電場和微波輻射對人體機(jī)能有不利影響，使用時應(yīng)防止微波泄露，注意加強(qiáng)安全防護(hù)措施。此外微波提取是否會影響藥物的穩(wěn)定性、及療

12、效等尚需深入研究和探討。1.4超聲提取法中藥中許多有效化學(xué)成分為細(xì)胞內(nèi)成分,提取時需要破碎細(xì)胞壁或細(xì)胞膜,而現(xiàn)有的化學(xué)和機(jī)械方法破碎細(xì)胞往往很難起到理想的破碎效果,從而影響提取結(jié)果。超聲提取法因其獨(dú)特的提取機(jī)制與理想的提取效果,在中藥化學(xué)成分的提取中已經(jīng)顯示出了明顯的優(yōu)勢。超聲提取法一是近年來應(yīng)用于中藥有效成分提取分離中的一種手段。1.4.1超聲提取法的原理超聲波是一種高頻率的機(jī)械波,一般其頻率高于。現(xiàn)普遍認(rèn)為超聲技術(shù)空化效應(yīng)、熱效應(yīng)和機(jī)械作用是其在中藥提取中的三大理論依據(jù)?？栈饔谩Ｒ后w中存在一些真空的或含有少量氣體或蒸汽的小氣泡,當(dāng)一定頻率的超聲波作用于液體時,尺寸適宜的小泡便能發(fā)生共振現(xiàn)

13、象,大于共振尺寸的小泡被趕出液體,而小于共振尺寸的小泡在超聲作用下會逐漸變大。小泡長大到接近共振尺寸時,聲波的稀疏階段使小泡迅速脹大,在聲波的壓縮階段,小泡又突然被絕熱壓縮,直至湮滅。湮滅過程中,小泡內(nèi)部溫度可達(dá)幾千度,壓力可達(dá)幾千個大氣壓,上述現(xiàn)象稱為空化現(xiàn)象。空化作用被用于清洗、霧化、乳化及加速化學(xué)反應(yīng)速度等方面。熱效應(yīng)。熱效應(yīng)是指由于介質(zhì)吸收超聲波以及內(nèi)摩擦消耗,分子產(chǎn)生劇烈振動,超聲波的機(jī)械能轉(zhuǎn)化為介質(zhì)的內(nèi)能,引起介質(zhì)溫度升高。超聲波的強(qiáng)度愈大,產(chǎn)生的熱作用愈強(qiáng)。在提取中,控制超聲強(qiáng)度,可使藥物組織內(nèi)部的溫度瞬間升高,加速有效成分的溶出,并且不改變其性質(zhì)。機(jī)械作用。超聲波是機(jī)械波,可在

14、液體中形成有效的攪動與流動,破壞介質(zhì)的結(jié)構(gòu),擊碎液體中的顆粒,其效果是普通低頻機(jī)械攪動所達(dá)不到的'“。機(jī)械作用常用于擊碎、切割、凝集等方面。超聲波可以使常溫常壓不能發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)在空化作用下發(fā)生,甚至使非常堅(jiān)硬的固體被粉碎?？刂埔欢ǖ某曨l率和強(qiáng)度,空化作用產(chǎn)生的極大壓力造成生物細(xì)胞壁及整個生物體破裂,而且整個破碎過程在瞬間完成,同時超聲波產(chǎn)生的振動作用加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散及溶解。被浸提的物質(zhì)在被破碎瞬間生物活性保持不變,同時提高破碎速度和提取率。1.5超高壓提取法超高壓技術(shù)是一種新興技術(shù),廣泛用于食品加工,達(dá)到滅菌、滅酶、改變生物大分子結(jié)構(gòu)的目的張守勤等在國際上率先開展了超高壓

15、提取中藥有效成分的研究,為天然藥物有效成分的提取提供了一種新技術(shù)、新工藝。超高壓提取法的基本原理。超高壓提取,也稱超高冷等靜壓提取,它是在常溫下用一的液體靜壓力作用于藥液上,使提取溶劑滲透到藥物細(xì)胞內(nèi),在預(yù)定壓力下保持一段時間使有效成分達(dá)到溶解平衡后迅速卸壓,由于細(xì)胞內(nèi)外滲透壓力差突然增大,細(xì)胞內(nèi)的有效成分轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外的提取液中,于是達(dá)到了提取有效成分的目的。1.6槲皮素等黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)測定與含量分析 隨著對黃酮類化合物的深入研究和不斷開發(fā)利用，其分析方法近年來也得到了迅速的發(fā)展。分析對象有天然產(chǎn)物(如中草藥、水果、蔬菜)及其加工制品(如藥品、功能食品)、人體液(如血液、尿液)。分析方法有

