實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)緩沖液配制

1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：1 M Tris-HCl配制量：1 L 配制方法： 1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。 2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。PH值 濃HCl 7.4 約70ml 7.6 約60ml 8.0 約42ml 4. 將溶液定容至1 L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。 2)10×T

2、E Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。1M TrisHCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0） 100ml 500mM EDTA(PH8.0) 20ml 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。 3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。 4. 室溫保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L 配制方法： 1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。 2. 加入

3、約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。 4. 將溶液定容至1 L。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。4)3 M 醋酸鈉(pH5.2)組份濃度：3M 醋酸鈉 配制量：100ml配制方法： 1.稱量40.8g NaAc·3H2O（或者24.6g無(wú)水 NaAc）置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存

4、。 5)PBS Buffer組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L 配制方法： 1. 稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。 4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸

5、銨 組份濃度：10 M 醋酸銨配制量：100 ml配制方法： 1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm濾膜過(guò)濾除菌。 4. 密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。 7)苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法： 1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。 2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯

6、酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8）10 (W/V) SDS組份濃度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法： 1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68加入溶解 2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后，室溫保存。 9）2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法： 1. 量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。 2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3.

7、 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。 4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10）2.5 N HCl組份濃度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法： 1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。 2. 室溫保存。 11）5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L 配制方法： 1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。 11）20 (W/V) Glucose組份濃

8、度：20 (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法： 1. 稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。 2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。 3. 高溫高壓滅菌后，4保存。12）Solution I(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L 配制方法： 1. 量取下列溶液，置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl（PH8.0） 25ml 0.5M EDTA（PH8.0） 20ml 20Glucose（1.11M） 45ml dH

9、2O 910ml 2. 高溫高壓滅菌后，4保存。 3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。13） Solution II(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mM NaOH，1(W/V)SDS配制量：500ml配制方法： 1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中 10 SDS 50ml2N NaOH 50ml 2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻 3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月 注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4）Solution III(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml

10、配制方法： 1. 稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。KOAc                  147g  CH3COOH 57.5ml 2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。 3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。15）0.5 M EDTA(pH8.0)組份濃度：0.5 M EDTA配制量：1 L 配制方法：稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1

11、L燒杯中。 2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH)。 注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。 4. 加去離子水將溶液定容至1 L。 5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。 6. 室溫保存。16）1 M DTT組份濃度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法： 1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。 2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過(guò)濾除菌。 3. 適量分成小份后，-20保存。17）10 mM ATP 組份濃度：10 mM ATP配制量：20

12、 ml配制方法： 1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。 3. 適量分成小份后，-20保存。一.常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的

13、濾膜過(guò)濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100

14、ml。1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/

15、L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPTG：溶解250mg的IPTG（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯

16、存于-20。10mg/mlRnase（無(wú)DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調(diào)pH至7.5，于-20貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，

17、用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。100×Denhardt試劑（Denhardt's regent）成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 2聚蔗糖（Ficoll，400型） 2聚乙烯吡咯

18、烷酮（PVP-40） 2BSA（組分V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為100ml 依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20貯存。10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選） 0.5mg/ml BSA（組分V）（可選） 水 5ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液

19、200ul 100 mmol/L 貯液 50ul 1 mmol/L 貯液 0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml 將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP混合液成分及終濃度 配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液 2ul 100 mmol/L dCTP 貯液 2ul 100

20、 mmol/L dGTP 貯液 2ul 100 mmol/L dTTP 貯液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 質(zhì)量濃度為20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化鈉 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉 補(bǔ)足100ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20×SSC成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L 氯化鈉 水 88.2g 175.3g 補(bǔ)足1L 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中

21、，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide） 直接購(gòu)買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate b

22、uffer） 按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L 磷酸二氫鈉（ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ml） 最終pH值 877850815775735685625565510450390330280 123150185225265315375435490550610670720 6.06.16.2

23、6.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2 TE（用于懸浮和貯存DNA）成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl buffer） 將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。濃鹽酸的體積（ml） pH 8.6142128.53846566671.376 9.08

24、.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA水 54g 27.5g 硼酸 20

25、ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 染料1溴酚藍(lán)（bromophenol blue） 加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide） 小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions） 6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0

26、.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚綠 0.25二甲苯青FF水 300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g15mg25mg補(bǔ)足到10ml 6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型） 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g補(bǔ)足到10ml 6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分

27、及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚藍(lán) 0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1溴酚藍(lán) 2.5ml 1二甲苯青FF1.5g 補(bǔ)足到10ml 6×甘油凝膠上樣液（4貯存）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA4

28、0聚蔗糖 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補(bǔ)足到10ml 10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚藍(lán) 0.2二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml補(bǔ)足到10ml 三.常用培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化鈉 10g 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足

29、水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化鈉 0.5g 1 mol/L 氯化鉀 2.5ml 用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。SOC培養(yǎng)基 成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化鈉 4ml 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平