用高效液相色譜法測(cè)定保胎靈片中芍藥苷的含量

1、用高效液相色譜法測(cè)定保胎靈片中芍藥苷的含量【摘要】 目的：采用高效液相色譜法測(cè)定保胎靈片中芍藥苷的含量。方法：KromasilC18（250mm，5m）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（10:90）；檢測(cè)波長為230nm；柱溫為40；流速為1.0mlmin1。結(jié)果：芍藥苷進(jìn)樣量在0.1572g0.7860范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=98073.5000X17548.2000（r=0.9998）。平均回收率為100.04%，RSD為0.7%。結(jié)論：本方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可為今后修訂該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。 【關(guān)鍵詞】 保胎靈片 芍藥苷 HPLC法 含量測(cè)定 Determination

2、of the Contene of Baotai LingTableta by HPLC 【Abstract Objective】To establish a HPLC method for determination of the content for Paeoniflorin of Baotai Ling Tableta. Method: A Kromasil C18 column(250mm,5m) was uesd.and temperature was set at 402g0.7860g （r = 0.9998）. Conclusion:This method apears to

3、 be simple,rapid,sensitive and accurate. 【Key words】Baotai Ling Tableta; Paeoniflorin; HPLC;content determination. 保胎靈片是一種補(bǔ)腎、固沖、安胎的純中藥制劑，用于先兆流產(chǎn)、習(xí)慣性流產(chǎn)及因流產(chǎn)引起的不孕癥。對(duì)長期不孕或流產(chǎn)后不孕者有促進(jìn)妊娠作用，同時(shí)有增強(qiáng)機(jī)體免疫力和促進(jìn)胎兒發(fā)育的功效，無毒副作用，宜長期服用。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)，該標(biāo)準(zhǔn)只有顯微鑒別，沒有含量測(cè)定，本文采用高效液相色譜法對(duì)其處方中的白芍的主要成分芍藥苷進(jìn)行了定量分析，取得了滿意的結(jié)果。

4、 1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 儀器 LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津制作所）；AE240型電子天平（瑞士梅特勒）；KQ-400KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗器（功率：400W，昆山市超聲儀器有限公司）。 1.2 藥品和試劑 芍藥苷（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110736-200628，供含量測(cè)定用）；保胎靈片（吉林國藥制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20070701；吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：060101，051002）；純化水（經(jīng)檢測(cè)合格），乙醇為分析純，乙腈為色譜純。 2 方法與結(jié)論 2.1 色譜條件 色譜柱：KromasilC18（250mm，5m）；流動(dòng)相：乙腈-水（10:9

5、0）；檢測(cè)波長：230nm；柱溫：40；流速：1.0mlmin1，進(jìn)樣量：10l；理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)應(yīng)不低于2000。 2.2 對(duì)照品溶液的制備 對(duì)照品貯備液 精密稱取減壓干燥的芍藥苷對(duì)照品10mg置25ml量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得芍藥苷對(duì)照品濃溶液。 對(duì)照品溶液 精密量取對(duì)照品貯備液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入30%乙醇溶液25ml，稱定重量，超 聲處理（功率250W，頻率40KHz）30分鐘，放冷，稱定重量，用溶劑補(bǔ)足減失重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

6、2.4 空白溶液的制備 取按處方比例制備但不含白芍的自制空白制劑，再按2.3項(xiàng)下的制備方法制成空白對(duì)照樣品溶液。 2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，分別精密吸取2、4、6、8、10l，注入色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Y），求得回歸方程為：Y=98073.5000X17548.2000（r=0.9998），結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.15720.7860g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液10l，注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定芍藥苷的色譜峰面積值

7、分別為655076、658269、658663、658001、659049、655389，RSD為0.3%，結(jié)果表明本方法的精密度良好。 2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液10l，注入色譜儀，按0、2、4、8、12、24h間隔進(jìn)樣，測(cè)得芍藥苷的色譜峰面積分別為677758、681397、683901、677074、681217、678807，RSD為0.4%。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫條件下24h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品，按2.3項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液并依法測(cè)定，結(jié)果每片含芍藥苷分別為0.5075、0.5124、0.5025、0.5169、0.50

8、43，RSD為1.2%，結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。 2.9 陰性對(duì)照試驗(yàn) 精密吸取溶劑、空白樣品溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液各10l，分別注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果在空白樣品色譜圖中，在與芍藥苷對(duì)照品峰相同的保留時(shí)間處無吸收峰。 HPLC色譜圖（A陰性樣品；B對(duì)照品；C保胎靈片樣品） 2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知芍藥苷含量的供試品（060101 吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，含量為0.5076mg/片）保胎靈20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取6份，取量減半，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.393mg/ml）1.9ml，再按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并依法測(cè)定，記錄色譜峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算

9、出芍藥苷的平均回收率（n=6）100.04%，RSD=0.7%。 2.11 樣品測(cè)定 取項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和供試品（吉林國藥制藥有限責(zé)任公司 20070701；吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 060101；吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 051002）溶液各10l進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果3批樣品每片芍藥苷的平均含量分別為0.4081、0.4988、0.5525，RSD分別為0.40%、0.87%、0.54%。 3 討論 3.1 在對(duì)供試品提取溶劑的選擇中，我們采用了70%、50%和30%的乙醇溶液，結(jié)果用70%乙醇提取后，提取液的脂溶性雜質(zhì)多，純化處理困難；而50%和30%乙醇的提取液，濾過后直接進(jìn)樣，即可得到較好的分離效果。同時(shí)，二者測(cè)得的結(jié)果沒有明顯的差異，鑒于從經(jīng)濟(jì)上考慮，我們采用了30%乙醇為提取溶劑。 3.2 在提取方法的選擇中，采取超聲提取和水浴回流提取兩種方法做對(duì)比，二者測(cè)得的結(jié)果沒有明顯的差異，但從簡便和節(jié)能上考慮，采用超聲處理法提取。 3.3 在流動(dòng)相選擇中，采取三種洗脫系統(tǒng)，即乙腈-水