中醫(yī)分型治療大鼠慢性心力衰竭的以方測(cè)證

1、中醫(yī)分型治療大鼠慢性心力衰竭的以方測(cè)證劉巍徐欣毅吳申美克熱阿依韓超指導(dǎo)老師：龔其淼何建成（上海中醫(yī)藥大學(xué) 05中西醫(yī)& 05中醫(yī)專(zhuān)業(yè)&05康復(fù)，上海 201203）（一）研究方法1、實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠46只，雄性，體重200±20克（上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房提供）。1.2主要儀器AD-Instruments生理記錄儀。由上海中醫(yī)藥大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室提供。1.3藥品和試劑鹽酸多柔比星注射針劑（上海醫(yī)藥股份有限公司出品， 10mg/瓶）。參麥飲， 以人參：麥冬：五味子=3： 2： 2配伍，每毫升含生藥1.08g ;真武湯，以制附片： 生姜：白芍：茯苓：白術(shù)=3： 3：

2、 3： 3： 2配伍，每毫升含生藥1.89g ;四君子湯 +丹參飲，以丹參：人參：白術(shù)：茯苓：炙甘草：檀香：砂仁 =20: 6： 6： 6： 4： 3： 3配伍，每毫升含生藥3.24g。（上海雷允上藥業(yè)股份有限公司監(jiān)制） 2、實(shí)驗(yàn)方法2.1造模與分組大鼠飼養(yǎng)I周后，隨機(jī)取6只大鼠作為正常組，將其余40只SD大鼠采用持 續(xù)腹腔注射ADR按3mg/kg劑量，每6天1次，共4周，累計(jì)量達(dá)15mg/kg。 注射完畢后平行隨機(jī)組分為模型組（10只）、心腎陽(yáng)衰組（10只）、氣陰兩虛 組（10只）、氣虛血瘀組（10只）。模型組、中藥治療組根據(jù)大鼠折算系數(shù)， 第5周起分別將四君子湯+丹參飲、參麥飲和真武湯煎劑

3、濾液灌胃給氣虛血瘀組、 氣陰兩虛組和陽(yáng)虛水泛組，每只 2 mL，每日1次，共3周。正常、模型組第5 周起以同體積0. 9%氯化鈉水溶液進(jìn)行灌胃，每日1次，共3周。手術(shù)前1 d 禁食，自由飲水。2.2手術(shù)方法用3 %戊巴比妥鈉溶液（1ml /kg,腹腔注射）將大鼠麻醉，仰臥固定，頸部切 開(kāi)，分離氣管及右側(cè)頸總動(dòng)脈，右側(cè)頸總動(dòng)脈切開(kāi)后插入直徑1mm已充滿肝素的 心導(dǎo)管，經(jīng)壓力轉(zhuǎn)換器接八道生理記錄儀， 緩慢推進(jìn)同時(shí)觀察示波器，當(dāng)導(dǎo)管進(jìn) 入左心室后停止推進(jìn)，穩(wěn)定2分鐘后記錄土 dp/dtmax。實(shí)驗(yàn)完畢后取血及心肌標(biāo) 本備用。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS 10.0軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以均值土標(biāo)準(zhǔn)差（x

4、± SD）表示，組間比 較經(jīng)過(guò)方差分析q檢驗(yàn)，P<0. 05表示差異有顯著性。3、主要指標(biāo)3.1癥狀及體征觀察呼吸、飲食、皮毛等動(dòng)物活動(dòng)情況，每周稱重，觀察是否有呼吸急促、 弓背蜷縮、喜歡聚居、體毛枯疏、體重減輕、飲食減少、活動(dòng)減少、反應(yīng)遲鈍、 肝腫大、腹部水腫。3.2心功能變化心輸出量（cardiac output，CO）與心臟舒縮期左室內(nèi)壓變化速率 （土 dp/dtmax）、左室舒張末容積（LVEDP）左室壓力變化最大速率等。二、結(jié)果與分析（一）結(jié)果1、癥狀及體征正常組大鼠均生長(zhǎng)良好，10周末體重390440g之間，大鼠毛色有光澤，雙眼 靈活有神，飲食、尿量正常，行動(dòng)敏捷，

