動醫(yī)糞便檢查法

1、寄生蟲卵糞便檢查法許多寄生蟲的蟲卵、卵囊或幼蟲可隨宿主的糞便排出體外。通過檢查糞便，可以確定是否感染寄生蟲及其種類和感染強度。糞便檢查在寄生蟲病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和驅(qū)蟲效果評定上均具有重要意義。一、目的及要求1、掌握直接涂片法、漂浮法、沉淀法檢查寄生蟲卵。2、在光學(xué)顯微鏡下區(qū)分蟲卵、幼蟲或蟲體和異物。3、觀察常見吸蟲卵、絳蟲卵、線蟲卵等寄生蟲蟲卵，掌握其一般特征。二、實驗內(nèi)容 （一）糞樣采集及保存方法1.被檢糞樣應(yīng)該是新鮮且未被污染，最好從直腸采取。2.大動物按直腸檢查的方法采集；小動物可將食指套上塑料指套，伸入直腸直接鉤取糞便。自然排出的糞便，要采取糞堆上部未被污染的部分。3.采取的糞便應(yīng)裝

2、入清潔的容器內(nèi)。采集用品最好一次性使用，如多次使用則每次都要清洗，相互不能污染。4.采取的糞便應(yīng)盡快檢查，否則，應(yīng)放在冷暗處或冰箱冷藏箱中保存。當(dāng)?shù)夭荒軝z查需送出或保存時間較長時，可將糞樣浸入加溫至5060、510福爾馬林中，使其中的蟲卵失去活力，但仍保持固有形態(tài)，還可以防止微生物的繁殖。（二）直接涂片法（Examination of Direct Smears）在清潔的載玻片上滴1-2滴水或1滴甘油與水的等量混合液（加甘油的好處是能使標(biāo)本清晰，并防止過快蒸發(fā)變干），其上加少量糞便，用火柴棍兒仔細(xì)混勻。再用鑷子去掉大的草棍兒和渣子等，之后加蓋玻片，置光學(xué)顯微鏡下觀察蟲卵或幼蟲。注意涂片的厚薄以

3、在載玻片的下面墊上有字的紙時，紙上的字跡隱約可見為宜。直接涂片法的優(yōu)點是簡便易行、快速、適合于蟲卵量大的糞便檢查；缺點是對蟲卵含量低的糞便檢出率低。因此在實際工作中，需多檢幾片，以提高檢出率。檢查蟲卵時，先用低倍鏡順序查蓋玻片下所有部分，發(fā)現(xiàn)疑似蟲卵物時，再用高倍鏡仔細(xì)觀察。因一般蟲卵（特別是線蟲卵）色彩較淡，鏡檢時視野宜稍暗一些（聚光器下移）。圖1-1-1 直接涂片法示意另一方法是直接涂片法的改良法叫回旋法。取23g糞樣加清水23倍，充分混勻成懸液。后用玻璃棒攪拌0.51min，使之成回旋運動，在攪拌過程中迅速提起玻璃棒，將棒端附著的液體放于載片上涂開，加上蓋片在鏡下檢查。檢查時多取幾滴懸液

4、。該方法的原理是由于回旋攪動的結(jié)果，可使玻璃棒端懸液小滴中附有較多量的寄生蟲卵或幼蟲。（三）漂浮法（Method Involving Flotation）其原理是采用比重高于蟲卵的漂浮液，使糞便中的蟲卵和糞便渣子分開而浮于液體表面，然后進(jìn)行檢查。本法對大多數(shù)線蟲卵、絳蟲卵及球蟲卵囊均有效；但對吸蟲卵、后圓線蟲卵和棘頭蟲卵效果較差。漂浮液通常多采用飽和鹽水，方法簡便易行。飽和鹽水的制備把食鹽加入沸水鍋內(nèi)，直到食鹽不再溶解而出現(xiàn)沉淀為止（1000ml沸水中加入約400g食鹽）。精制鹽配制的飽和鹽水一般不必過濾，待冷卻后即可使用（冷卻后的溶液有食鹽結(jié)晶析出，即為飽和）；粗制鹽配制的飽和液可用濾紙、紗

