清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證方案

1、清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證方案文件編碼：EL-YZ54010-01文件審定部門簽名日期起草人審核人審核人審核人審核人審核人批準人四川諾迪康威光制藥有限公司目 錄1. 概述.32. 目的.33. 適用范圍.34. 職責.45. 驗證條件.46. 驗證時間計劃.47. 驗證要求及標準.28. 驗證實施.79. 驗證結(jié)果評定與結(jié)論.710. 擬定再驗證周期.711. 附件.71. 概述：生產(chǎn)過程中所用的生產(chǎn)設(shè)備均可能有殘留物遺留，為了最大程度的避免由于上一批次生產(chǎn)產(chǎn)品的殘留影響下一批次或其他品種，故必須對生產(chǎn)所用的設(shè)備進行清潔。清潔后要對該清洗方法進行取樣檢測殘留量。一般通常的取樣方法為棉簽擦拭

2、法和淋洗法。由于我公司產(chǎn)品均為中成藥，成分復(fù)雜，無法對每一成分進行測定，所以檢測方2. 目的： 考察清洗驗證涉及取樣過程和所用檢測方法的過程，是對人員取樣操作、殘留物轉(zhuǎn)移、測試過程的考察，考察項目最低定量限、線性、綜合回收率等。3. 適用范圍：清潔驗證取樣方法及檢驗方法。4. 職責姓 名部 門小組職務(wù)職責方延剛質(zhì)量管理部組長負責驗證的組織協(xié)調(diào)工作，以保證本方案規(guī)定的驗證項目順利實施；負責驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核；負責驗證報告的起草；負責驗證周期的確認樂元保工程部組員負責組織試驗所需器具的校驗。張慧質(zhì)量管理部組員負責驗證現(xiàn)場監(jiān)管并協(xié)調(diào)驗證工作；負責偏差、變更的審核，楊燕質(zhì)量管理部組員負責起草驗證方案

3、；負責驗證方案的實施；負責協(xié)助調(diào)查和處理驗證過程中的偏差；參與檢驗方法驗證方案的實施；制備陰性樣品。李新質(zhì)量管理部組員負責驗證方案的實施。負責協(xié)助調(diào)查和處理驗證過程中的偏差。陶瑤質(zhì)量管理部組員負責驗證方案的實施。負責協(xié)助調(diào)查和處理驗證過程中的偏差。5. 條件5.1. 檢驗操作規(guī)程齊全（記錄見附件1）5.2. 設(shè)備相關(guān)標準操作規(guī)程齊全、用具齊全（記錄見附件2）5.3. 檢驗、檢測儀器均已校驗（記錄見附件3）5.4. 風險識別5.4.1. 本次風險評估根據(jù)公司質(zhì)量風險管理規(guī)程要求進行。項目風險源風險發(fā)生的失敗模式風險可能導(dǎo)致的后果1文件與人員培訓(xùn)無操作指導(dǎo)文件，操作人員未經(jīng)培訓(xùn)儀器操作失當，出現(xiàn)操

4、作事故2環(huán)境環(huán)境溫濕度不符合要求影響儀器正常運行3儀器狀態(tài)儀器運行不正常；功能障礙、電源不符合要求損壞儀器4試劑、試液、樣品、工具不符合要求導(dǎo)致驗證失敗或結(jié)果不準確。5.4.2. 通過對風險的識別，針對關(guān)鍵風險控制點進行控制，以降低風險至可接受標準。5.4.3. 采取控制措施后風險再評估記錄（記錄見附件4）5.4.4. 驗證小組人員培訓(xùn)及考核記錄（記錄見附件5）6. 驗證時間計劃：從 2014 年6月 2 日開始至 2014 年6 月18日完成。7. 驗證要求及標準嚴格按照該方案進行驗證，符合新版GMP對清潔驗證的要求。8. 驗證實施8.1. 驗證前確認棉花/棉簽 材質(zhì)：棉簽 紫外分光光度計