16、分光光度法，熒光法、極譜法、庫侖測定法、離子選擇電極法、薄層色譜法、薄層掃描法、氣相色譜法以及近年來發(fā)展迅速的結(jié)合紫外檢測、熒光檢測、電化學(xué)檢測的高效液相色譜法，高效毛細(xì)管電泳法和色譜新技術(shù)，如超臨界液體色譜、色譜和質(zhì)譜聯(lián)用。其中液相色譜是從20世紀(jì)70年代被應(yīng)用于黃酮類化合物的分析和鑒定，也是唯一的可以分離鑒定6大類黃酮物質(zhì)的分析系統(tǒng)，同時黃酮類作為重要的天然產(chǎn)物也成為現(xiàn)代HPLC最早分析的樣品之一。 錢秋霞等用高效液相色譜法以水一乙睛一磷酸為流動相分離測定不同干燥方法的貫葉連翹中黃酮類化合物的含量，檢測在60烘干4h時測得的蘆丁和金絲桃昔的含量最高。楊潔等對血漿中蘆丁和棚皮素的HPLC檢測

17、方法及其在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)進(jìn)行研究，其藥效主要是由于蘆丁、棚皮素在腸內(nèi)酶和細(xì)菌叢的作用下發(fā)生代謝和分解作用，而進(jìn)入血漿中的為其代謝產(chǎn)物所致。該結(jié)果表明，蘆丁和棚皮素同時給藥有協(xié)同作用，使棚皮素藥效增加，蘆丁消除減慢，此結(jié)果對中藥單方、復(fù)方給藥劑量方面有參考價值。從中也可以發(fā)現(xiàn)研究食品及中藥中黃酮類化合物原型成分的必要性。1.6.1紫外吸收光譜在黃酮類結(jié)構(gòu)測定方面的應(yīng)用大多數(shù)黃酮類化合物在甲醇中的紫外吸收光譜由兩個主要吸收帶組成。出現(xiàn)在300400nm之間的吸收帶稱為帶，出現(xiàn)在240280nm之間的吸收帶稱為帶。不同類型的黃酮化合物的帶或帶的峰位、峰形和吸收強(qiáng)度不同，因此從紫外光譜可以推測黃

18、酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型。結(jié)構(gòu)類型峰位（nm）組內(nèi)區(qū)別組間區(qū)別帶帶（峰位）（峰強(qiáng)）黃酮310350250280帶不同、皆強(qiáng)黃酮醇350385250280異黃酮310330（肩峰）245275帶不同弱強(qiáng)二氫黃酮（醇）300330（肩峰）275295查耳酮340390230270（低強(qiáng)度）帶不同強(qiáng)弱橙酮380430230270（低強(qiáng)度）表1當(dāng)向黃酮類化合物的甲醇（或乙醇）溶液中分別加入甲醇鈉（NaOMe）、乙酸鈉（NaOAc）、乙酸鈉-硼酸（NaOAc-H3BO3）、三氯化鋁或三氯化鋁-鹽酸（AlCl3/HCl）試劑能使黃酮的酚羥基離解或形成絡(luò)合物等，導(dǎo)致光譜發(fā)生變化。據(jù)此變化可以判斷各類化合物的結(jié)構(gòu)

19、，這些試劑對結(jié)構(gòu)具有診斷意義，稱為診斷試劑。（一）黃酮、黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征黃酮或黃酮醇的帶是由B環(huán)桂皮酰基系統(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收，帶是由A環(huán)的苯甲?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收。黃酮和黃酮醇的UV光譜圖形相似，僅帶位置不同，黃酮帶位于304350nm，黃酮醇帶位于358385nm。利用帶的峰位不同，可以區(qū)別這兩類化合物。黃酮、黃酮醇的B環(huán)或A環(huán)上取代基的性質(zhì)和位置不同將影響帶或帶的峰位和形狀。例如，7和4位引入羥基、甲氧基等含氧取代基，可引起相應(yīng)吸收帶向紅位移。又如3-或5-位引入羥基，因能與C4O形成氫鍵締合，前者使帶向紅位移，后者使帶、帶均向紅位移。B環(huán)上的含氧取代基逐漸增

20、加時，帶向紅位移值（nm）也逐漸增加，但不能使帶產(chǎn)生位移。有時（例如3，4-位有2個羥基或2個甲氧基或亞甲二氧基）僅可能影響帶的形狀，使帶歧分為雙峰或1個主峰（b位于短波處）和1個肩峰（sh）或彎曲（a位于長波處）。A環(huán)上的含氧取代基增加時，使帶向紅位移，而對帶無影響，或影響甚微（但5-羥基例外）。黃酮或黃酮醇的3-，5-或4-羥基被甲基化或苷化后，可使帶向紫位移，3-OH甲基化或苷化使帶（328357nm）與黃酮的帶的波長范圍重疊（且光譜曲線的形狀也相似），5-OH甲基化使帶和帶都向紫位移515nm，4-OH甲基化或苷化，使帶向紫位移310nm。其他位置上的羥基取代對甲醇中的紫外光譜幾乎沒有