5、布或棉花過濾后備用。漂浮方法取新鮮糞便2g放在平皿中，用鑷子或玻璃棒壓碎，加入10倍量的飽和鹽水，攪拌混合，用糞篩或紗布過濾到平底管中，使管內(nèi)糞汁平于管口并稍隆起為好，但不要溢出。靜置30分鐘左右，用蓋片蘸取后，放于載片上，鏡下觀察；或用載片蘸取液面后翻轉(zhuǎn)，加蓋片后鏡檢；也可用特制的鐵絲圈進(jìn)行蘸取檢查。 鐵絲圈圖1-1-2 漂浮法示意注意事項 漂浮時間約為30分鐘左右，時間過短（少于10分鐘）漂浮不完全；時間過長（大于1小時）易造成蟲卵變形、破裂，難以識別；檢查多例糞便時，用鐵絲圈蘸取一例后，再蘸取另一例時，需先在酒精燈上燒過后再用之，以免相互污染，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。漂浮液必須飽和，且保存在不

6、低于13的情況下，才能保持較高的比重。否則效果難以保證。 在使用飽和食鹽液漂浮蟲卵時，只能把線蟲卵及一些蟲卵浮上來，而棘頭蟲卵和吸蟲卵卻不能浮上來。所以在把通常的漂浮法進(jìn)行完以后，可將杯中的上層液體倒掉，再取沉渣進(jìn)行鏡檢。除飽和鹽水以外，其他一些漂浮液也可用于一些特殊蟲卵的檢查。如飽和硫酸鋅溶液（飽和度為1000ml水中溶解920g硫酸鋅）漂浮力強，檢查豬肺絲蟲卵效果較好；飽和硫酸鎂溶液（飽和度為1000ml水中溶解440g硫酸鎂）多用于結(jié)腸小袋纖毛蟲包囊的檢查；飽和蔗糖溶液（飽和度為1000ml水中溶解1280g蔗糖）性溫和，可適于多種蟲卵和卵囊的漂浮。另外，還有一種簡單的漂浮技術(shù)它可以檢查

7、含卵量少的糞便（每g糞便少于50個蟲卵）。具體步驟如下：即取3g糞便放于一塑料杯或燒杯內(nèi)，加進(jìn)50ml漂浮液后用玻璃棒攪勻，通過糞篩或雙層紗布過濾到另一個杯中漂浮10分鐘然后用一試管插在濾液的中央底部，并迅速提起。把附在上面的液滴滴落在載片上，加上蓋片鏡檢。（四）沉淀法（Sedimentation Technique）其原理是利用蟲卵比重比水大的特點，讓蟲卵在重力的作用下，自然沉于容器底部，然后進(jìn)行檢查。沉淀法可分為離心沉淀和自然沉淀。1、離心沉淀法通常采用離心機進(jìn)行離心，使蟲卵加速集中沉淀在離心管底，然后鏡檢沉淀物。方法是取5g被檢糞便，置于平皿或燒杯中，加5倍量的清水，攪拌均勻。經(jīng)糞篩和漏

8、斗過濾到離心管中。置離心機上離心2-3分鐘（電動離心機轉(zhuǎn)速約為500轉(zhuǎn)/分），然后傾去管內(nèi)上層液體，再加清水?dāng)噭?，再離心。這樣反復(fù)進(jìn)行2-3次，直至上清液清亮為止，最后傾去大部分上清液，留約為沉淀物1/2的溶液量，用膠帽吸管吹吸均勻后，吸取適量糞汁（2滴左右）置載玻片上，加蓋玻片鏡檢。另外，也可將離心沉淀法和漂浮法結(jié)合起來應(yīng)用。如可先用漂浮法將蟲卵和比蟲卵輕的物質(zhì)漂起來，再用離心沉淀法將蟲卵沉下去；或者選用沉淀法使蟲卵及比蟲卵重的物質(zhì)沉下去，再用漂浮法使蟲卵浮起來，以獲得更高的檢出率。2、自然沉淀法操作方法與離心沉淀法類似，只不過是將離心沉淀改為自然沉淀過程。沉淀容器可用大的試管進(jìn)行。每次沉淀時間約為半小時以上。自然沉淀法缺點是所需時間較長，但其優(yōu)點是不需要離心機，因而在基層鄉(xiāng)下操作方便。沉淀法對各種蠕蟲卵及幼蟲均可查到，特別適用于檢查比重大的蟲卵（如吸蟲卵等）。注意此法糞量少，一次糞檢最好多看幾片，以提高檢出率。圖1-1-14