5、對(duì)周?chē)兓磻?yīng)靈敏。模型組與中藥組 大鼠腹腔注射AD時(shí)第二周個(gè)別出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為活動(dòng)減少、蜷縮、納食減少、 皮毛松軟、體重減輕、呼吸痰鳴音等，此后癥狀逐漸加重從第4次注射起出現(xiàn)程度不一的腹水，尿少便溏，唇周青紫，雙耳蒼白，呼吸減弱，毛色枯槁、散亂 豎起，脫毛；嚴(yán)重者行走不穩(wěn)，極度消瘦，口唇及雙耳發(fā)紺，毛色灰黃、腹部肛 門(mén)腹瀉嚴(yán)重導(dǎo)致潰爛、個(gè)別開(kāi)始死亡。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，造?？偣灿脮r(shí)四周，注射 ADR大鼠死亡兩只，灌藥期間死亡 16只，其中模型組死亡4只，中藥組死亡12只，其中中藥組死亡集中于灌藥前 一周，經(jīng)尸體解剖發(fā)現(xiàn)腹部明顯水腫，腸胃淤血、心臟明顯擴(kuò)大伴有大面積壞死、 肺部腫大、肝臟器質(zhì)性損傷萎

6、縮。2、心功能2.1心電圖存活老鼠中，心電圖提示未有明顯改善。1JI.ID1 n a1? B iF RII :FF4 iT 占彈iF 9審右* bT Ha參麥組（S-T段上抬，呈“魚(yú)鉤”樣變化）（心率不齊、S-T上臺(tái)）（二）分析1、方解與藥理分析四君子湯合丹參飲方中丹參、檀香活血化淤止痛；人參大補(bǔ)元?dú)?、振奮心陽(yáng); 白術(shù)、茯苓健脾補(bǔ)氣；諸藥共奏補(bǔ)氣活血，化淤止痛之功效。參麥飲中人參“主 補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目開(kāi)心益智”；麥冬養(yǎng)陰潤(rùn)肺、 養(yǎng)胃生津、清心除煩的功能；五味子養(yǎng)陰收斂、安神復(fù)脈作用，合而有益氣養(yǎng)陰、 復(fù)脈。真武湯有助陽(yáng)利水、溫腎扶脾的功效，用于治療心腎陽(yáng)衰，脾失溫煦

7、，水 飲內(nèi)停，上凌心肺，方中的附子回陽(yáng)救逆，補(bǔ)腎助陽(yáng)；以干姜避免生姜的辛散， 取其助附子加強(qiáng)溫陽(yáng)健脾的功效；茯苓、白術(shù)健脾利水，導(dǎo)水下行；白芍和營(yíng)斂 陰，使陽(yáng)氣歸附于陰?，F(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為人參具有增強(qiáng)心肌收縮力、 降低周?chē)茏枇靶募『难趿?的作用，并能清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而保護(hù)心肌。 麥冬成分和心肌 極化液較為相似，有一定的抗心律失常、改善心肌缺血、增強(qiáng)心肌收縮力和減慢 心率的作用。丹參、檀香有改善微循環(huán)，增加冠脈血流量的作用。附子有強(qiáng)心， 增加血管血流量，提高耐缺氧能力。茯苓具有利尿作用，與減輕前負(fù)荷有關(guān)。生 姜能增強(qiáng)附子的強(qiáng)心效力，并使附子的毒副作用相對(duì)減低，故有“附子無(wú)姜不熱

