血清學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)

1、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)原理及應(yīng)用血清學(xué)實(shí)驗(yàn)原理及應(yīng)用血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的建立及概念血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的建立及概念1883年 俄國(guó)動(dòng)物學(xué)家 發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞吞噬作用1890年 德國(guó)醫(yī)師、日本學(xué)者 發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素1894年 比利時(shí)血清學(xué)家 發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體1896年 H. Durham 發(fā)現(xiàn)凝集反應(yīng)1897年 R. Kraus 發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)1900年 K. Landsteiner 發(fā)現(xiàn)ABO血型1900年 J. Bordet 發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900s 英國(guó)醫(yī)師 發(fā)現(xiàn)調(diào)理素1945年 R.Owen 同卵雙生的兩只小牛的不同血型可以相互耐受1948年 C.Snell 發(fā)現(xiàn)組織相容性抗原1953年 R.Billingham 成功進(jìn)行了人工耐受

2、試驗(yàn)1956年 Witebsky 建立自身免疫動(dòng)物模型1980s 發(fā)現(xiàn)眾多細(xì)胞因子， 受體、基因及其生物活性研究 建立細(xì)胞免疫學(xué)說(shuō)建立細(xì)胞免疫學(xué)說(shuō)免疫學(xué)（抗感染免疫）免疫學(xué)（抗感染免疫）血清學(xué)實(shí)驗(yàn)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)建立體液免疫學(xué)說(shuō)建立體液免疫學(xué)說(shuō)免疫學(xué)免疫學(xué)免疫學(xué)（分子免疫學(xué)）免疫學(xué)（分子免疫學(xué)）抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 血清學(xué)反應(yīng)的實(shí)質(zhì)血清學(xué)反應(yīng)的實(shí)質(zhì)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本原理血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本原理n分子表面結(jié)合（非共價(jià)鍵結(jié)合）n親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體水化膜電荷血清學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)n特異性n可逆性n比例性n反應(yīng)的階段性特異性結(jié)合階段可見反應(yīng)階段影響血清學(xué)反應(yīng)的因素影響血清學(xué)反應(yīng)的因素n抗原抗體本身的性質(zhì)

3、n電解質(zhì)n酸堿度n溫度血清學(xué)反應(yīng)的優(yōu)缺點(diǎn)n不需要特殊儀器設(shè)備，操作簡(jiǎn)便。n靈敏度低，絕大多數(shù)為定性測(cè)定。血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用n傳染病、寄生蟲病、腫瘤、自身免疫病、變態(tài)反應(yīng)性疾病的確診 n疫苗免疫效果監(jiān)測(cè) n人群免疫水平監(jiān)測(cè)n生物活性物質(zhì)的超微定量、物種及微生物鑒定和分型 n基因分離，克隆篩選，表達(dá)產(chǎn)物的定性、定量分析和純化等，已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的重要手段 抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)判斷方法凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)?zāi)种圃囼?yàn)肉眼或放大鏡或顯微鏡觀察出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象協(xié)同凝集試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)冷凝集素試驗(yàn)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀環(huán)沉淀反應(yīng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)觀察沉淀線或沉淀環(huán)瓊脂電泳技術(shù)觀察沉淀

4、峰或沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察或測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)觀察毒性喪失情況毒素中和試驗(yàn)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)弱免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫技術(shù)檢測(cè)酶催化的顯色反應(yīng)發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)判斷方法凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)?zāi)种圃囼?yàn)肉眼或放大鏡或顯微鏡觀察出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象協(xié)同凝集試驗(yàn)抗球蛋白試驗(yàn)冷凝集素試驗(yàn)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀環(huán)沉淀反應(yīng)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)觀察沉淀線或沉淀環(huán)瓊脂電泳技術(shù)觀察沉淀峰或沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察或測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)觀察毒性喪失情況毒素

5、中和試驗(yàn)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)弱免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫技術(shù)檢測(cè)酶催化的顯色反應(yīng)發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀ELISA的基本原理 ELISA-enzyme-linked-immunosorbent assay 以酶作為標(biāo)記指示物、以抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)的固相吸附測(cè)定方法。 固相支持物及包被的抗原或抗體、 酶標(biāo)記的抗體或抗原、 酶反應(yīng)底物。ELISA原理示意圖原理示意圖ELISA測(cè)定常用模式n雙抗體夾心法測(cè)抗原n雙抗原夾心法測(cè)抗體n競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原n競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體n間接法測(cè)抗體n固相捕獲法酶免疫試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)和局限性n優(yōu)點(diǎn)1.特異性高2.靈敏性強(qiáng)3.操作簡(jiǎn)便4.試劑穩(wěn)定5.對(duì)環(huán)境無(wú)污染n局限性1.影響及干擾試驗(yàn)因素多2.定性ELISA試驗(yàn)中cutoff值3.“灰區(qū)”樣本的確定血清學(xué)試驗(yàn)的發(fā)展趨向n反應(yīng)的微量化和自動(dòng)化 n方法的標(biāo)準(zhǔn)化和試劑的商品化n技術(shù)的敏感、特異和精密化n檢測(cè)技術(shù)的系列化n方法簡(jiǎn)便快速 參考文