21、影響。（二）利用診斷試劑對黃酮、黃酮醇類化合物UV光譜的影響檢出羥基位置1甲醇鈉（NaOMe），主要是判斷是否有4-OH，3、4二OH或3、3、4三OH。2乙酸鈉，較為突出的是判斷是否有7-OH。舉例說明3乙酸鈉/硼酸主要判斷A環(huán)或B環(huán)是否有鄰二酚羥基（5，6-二OH除外）。4三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸，為判斷有無鄰二酚羥基，3-OH、5-OH提供信息。（三）異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類在甲醇中的UV光譜特征這三類化合物都有苯甲酰系統(tǒng)，而無桂皮酰結(jié)構(gòu)，所以它們的紫外光譜都有強(qiáng)的帶吸收，異黃酮帶吸收在245270nm，而二氫黃酮和二氫黃酮醇的帶在270295nm，一般只受A環(huán)的含氧取代基的影響，

22、A環(huán)含氧取代基數(shù)增加，吸收峰向紅位移。（四）利用診斷試劑對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類化合物的UV光譜的影響判斷羥基位置 1甲醇鈉帶向紅位移，示A環(huán)上有羥基。如有5，6，7-或5，7，8-三羥基或3，4-二羥基，則吸收帶將隨放置的延長而逐漸衰退。二氫黃酮、二氫黃酮醇帶向紅位移的大小取決于是否有游離的5-OH。2乙醇鈉乙醇鈉使7-羥基異黃酮的帶向紅位移620nm，但6-位有含氧取代基時，乙醇鈉幾乎不能使帶產(chǎn)生移動。4，5，6，7-四羥基異黃酮的紫外光譜隨時間延長而衰退。乙醇鈉使5，7-二羥基二氫黃酮和5，7-二羥基二氫黃酮醇帶向紅位移3437nm，而其相應(yīng)的5-去氧化合物則移動5158nm。5

23、，6，7-三羥基二氫黃酮的紫外光譜隨時間延長而衰退。3乙醇鈉/硼酸不能用NaOAc/H3BO3對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類的紫外光譜的影響來檢查B環(huán)鄰位二羥基，因?yàn)樗鼈兊腂環(huán)與主要發(fā)色團(tuán)缺少有效的共軛。但它們中的A環(huán)有6，7-二羥基時，加入NaOAc/H3BO3后使帶向紅位移1015nm。4三氯化鋁和三氯化鋁/鹽酸異黃酮、二氫黃酮（可能也包括二氫黃酮醇）的A環(huán)如有鄰二羥基（6，7-或7，8-，不包括5，6-），則帶在AlCl3中比在AlCl3/HCl中向紅位移1130nm。有5-羥基的異黃酮，其帶在AlCl3/HCl存在下與在甲醇中的光譜相比，向紅位移1014nm，而有5-羥基的二氫黃酮和

24、有5-羥基的二氫黃酮醇類的帶在同樣情況下向紅位移2026nm。目標(biāo)檢測：黃酮類化合物的鑒別與結(jié)構(gòu)測定現(xiàn)在多依賴于譜學(xué)的綜合解析，而化學(xué)方法和色譜方法已降至輔助地位。未知黃酮類化合物的鑒定，多在測定分子式的基礎(chǔ)上，利用PPC或TLC得到的Rf值或hRf值與文獻(xiàn)比較或分析對比樣品在甲醇溶液中及加入各種診斷試劑后得到的紫外及可見光譜進(jìn)行剖析。同時，對于化合物的顏色反應(yīng)，以及在提取分離過程中所表現(xiàn)的行為（如溶解度、酸或堿中的溶解情況、鉛鹽沉淀等）也應(yīng)注意分析。但這些方法均有一定局限性，并曾導(dǎo)致得出過一些錯誤結(jié)論。質(zhì)子核磁共振（1HNMR）因?yàn)榭啥繙y定H的個數(shù)，以及根據(jù)質(zhì)子的化學(xué)位移和芳香氫核之間的自