5、編號： 校驗有效期 接受 不接受 電子天平 編號： 校驗有效期 接受 不接受 批號： 確認人： 日期： 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日8.2. 檢驗方法描述8.2.1. 檢測過程中成藥各組分結(jié)構(gòu)中含有很強的紫外吸收官能團，如雙鍵的苯環(huán)等，故可采用紫外分光光度法。用1cm比色皿，在合適的最大的吸收波長處，以甲醇為空白，測定樣品溶液的吸收度。根據(jù)測得的吸收度來計算樣品殘留的量。8.2.2. 貯備液的配制取對照品約10mg，精密稱定，置于200ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，得貯備液（50g/ml）。8.2.3. 計算測定時同時進行對照品的測定，根據(jù)朗伯比爾定律，按下列公式計算：

6、A樣C樣= ×C對A對A：分別為樣品和貯備液的吸收度C：分別為樣品和貯備液的溶液濃度8.3. 驗證內(nèi)容 8.3.1. 檢測方法驗證部分 為了保證清洗驗證和日常清洗結(jié)果的可靠性，故對本方案采用的紫外分析方法考察了最大吸收波長確定、最低檢測限/定量限、線性和范圍、精密度、回收率。 其中線性和范圍、精密度和回收率項目考察合并在綜合回收率考察中，見8.4.章節(jié)。8.3.2. 最大吸收波長的確定 取貯備液，以甲醇為空白，采用紫外分光光度儀，在400nm到190nm范圍內(nèi)進行掃描，找出最合適的最大吸收波長，并考察溶劑是否干擾。結(jié)果：最合適的最大吸收波長為： nm，吸收圖譜見附件8確認人： 日期：

7、 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日名 稱質(zhì)量管理部清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證小結(jié)（最大吸收波長的確定）偏 差 無 有，執(zhí)行偏差管理規(guī)程規(guī)定，相關(guān)記錄附報告后。評 價 與建 議 項目組長 ： 日期：8.3.3. 最低檢測限/定量限 采用50g/ml的貯備液逐級稀釋成不同濃度的溶液測定吸收度，如25g/ml、10g/ml、5.0g/ml、2.5g/ml等，直至最低定量限。 檢測限以1/3的最低定量限計算。濃度（g/ml）吸收度5025105.02.5最低定量限LOQ最低檢測限LOD確認人： 日期： 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日8.3.4. 線性和范圍精密稱取適量對照品，用甲醇制

8、成5個不同濃度溶液，作為研究溶液。5個不同濃度的溶液及其確定依據(jù)見附件6描述。并以濃度(g/ml)為橫坐標，吸收度為縱坐標的線性關(guān)系曲線，得到的R2應(yīng)0.99，線性曲線見附件9。濃度（g/ml）吸收度 吸收曲線方程 R2確認人： 日期： 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日結(jié)論：名 稱質(zhì)量管理部清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證小結(jié)（最低檢測限/定量限、線性和范圍）偏 差 無 有，執(zhí)行偏差管理規(guī)程規(guī)定，相關(guān)記錄附報告后。評 價 與建 議 項目組長 ： 日期：8.4. 綜合回收率驗證8.4.1. 棉簽擦拭法綜合回收率驗證A. 試驗溶液配制 精密稱取適量對照品，用甲醇制成5個不同濃度溶液，作為研究溶

9、液。 5個不同濃度的溶液及其確定依據(jù)見附件7描述。B. 驗證過程B1. 準備一塊平整光滑的不銹鋼板材，尺寸為30cm×30cm。在鋼板上劃出20cm×20cm 的區(qū)域。將此區(qū)域分割成5cm×5cm的16個小塊。分別將約10ml試驗溶液定量裝入噴霧器，盡量均勻地噴在20cm×20cm的區(qū)域內(nèi)，根據(jù)實際噴出的溶液量計算單位面積上產(chǎn)品的量。B2. 自然晾干不銹鋼板。B3. 將棉簽用無水甲醇潤濕，除去棉簽上多余的溶液，按照“擦拭法和淋洗法取樣程序”進行。擦拭區(qū)域選擇整個噴涂面的中心區(qū)域單位面積(5cm×5cm)，整個擦拭采用同一根棉簽。每個濃度平行試驗