8、 之說(shuō)”。2、病證結(jié)合模型的以方測(cè)證2.1中醫(yī)“以方側(cè)證”的實(shí)驗(yàn)意義中醫(yī)認(rèn)為“證”是病的某一階段的主要矛盾的概括， 它受病的基本矛盾的干 擾，兩者之間存在不可分割的聯(lián)系。因此，證候診斷離不開(kāi)具體疾病的診斷，證 候診斷的規(guī)范化研究應(yīng)采用病證結(jié)合的研究思路，這樣才能對(duì)疾病過(guò)程中各個(gè)發(fā) 展階段的證候作出正確的診斷，才能將中醫(yī)的證候演變規(guī)律更清晰地凸現(xiàn)出來(lái)。 由于相對(duì)于中醫(yī)學(xué)病名而言，西醫(yī)學(xué)病名往往診斷明確，機(jī)制比較清晰，所以應(yīng) 選擇西醫(yī)診斷明確，而中醫(yī)治療有優(yōu)勢(shì)，又嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的臨床常見(jiàn)病和多 發(fā)病，采用西醫(yī)辨病，中醫(yī)辨證，以病為經(jīng)，以證為緯，病證結(jié)合的研究思路?！胺健迸c“證”密切相關(guān)，方由證立

9、，證隨方名，方能測(cè)證，證能驗(yàn)方。很 多有效的經(jīng)方、名方是結(jié)合了中醫(yī)理論精華和長(zhǎng)期臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)配伍而成， 與其 特定的證候有較明確的對(duì)應(yīng)關(guān)系。而且，臨床療效是臨床醫(yī)學(xué)的核心和關(guān)鍵問(wèn)題， 證候分類(lèi)在一定程度上應(yīng)建立在方劑療效觀察的基礎(chǔ)上， 通過(guò)以方測(cè)證還可以對(duì)“證”進(jìn)行動(dòng)態(tài)的研究。所以，我們課題組提出“以候?yàn)樽C，以象為素，病證結(jié)合，方證相應(yīng)，是建立辨證方法新體系的依據(jù)”；也有學(xué)者提出“圍繞證候病機(jī) 及其與疾病和方劑的相關(guān)性這一中醫(yī)證候研究的重要科學(xué)問(wèn)題，突出中醫(yī)學(xué)思維特征與現(xiàn)代科學(xué)設(shè)計(jì)融合的研究思路，以方劑干預(yù)治療效果作為比較參照系統(tǒng)， 基于中醫(yī)以方測(cè)證的逆向思維的認(rèn)證方法，不斷積累、完善，由此構(gòu)

10、建出具 有堅(jiān)實(shí)臨床科學(xué)基礎(chǔ)的證候標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該是病證結(jié)合研究的重要發(fā)展方向之一”。2.2動(dòng)物模型病證結(jié)合的必要性目前，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型多是根據(jù)西醫(yī)理論塑造疾病模型，根據(jù)中醫(yī)理 論塑造證候模型，再把二者結(jié)合起來(lái)，在西醫(yī)疾病模型的基礎(chǔ)上利用人為干預(yù)手 段用中西藥物，或采用物理、化學(xué)和機(jī)械性刺激方法使動(dòng)物生活環(huán)境、 條件改變） 造成同時(shí)兼有證的模型，其是否能如實(shí)反映證型還有待進(jìn)一步認(rèn)證。中西醫(yī)結(jié)合 在臨床上有廣泛的應(yīng)用，但在動(dòng)物模型的建立上卻忽略了病與證的結(jié)合。所以必 須建立病證結(jié)合動(dòng)物模型，其意義在于為中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論的深化和新理論 的形成提供可能和依據(jù)，同時(shí)為臨床治療作用原理的研究提供了依據(jù)，

