異種化學去細胞神經(jīng)移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損的功能評價

1、異種化學去細胞神經(jīng)移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損的功能評價         10-04-30 15:48:00     編輯：studa20               作者：趙志鋼，陳秉耀，魏海溫，王成琪，吳寶嶺【摘要】  目的評價異種化學去細胞神經(jīng)移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損后神經(jīng)功能恢復，從而為臨床應(yīng)用去細胞異種神經(jīng)移植修復神經(jīng)缺損

2、提供更為充分的理論依據(jù)。方法雄性Wistar大鼠15只，致左側(cè)坐骨神經(jīng)1 cm缺損，以等粗兔化學去細胞神經(jīng)移植修復。每2周測定坐骨神經(jīng)指數(shù)，移植后4個月動物麻醉后暴露移植段神經(jīng)，刺激近側(cè)神經(jīng)干、于同側(cè)脛后肌群記錄運動誘發(fā)電位，之后取移植段神經(jīng)切片后行HE組織化學及NF-160免疫組織化學染色。 結(jié)果去細胞異種神經(jīng)移植物未被宿主排斥，大量神經(jīng)纖維長入移植物，神經(jīng)電生理及坐骨神經(jīng)指數(shù)顯示宿主坐骨神經(jīng)功能有部分恢復。結(jié)論去細胞異種神經(jīng)移植可以作為修復周圍神經(jīng)缺損的一種有效方法。 【關(guān)鍵詞】  外周神經(jīng)缺損； 去細胞異種神經(jīng)移植； 功能恢復    Abstrac

3、t：ObjectiveTo observe the nerve regeneration and functional recovery in the adult rats.MethodThe sciatic nerves on the left side of 15 rats were exposed and 1.0 cm long segments of the nerves were removed from the midthigh level and replaced by rabbit nerve made acellular through chemical extraction

4、.At 4 months after procedure,the nerve regeneration and function recovery were examined with HE staining,NF160 immunohistochemical staining,electrophysiological tests and sciatic functional index (SFI).ResultIn the rats repaired by acellular nerves,regenerated axons reentered into the acellular xeno

5、nerve segments without excessive sign of inflammation following implantation.As stimuling(1.5 mA,0.1 ms,1.0 Hz) to the proximal sciatic nerves,the implanted segment resulted in motor evoked potentials,which were recorded from posterior tibial muscles.SFI showed a partial recovery of locomotion of th

6、e limb with sciatic nerve defect.ConclusionSciatic nerves defect can be repaired by chemical acellular xenogeneous nerves in rats.There was partial functional recovery,which revealed the grafting with chemical acellular xenogeneous nerves may be a promising mehod for nerve defect in clinical. &

7、#160;  Key words：peripheral nerve defect;     acellular xenogeneous nerve transplantation;     functional recovery     周圍神經(jīng)的缺損在戰(zhàn)創(chuàng)傷中十分常見，其修復一直是醫(yī)學界的一個棘手問題。在臨床上，  自體神經(jīng)移植是最基本和最可靠的方法。但自體神經(jīng)移植來源有限，移植神經(jīng)多為腓腸神經(jīng)等的細小皮神經(jīng)，無法滿足較大神經(jīng)缺損和廣泛神經(jīng)缺損修復的需要

8、，  同時，自體神經(jīng)移植不可避免的會造成二次創(chuàng)傷、供區(qū)功能障礙、感覺缺失、瘢痕形成和神經(jīng)瘤性疼痛等，故在臨床應(yīng)用上受到限制。近年來，有學者發(fā)現(xiàn)，對同種異體神經(jīng)進行特定的化學萃取處理，可清除神經(jīng)中的細胞及髓鞘成分從而基本消除抗原性，同時由于保留了神經(jīng)的基管膜及板層結(jié)構(gòu)而成為神經(jīng)纖維再生的良好支架，他們相繼以化學去細胞同種異體神經(jīng)移植修復大鼠、兔及犬的坐骨神經(jīng)缺損獲得成功1 3，目前已有臨床應(yīng)用的報道4。但臨床上同種異體神經(jīng)來源并不充分，因此有可能使其應(yīng)用受到限制。在前期研究中作者應(yīng)用化學萃取去細胞兔神經(jīng)分支移植修復大鼠坐骨神經(jīng)缺損，移植后未見明顯免疫排斥反應(yīng)，大量再生纖維長過移植物，同

9、時見宿主雪旺細胞隨再生纖維遷移進入移植物并形成髓鞘5 6。上述結(jié)果初步提示應(yīng)用化學去細胞異種神經(jīng)修復外周神經(jīng)缺損的可能性。本實驗通過行為學觀察、動態(tài)坐骨神經(jīng)指數(shù)測定及電生理檢測，  對兔化學去細胞神經(jīng)移植修復大鼠神經(jīng)缺損后神經(jīng)功能變化進行綜合評價，進一步探討經(jīng)化學萃取的去細胞神經(jīng)用于異種周圍神經(jīng)移植的可行性，為臨床應(yīng)用提供更為確實的依據(jù)。    1     材料與方法    1.   1     實驗動物  

10、;  雄性新西蘭大白兔1只，體重2.   5 kg；雄性Wistar大鼠15只，體重200 250 g。以上動物由解放軍第89醫(yī)院動物實驗室提供。    1.   2     兔神經(jīng)取材及化學去細胞處理    1.   2.   1     兔臂叢神經(jīng)取材     846合劑(0.   15 mlkg體重)麻

11、醉動物，暴露雙側(cè)臂叢，剪取直徑約1.   5 mm，長度超過1.   0 cm的分支，按后述方法處理。    1.   2.   2     化學去細胞處理     參考Sondell等的方法2，將新鮮取材的神經(jīng)置蒸餾水中清洗，除去表面的組織碎塊及纖維膜，然后按下面的程序處理：(1)蒸溜水浸浴7 h，換水2次；(2)震蕩器中(150轉(zhuǎn)分)3.   0Triton X-100溶液消化12

12、h；(3)蒸餾水浸浴1 h；(4)震蕩器中(150轉(zhuǎn)分)4.   0脫氧膽酸鈉溶液消化24 h。重復以上步驟1次，蒸餾水清洗后將處理好的神經(jīng)置無菌PBS液(pH 7.   2)中，4冰箱保存?zhèn)溆谩?#160;   1.   2.   3     大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型制作及神經(jīng)移植過程     0.   5戊巴比妥鈉(40 60 mg100 g體重)麻醉Wista大鼠，  自臀部肌間隙暴露

13、左側(cè)坐骨神經(jīng)，自第一個肌支以上切除0.   8 cm，以1.   0 cm長化學去細胞兔神經(jīng)分支移植修復，局部滴入硫酸慶大霉素注射液3 4滴，逐層關(guān)閉切口。分籠飼養(yǎng)。    1.   3     觀察指標    1.   3.   1     大體行為學觀察     置實驗鼠于平地，觀察手術(shù)側(cè)下肢運動情況。 

14、   1.   3.   2     坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(scimic functional index，SFI)測定     采用沈?qū)幗?等的改良方法于術(shù)前及術(shù)后每2周測定實驗側(cè)足(E)、正常側(cè)足(N)的足印長度(PLF)、足距寬度(TSF)、中間足趾寬度(ITF)，直至術(shù)后4個月。將數(shù)據(jù)代入Bain公式，計算SFI及其恢復率。    SFI=-38.   3(EPL-NPL)NPL+109.   5(ETS-NTS)NTS+13.   3(EIT-NIT)NIT)    正常大鼠SFI為0，坐骨神經(jīng)完全離斷指標為-100。    1.   3.   3     神經(jīng)電生理觀察