25、旋偶合所提供的信息（裂分?jǐn)?shù)目及偶合常數(shù)大小），可確定黃酮母核上的取代模式。近來由于儀器分辨率的不斷改進(jìn)，加以同核去偶、溶劑位移以及核磁共振技術(shù)的使用，1HNMR譜的測定對分析天然黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)已經(jīng)成為一種非常重要的手段。但是正如以后談到的那樣，在黃酮類化合物的1H-NMR譜上，有時要想確切指認(rèn)每個信號并不是一件容易的事情。例如當(dāng)黃酮類母核的A-環(huán)上只有一個芳香氫核時，要想與H-3信號區(qū)別，就是十分困難的問題。解決這種問題，13C核磁共振(13CNMR)技術(shù)有很大的優(yōu)勢。加上各種取代基位移及苷化位移效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)，使得圖譜的解析工作大大簡化。因此，13C-NMR技術(shù)在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定中發(fā)揮

26、著越來越重要的作用。質(zhì)譜（MS）技術(shù)，尤其場解析質(zhì)譜（FDMS）與快速原子轟擊質(zhì)譜（FABMS）及串聯(lián)質(zhì)譜（MSMS）的出現(xiàn)與應(yīng)用，使其成為黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定的重要手段之一（質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢是只需要微量的樣品就可獲得有關(guān)整個分子結(jié)構(gòu)及其主要碎片結(jié)構(gòu)的重要信息）。實(shí)際工作中常常根據(jù)需要，靈活、綜合運(yùn)用上述方法和手段，并輔以必要的化學(xué)方法，以求結(jié)構(gòu)鑒定獲得滿意的結(jié)果。 2.實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.1.1了解槲皮素的黃酮化合物結(jié)構(gòu)及其物化性質(zhì)2.1.2能夠運(yùn)用溶劑萃取法提取天然產(chǎn)物中的槲皮素2.1.3掌握聚酰胺色譜柱法分離黃酮化合物2.1.4掌握黃酮化合物的多種結(jié)構(gòu)測定方法2.1.5熟悉紫外光

27、譜和紅外光譜在黃酮結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用2.2實(shí)驗(yàn)原理槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黃色結(jié)晶，mp313314（2分子結(jié)晶水），316（無水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；難溶于水、苯、石油醚等溶劑。 圖2 因此可運(yùn)用石油醚、氯仿等有機(jī)溶劑萃取的方法把黃酮類化合物提取出來。2.3儀器與藥品80%乙醇溶液，石油醚，氯仿，25%HCL，乙酸乙酯，苯，甲醇，2%氯化鋯，枸櫞酸溶液，鎂粉，三口燒瓶，回流管，電動攪拌器，分液漏斗，燒杯玻璃棒，電熱恒溫水浴鍋，電熱套，聚酰胺色譜柱，紫外光燈，紫外分光光度

28、計(jì)，紅外光譜儀，高效液相色譜儀2.4實(shí)驗(yàn)步驟2.4.1萃取圖32.4.2聚酰胺色譜法分離圖42.4.3實(shí)驗(yàn)具體操作與時間安排第一天取香椿葉粉末500g，在三口燒瓶中與80%乙醇加熱回流3h，濾渣再重復(fù)一次，兩次濾液分別用水：石油醚：氯仿為1：1：1萃取其中的黃酮類化合物，母液加入25%的鹽酸加熱1.5h，然后再用乙酸乙酯萃取。保留上層乙酸乙酯混合液。第二天第一天保留的乙酸乙酯溶液，用水洗至中性，蒸干得樣品。加入適量乙醇溶解，在聚酰胺色譜柱上依次用20%，50%，70%90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，濃縮后的液體繼續(xù)在聚酰胺色譜柱上依次用70%，90%的乙醇梯度洗脫，濃縮液再在聚酰胺色譜柱上用苯：甲醇

29、為1：1進(jìn)行洗脫的黃色流分，濃縮得黃色粉末第三天開始檢測物化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)鑒定 表22.5結(jié)構(gòu)鑒定1.熔點(diǎn)315317 ，(分解)紫外燈下顯蘭色熒光，加AlCl3乙醇溶液螢光變黃綠色，鹽酸一鎂粉反應(yīng)顯紅色，a-萘粉濃硫酸反應(yīng)不顯紫色。鋯一枸櫞酸反應(yīng)：當(dāng)加2%氯化鋯甲醇液時顯黃色，再加2 %櫞酸甲醇液用水稀釋黃色不褪。2.紫外光譜UV：max，nm，255，301sh 370(MeOH)；241sh，331，412(NaOMe)；271，342sh，446(AlCl3)；266，302sh，359，427(AlCl3HCl)；258sh，270，324，382(NaCAC)；260，386(NaCACH3BO3)，與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的紫外光譜一致。3.紅外光譜IR max cm-1 34593284(OH)，1670(c= 0)4.HPTLC(高效薄層層折)：展開劑為