11、 對(duì)于在深 層次研究探討中西醫(yī)理論的內(nèi)在聯(lián)系有重要意義。同時(shí)病證結(jié)合動(dòng)物模型有助于中藥、方劑作用機(jī)制的研究并滿足新藥開(kāi)發(fā)的需要。（三）改良實(shí)驗(yàn)的探討1、動(dòng)物個(gè)體差異的縮小本次實(shí)驗(yàn)的造模階段還是比較成功，模型的制造成功率達(dá)到98%但成功造模型好動(dòng)物對(duì)藥物的耐受性不徑相同。 實(shí)驗(yàn)組認(rèn)為藥物的靶向性有待提高， 可通 過(guò)尾靜脈注射；同時(shí)考慮到心力衰竭的癥候復(fù)雜性，可運(yùn)用超聲心動(dòng)圖進(jìn)行早期 篩選。2、選擇藥物造模問(wèn)題的探討目前應(yīng)用阿霉素誘導(dǎo)心力衰竭的動(dòng)物模型制作方法較多，單次劑量從2.5 mg到20 mg總量從10mg到25 mg 般認(rèn)為Adr誘導(dǎo)心衰主要原理在于它的累積 作用，而不是藥物濃度的高低。但

12、骨髓抑制和腹膜炎等副作用則與藥物濃度有關(guān)。 Adr誘導(dǎo)心衰模型的建立過(guò)程中，造成動(dòng)物意外死亡的主要原因是骨髓抑制、藥 物性腹膜炎、腸道副反應(yīng)（如腹瀉）、心力衰竭的意外死亡等。在很多文獻(xiàn)中，低 劑量Adr用于腎病模型的制造?？傊?，Adr誘導(dǎo)心衰模型的方法尚不統(tǒng)一，有待 進(jìn)一步研究探討。三、總結(jié)目前心血管疾病已成為人類(lèi)第一大殺手，而心力衰竭是各類(lèi)心臟疾病的最終 歸屬。中醫(yī)對(duì)于治療慢性心力衰竭，尤其是以頑固性心力衰竭為主的心血管疾病 具有良好的療效，避免了西醫(yī)藥物副作用（洋地黃中毒等）以及手術(shù)帶來(lái)的創(chuàng)傷。中藥新藥治療完全性充血性心力衰竭的臨床研究指導(dǎo)原則 是研究的主要 標(biāo)依據(jù)但在臨床治療過(guò)程中，病人

13、往往病情危重、證型錯(cuò)綜復(fù)雜。實(shí)驗(yàn)的宗旨在 于研究心力衰竭的發(fā)病過(guò)程中病理變化， 通過(guò)以“方”測(cè)“證”、以“方”測(cè)“病” 的方法，了解慢性心力衰竭中演化規(guī)律、掌握某一病理時(shí)期的典型癥狀。但如何 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中減少藥物的毒副作用、 減少個(gè)體差異、心衰模型制造的改良、判定 心功能改善以及心衰如何分型將成為我們繼續(xù)研究的課題。參考文獻(xiàn)：1、朱奔奔 郭維 黃亮 楊涓 貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院 真武湯對(duì)慢性充血性心力衰竭 模型大鼠ET CGR水平的影響2、 王軍孫振濤山東省東平縣接山中心衛(wèi)生院丹參飲合四君子湯加減治療冠 心病心絞痛5O例3、 楊水娥 張萍，李海華參麥注射液治療慢性心力衰竭療效的研究【J】中 華實(shí)用中西醫(yī)

14、雜志，2004, 4(1 7) : 16081609.4、 陳海燕吳煥林參麥注射液治療慢性充血性心力衰竭的療效觀察【J】.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004, 1 3(1) : 3031.5、張軍 山東中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭的臨床研究進(jìn)展&李玉梅姜水印衛(wèi)洪昌病證結(jié)合的充血性心力衰竭的基本證型演變規(guī)律 的研究進(jìn)展7、 陳金水陳金雄吳天敏潘振彬謝文艷中醫(yī)辨證治療充血性心力衰竭 的研究現(xiàn)狀與思考8、楊慶有孫慧茹李合國(guó)生脈飲加昧對(duì)慢性心力衰竭患者血漿腦鈉素水平的 影響The Effect of Modified Pulse-Activati ng Power on Brain NatriureticPeptide in Blood Plasma of Chronic Heart Failure Patients9、李珊珊 河南中醫(yī)學(xué)院 真武湯臨床及實(shí)驗(yàn)研究概況10、劉兵龍新生呂萍深圳市中醫(yī)院護(hù)加味真武湯治療充血性心力衰