多功能顯微鏡的使用

1、第一節(jié)第一節(jié) 生物制片技術(shù)生物制片技術(shù)一、昆蟲生物制片方法一、昆蟲生物制片方法按封固劑的使用分：按封固劑的使用分：1 1、暫時封片法、暫時封片法 不使用封固劑不使用封固劑2 2、永久制片法、永久制片法 用封固劑封片用封固劑封片生物制片技術(shù)生物制片技術(shù)多功能顯微鏡的使用多功能顯微鏡的使用按材料處理方法分：按材料處理方法分：1 1、整體封片法：、整體封片法： 將微小的昆蟲或昆蟲的部分器官整體封片。將微小的昆蟲或昆蟲的部分器官整體封片。2 2、涂抹制片法、涂抹制片法 昆蟲的疏松組織直接涂抹在載波片。昆蟲的疏松組織直接涂抹在載波片。3 3、壓碎制片法、壓碎制片法 將松軟的組織在載玻片上，用蓋玻片壓碎展

2、平將松軟的組織在載玻片上，用蓋玻片壓碎展平的一種方法的一種方法4 4、離散制片法、離散制片法 借助藥物將組織結(jié)合物溶解、分離的制片方法借助藥物將組織結(jié)合物溶解、分離的制片方法。5 5、組織切片法、組織切片法 觀察昆蟲組織器官結(jié)構(gòu)形態(tài)的制片方法。觀察昆蟲組織器官結(jié)構(gòu)形態(tài)的制片方法。分為：分為：石蠟切片法、火棉膠切片法、冰凍切片法、超薄切片法。石蠟切片法、火棉膠切片法、冰凍切片法、超薄切片法。二、石蠟切片二、石蠟切片把材料包埋在石蠟中，連同石蠟一起切片把材料包埋在石蠟中，連同石蠟一起切片主要過程：主要過程：取材取材固定固定洗滌洗滌脫水脫水透明透明浸蠟浸蠟包埋包埋切片切片貼片貼片脫蠟脫蠟復(fù)水復(fù)水染色

3、染色脫水脫水透明透明封固封固第二節(jié)第二節(jié) 多功能顯微鏡的使用多功能顯微鏡的使用一、顯微鏡的類型一、顯微鏡的類型顯微鏡顯微鏡非光學(xué)顯微鏡非光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡普通顯微鏡普通顯微鏡特種顯微鏡特種顯微鏡多功能顯微鏡多功能顯微鏡實體顯微鏡實體顯微鏡暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡相差顯微鏡相差顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡偏光顯微鏡偏光顯微鏡紫外光顯微鏡紫外光顯微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡二、顯微鏡的光學(xué)技術(shù)參數(shù)二、顯微鏡的光學(xué)技術(shù)參數(shù)1 1、數(shù)值孔徑（、數(shù)值孔徑（NA numerical apertureNA numerical aperture） NA NA sin sin 介質(zhì)折射率介質(zhì)折射率 孔徑角

4、的一半孔徑角的一半 介質(zhì)折射率，香柏油為介質(zhì)折射率，香柏油為1.5151.515 孔徑角的一半，小于孔徑角的一半，小于9090。 干燥系物鏡的干燥系物鏡的NANA值小于值小于1 1， 油鏡的油鏡的 NANA值最大為值最大為1.41.42 2、分辨率、分辨率 光學(xué)儀器能夠區(qū)分兩個相臨物點之間的最小距離。光學(xué)儀器能夠區(qū)分兩個相臨物點之間的最小距離。 0.61 0.61 0.61 0.61 d = = d = = sin NA sin NA 光波長光波長 可見光波長可見光波長400400700 700 m m ，平均平均550 550 m m 光學(xué)顯微鏡的分辨率光學(xué)顯微鏡的分辨率d d最小為最小為0

5、.2 0.2 m m提高分辨本領(lǐng)的措施：提高分辨本領(lǐng)的措施：（1 1）降低光波長）降低光波長（2 2）增大介質(zhì)的折光系數(shù)）增大介質(zhì)的折光系數(shù)（3 3）增大孔徑角）增大孔徑角（4 4）增加明暗反差）增加明暗反差 0.61 0.61d =d = sin sin3 3、放大率、放大率總放大率總放大率M M物鏡放大率（物鏡放大率（MobMob）x x目鏡放大率（目鏡放大率（MocMoc） 鏡筒長度（標(biāo)準(zhǔn)鏡筒長鏡筒長度（標(biāo)準(zhǔn)鏡筒長160160mmmm）MobMob F F1 1 物鏡焦距物鏡焦距 250 250 明視距離（明視距離（mmmm）MocMoc F F2 2 目鏡焦距目鏡焦距 250 250

