水中菌落總數(shù)測定實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)書

1、水環(huán)境監(jiān)測實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)書實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目名稱水中菌落總數(shù)測定學(xué)時4學(xué)時實(shí)訓(xùn)班級課次實(shí)訓(xùn)時間實(shí)訓(xùn)目的1.掌握檢驗(yàn)水中細(xì)菌總數(shù)的方法一 實(shí)驗(yàn)原理生活飲用水及其水源水等水體受到生活污水、工農(nóng)業(yè)廢水或人和動物糞便的污染后，水中的細(xì)菌數(shù)量可大量增加，其中病原菌也隨之增加，引發(fā)傳染，危害人類健康，因而水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌數(shù)量可反映水體受微生物污染的程度。水中細(xì)菌總數(shù)往往同水體受有機(jī)物污染的程度呈正相關(guān)。故水的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)對了解水體被污染的程度，在流行病學(xué)和提供水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中具有重要意義和價值，它是評價水質(zhì)污染程度的重要指標(biāo)之一。細(xì)菌總數(shù)是指1mL水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37經(jīng)24h培養(yǎng)后，所生長的細(xì)菌菌落的總數(shù)（CFU）

2、。我國生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定生活飲用水的細(xì)菌總數(shù)1mL中不得超過100CFU。二 材料與方法1 材料營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配方如下：蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化鈉 5g、瓊脂 10-20g、蒸餾水 1000mL制作方法：將上述成分充分混合后加熱溶解，調(diào)整pH為7.4-7.6，分裝于玻璃容器中，103.43Kpa（121，151b滅菌20min, 放置于冷暗處備用。2 方法水中細(xì)菌總數(shù)的平板計(jì)數(shù)測定方法。3 儀器高壓蒸汽滅菌鍋；9cm培養(yǎng)皿；1mL、5mL移液管；45mL燒杯；250mL三角瓶，放大鏡三 實(shí)驗(yàn)步驟1 水樣的采集 自來水：先將自來水龍頭用火焰灼燒3min滅菌，再打開水龍頭是水流5m

3、in后，以滅過菌的三角瓶接取水樣，以待分析。若水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶在為滅菌前按采500mL水樣加3%硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O溶液1mL的量，預(yù)先加入采樣瓶內(nèi)，用以采樣后中和水樣內(nèi)的余氯，以防止余氯的殺菌作用。 江水、河水、湖水、塘水、水庫等水源水：可應(yīng)用采樣器，器內(nèi)的采樣瓶應(yīng)先滅菌。采樣時，將采樣器置于水體中所置的深度，水即注入采樣瓶中。待注滿后取出水面，立即送檢，一般不應(yīng)超過4h，否則需放入冰箱中保存，但不能超過24h。2 水樣的稀釋根據(jù)水被污染的程度的不同，按無菌操作做10倍系列稀釋。3 細(xì)菌總數(shù)的測定（1）自來水：用滅菌移液管吸取1mL水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中。分

4、別傾注15mL已融化并冷卻到45左右的滅菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌面上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。 另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注45左右的滅菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15mL，作空白對照。 培養(yǎng)基凝固后，倒置于37溫箱中，培養(yǎng)24-48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。兩個平板的菌落數(shù)平均值即為1mL水樣的細(xì)菌總數(shù)。(2)水源水稀釋水樣：取4個滅菌試管，分別加入mL滅菌水。取mL水樣注入盛有mL滅菌水的第一試管中，搖勻成10-1稀釋液，再從第一試管取mL至下一試管滅菌水中，如此稀釋到第三試管，稀釋度分別為10-1，10-2，10-3。稀釋倍數(shù)看水樣污染程度而定，以培養(yǎng)后平板的菌落數(shù)在30-300個為最合適。若三

5、個稀釋度的菌落數(shù)都多到或少到無法計(jì)數(shù)，則需加大或減少稀釋倍數(shù)。一般中等污染的水樣，取10-1，10-2，10-3三個稀釋度，污染嚴(yán)重的取10-2，10-3，10-4三個連續(xù)稀釋度。自最后三個稀釋度的試管中各取1mL稀釋水樣加入空的滅菌培養(yǎng)皿中，每一稀釋度做兩個培養(yǎng)皿。 各傾注15mL已融化并冷卻到45左右的滅菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立即放在桌面上搖勻。 凝固后倒置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。四 實(shí)驗(yàn)報告（1）菌落數(shù)計(jì)算原則記錄各平皿的菌落數(shù)后，計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算用。若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌苔

6、的大小不到平皿的一半，而其余的一半菌落分布有很均勻時，則將此一半菌落數(shù)乘2以代表平板的全部菌落數(shù)，然后再計(jì)算該稀釋度的平均菌落數(shù)。（2）細(xì)菌總數(shù)計(jì)算方法：按已獲得的同稀釋度的平均菌落數(shù)的不同情況進(jìn)行計(jì)算。首先選擇平均菌落數(shù)在30-300之間，查表進(jìn)行計(jì)算。當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)，報告該水樣的細(xì)菌總數(shù)（表1例1）。若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30-300之間，則應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比值小于2應(yīng)報告兩者的平均數(shù)，若大于2則報告其中較小的菌落總數(shù)（表1例2及例3）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以

7、稀釋倍數(shù)報告之（表1例4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（表1例5）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300之間，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（表1例6）（3）報告水樣品中細(xì)菌總數(shù)。從水質(zhì)細(xì)菌檢測結(jié)果，分析飲用水、水源水是否符合標(biāo)準(zhǔn)。表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)/個·mL-1報告方式/個·mL-110-110-210-3113651642016000或1.6×104227602954637750或3.8×104328902716027100或2.7×1044無法計(jì)數(shù)10