6、M M x x F F1 1 F F2 2 有效放大倍數(shù)有效放大倍數(shù)M M有效有效： d d肉眼肉眼 肉眼分辨本領(lǐng)肉眼分辨本領(lǐng) M M有效有效= = d d儀器儀器 儀器分辨本領(lǐng)儀器分辨本領(lǐng) 人肉眼在人肉眼在250250毫米遠(yuǎn)處分辨率為毫米遠(yuǎn)處分辨率為0.20.2mmmm。 光學(xué)顯微鏡的有效放大倍數(shù)應(yīng)為光學(xué)顯微鏡的有效放大倍數(shù)應(yīng)為10001000倍。倍。總放大率經(jīng)驗值：總放大率經(jīng)驗值： 顯微鏡的最適的總放大率，是標(biāo)準(zhǔn)鏡筒長下，顯微鏡的最適的總放大率，是標(biāo)準(zhǔn)鏡筒長下，所使用的物鏡所使用的物鏡NANA值的值的50050010001000倍。倍。 超出此范圍稱為超出此范圍稱為“無效放大無效放大”。4

7、 4、焦深、焦深 K KD=D= M NA M NA焦點深度，與總的放大倍率、物鏡的數(shù)值孔徑成反比。焦點深度，與總的放大倍率、物鏡的數(shù)值孔徑成反比。增加標(biāo)本周圍介質(zhì)的折射率可增加焦深。增加標(biāo)本周圍介質(zhì)的折射率可增加焦深。5 5、現(xiàn)場直徑、現(xiàn)場直徑指顯微鏡下看到的視場內(nèi)所能容納被檢物體的實指顯微鏡下看到的視場內(nèi)所能容納被檢物體的實際范圍。際范圍。 FN FN 目鏡視場數(shù)目鏡視場數(shù) Mob Mob 物鏡放大倍率物鏡放大倍率6 6、鏡像亮度與視場亮度、鏡像亮度與視場亮度（1 1）鏡象亮度與物鏡數(shù)值孔徑的平方成正比）鏡象亮度與物鏡數(shù)值孔徑的平方成正比（2 2）鏡象亮度與總放大率的平方成反比）鏡象亮度與

8、總放大率的平方成反比鏡像亮度：顯微鏡下圖像的明暗程度鏡像亮度：顯微鏡下圖像的明暗程度視場亮度：顯微鏡下整個視場的明暗程度視場亮度：顯微鏡下整個視場的明暗程度7 7、復(fù)蓋差、復(fù)蓋差 蓋玻片厚度不標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)生的相差。蓋玻片標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片厚度不標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)生的相差。蓋玻片標(biāo)準(zhǔn)厚度0.170.17mmmm 放大倍率越高、放大倍率越高、NANA越大，復(fù)蓋差越明顯。越大，復(fù)蓋差越明顯。8 8、工作距離、工作距離 物鏡前透鏡到被檢物體之間的距離。物鏡前透鏡到被檢物體之間的距離。 放大倍率越高工作距離越小，放大倍率越高工作距離越小，4040 物鏡不超過物鏡不超過0.60.6mmmm，100 100 物鏡不超過物鏡不超過

9、0.2mm0.2mm。三、象差三、象差1 1、色差、色差不同顏色的光通過透鏡的折射率不同不同顏色的光通過透鏡的折射率不同色差的校正色差的校正: :（1 1）采用單色光作光源）采用單色光作光源（2 2）利用凸、凹透鏡的色差彼此相反，將其膠合）利用凸、凹透鏡的色差彼此相反，將其膠合在一起消除色差。在一起消除色差。2 2、球差、球差 透鏡球面上，軸線上與四周光線折射率不透鏡球面上，軸線上與四周光線折射率不同造成。同造成。球差的消除措施：球差的消除措施： 利用凸、凹透鏡的球差彼此相反，將其膠合在一利用凸、凹透鏡的球差彼此相反，將其膠合在一起消除球差。起消除球差。3 3、場曲、場曲場曲可用特殊透鏡和光闌

10、糾正場曲可用特殊透鏡和光闌糾正四、顯微鏡的光學(xué)部件四、顯微鏡的光學(xué)部件1 1、物鏡、物鏡 金屬鏡筒內(nèi)由相隔一定距離并固定的透鏡組組合而金屬鏡筒內(nèi)由相隔一定距離并固定的透鏡組組合而成。成。 每一組透鏡又由不同材料、不同參數(shù)的一至數(shù)塊透每一組透鏡又由不同材料、不同參數(shù)的一至數(shù)塊透鏡膠合而成。鏡膠合而成。根據(jù)物鏡前透鏡與蓋玻片之間的介質(zhì)不同：根據(jù)物鏡前透鏡與蓋玻片之間的介質(zhì)不同：（1 1）干燥系物鏡，）干燥系物鏡，4040 x x以下物鏡，以下物鏡，NANA值均小于值均小于1 1（2 2）水浸系物鏡）水浸系物鏡（3 3）油浸系物鏡，）油浸系物鏡，9090100100 x x，NANA值可大于值可大于

11、1 1根據(jù)物鏡放大率的高低：根據(jù)物鏡放大率的高低：（1 1）極低倍物鏡）極低倍物鏡 0.5 0.5x 0.75xx 0.75x（2 2）低倍物鏡）低倍物鏡 1 1x x 6 6x NA 0.04-0.15x NA 0.04-0.15 （3 3）中倍物鏡）中倍物鏡 6 6x x 2525x NA 0.15-0.40 x NA 0.15-0.40 （4 4）高倍物鏡）高倍物鏡 25 25x x 6363x NA 0.35-0.95x NA 0.35-0.95 （5 5）油浸物鏡）油浸物鏡 90 90 x x 100100 x NA 1.25-1.40 x NA 1.25-1.40 根據(jù)物鏡性能分類

12、：根據(jù)物鏡性能分類：（1 1）消色差物鏡）消色差物鏡 標(biāo)有標(biāo)有Ach(Achromatic objective)Ach(Achromatic objective) 消除紅藍(lán)色差及部分球差消除紅藍(lán)色差及部分球差（2 2）復(fù)消色差物鏡）復(fù)消色差物鏡 標(biāo)有標(biāo)有APO(Apochromatic objective)APO(Apochromatic objective) 消除大部分的色差、球差，同一焦點平面上成像消除大部分的色差、球差，同一焦點平面上成像（3 3）半消色差物鏡）半消色差物鏡 標(biāo)有標(biāo)有FLFL 消除色差與球差的能力介于以上二者之間消除色差與球差的能力介于以上二者之間（4 4）平場物鏡）平場

13、物鏡 標(biāo)有標(biāo)有Plan(Plan objective)Plan(Plan objective) 視場平、大，工作距離增加視場平、大，工作距離增加 超平場物鏡超平場物鏡 標(biāo)有標(biāo)有S PlanS Plan（5 5）特種物鏡）特種物鏡帶校正環(huán)的物鏡帶校正環(huán)的物鏡 校正蓋玻片厚度不規(guī)則帶來的復(fù)蓋差校正蓋玻片厚度不規(guī)則帶來的復(fù)蓋差帶虹彩光闌物鏡帶虹彩光闌物鏡 調(diào)節(jié)物鏡的數(shù)值孔徑，改變焦深調(diào)節(jié)物鏡的數(shù)值孔徑，改變焦深相差物鏡相差物鏡無熒光物鏡無熒光物鏡無罩物鏡（無罩物鏡（No cover objective) No cover objective) 標(biāo)有標(biāo)有NCNC，不加蓋玻片不加蓋玻片長工作距離物鏡長工

14、作距離物鏡2 2、目鏡、目鏡2 25 5片透鏡分片透鏡分2 2組或組或3 3組構(gòu)成組構(gòu)成惠更斯目鏡惠更斯目鏡冉姆斯登目鏡冉姆斯登目鏡 普通目鏡，普通目鏡， 2 2片平凸透鏡構(gòu)成片平凸透鏡構(gòu)成凱爾勒目鏡凱爾勒目鏡補償目鏡補償目鏡 標(biāo)有標(biāo)有K K，可消除物鏡殘留色差可消除物鏡殘留色差平場物鏡平場物鏡 標(biāo)有標(biāo)有P P，視場平坦視場平坦廣視場物鏡廣視場物鏡 標(biāo)有標(biāo)有W W，具有較大的視場，視場平坦具有較大的視場，視場平坦3 3、聚光鏡、聚光鏡由透鏡組、孔徑光闌構(gòu)成，類型與物鏡匹配由透鏡組、孔徑光闌構(gòu)成，類型與物鏡匹配4 4、顯微鏡的照明裝置、顯微鏡的照明裝置照明法照明法透射式照明透射式照明中心照明中心

15、照明斜射照明斜射照明臨界照明臨界照明克勒照明克勒照明落射式照明落射式照明五、顯微鏡的光軸調(diào)節(jié)五、顯微鏡的光軸調(diào)節(jié)1 1、聚光鏡的聚焦、調(diào)中、聚光鏡的聚焦、調(diào)中 調(diào)視場光闌（多邊形）居視場中心調(diào)視場光闌（多邊形）居視場中心2 2、視場光闌調(diào)到外切、視場光闌調(diào)到外切3 3、孔徑光闌的調(diào)節(jié)、孔徑光闌的調(diào)節(jié) 聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相匹配聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相匹配六、相差顯微鏡的原理與使用六、相差顯微鏡的原理與使用1 1、原理、原理 通過改變直射光或衍射光的相位，直射光和衍通過改變直射光或衍射光的相位，直射光和衍射光發(fā)生干涉后的合成波振幅加強或減弱，因此將射光發(fā)生干涉后的合成波振幅加強或減弱，因此將光通過樣品時產(chǎn)生的相位差，轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹睿黾庸?/p>