10、3次。B4. 取樣結(jié)束后，將棉簽分別放入25ml的試管中，用10ml無水甲醇稀釋至刻度，并標注相關(guān)取樣信息。B5. 將上述15份樣品溶液和試驗溶液依次按照本方案中描述檢測方法進行測定。B6. 回收率計算公式回收率(%) =實際測得值÷理論測得值×100C. 接受標準綜合回收率：70% 綜合回收率RSD：15%D. 實驗結(jié)果棉簽擦拭法綜合回收率結(jié)果系列檢測溶液實際測得值g/ml對應(yīng)試驗濃度實際測得值g/ml理論加入濃度g/ml回收率%試驗濃度1123試驗濃度2123試驗濃度3123試驗濃度4123試驗濃度5123平均回收率70%回收率RSD%15%備注：1. 檢測溶液實際測得

11、值為經(jīng)噴灑、稀釋后得到的檢測樣品；2. 對應(yīng)試驗濃度實際測得值為由檢測得到的數(shù)值轉(zhuǎn)換至噴灑至表面上未擦拭前的濃度。確認人： 日期： 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日E. 結(jié)論 名 稱質(zhì)量管理部清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證小結(jié)（棉簽擦拭法綜合回收率）偏 差 無 有，執(zhí)行偏差管理規(guī)程規(guī)定，相關(guān)記錄附報告后。評 價 與建 議 項目組長 ： 日期：8.4.2. 淋洗法綜合回收率驗證A. 試驗溶液配制 精密稱取適量對照品，用甲醇制成5個不同濃度溶液，作為研究溶液。 5個不同濃度的溶液及其確定依據(jù)見附件7描述。B. 驗證過程B1. 精密吸取1ml試驗溶液置于50ml圓底燒瓶中，并旋轉(zhuǎn)燒瓶使試驗溶液

12、均勻地分布在燒瓶下部內(nèi)表面上。自然干燥或在30下溫和干燥。B2. 向燒瓶中加入50ml甲醇，使之延壁快速留下，同時不斷轉(zhuǎn)動燒瓶。輕微搖晃燒瓶使溶液均勻。作為測試溶液。每個濃度平行試驗3次。B3. 將上述15份樣品溶液和試驗溶液依次按照本方案中描述檢測方法進行測定。B4. 回收率計算公式回收率(%) =實際測得值÷理論測得值×100C. 接受標準綜合回收率：70% 綜合回收率RSD：15%D. 實驗結(jié)果淋洗法綜合回收率結(jié)果系列檢測溶液實際測得值g/ml對應(yīng)試驗濃度實際測得值g/ml理論加入濃度g/ml回收率%試驗濃度1123試驗濃度2123試驗濃度3123試驗濃度4123試驗

13、濃度5123平均回收率70%回收率RSD%15%確認人： 日期： 年 月 日復(fù)核人： 日期： 年 月 日E. 結(jié)論 名 稱質(zhì)量管理部清潔驗證取樣方法及檢驗方法驗證小結(jié)（淋洗法綜合回收率）偏 差 無 有，執(zhí)行偏差管理規(guī)程規(guī)定，相關(guān)記錄附報告后。評 價 與建 議 項目組長 ： 日期：9. 驗證結(jié)論與評價驗證小組組長： 日期：10. 擬定驗證周期根據(jù)驗證情況，經(jīng)驗證小組討論，擬定再驗證周期為 ，報驗證小組審核。一般一年一次，清潔方法發(fā)生改變需進行再驗證。11. 附件附件1 檢驗操作規(guī)程清單附件2 儀器操作規(guī)程清單附件3 相關(guān)檢測儀器校驗驗證表附件4 質(zhì)量風險評估表附件5 培訓(xùn)表附件6 線性范圍測試溶

14、液濃度的確定附件7 回收率驗證測試溶液濃度的確定附件8 最大吸收波長掃描圖附件9 線性和范圍關(guān)系曲線21 / 21文檔可自由編輯打印附件1 檢驗操作規(guī)程清單文件/資料名稱編 號存放地點驗證結(jié)論：執(zhí)行人：復(fù)核人：驗證小組： 年 月 日 年 月 日 年 月 日附件2儀器操作規(guī)程清單文件/資料名稱編 號存放地點驗證結(jié)論：執(zhí)行人：復(fù)核人：驗證小組： 年 月 日 年 月 日 年 月 日附件3相關(guān)檢測儀器效驗驗證表序號名稱型號效驗日期有限期至驗證結(jié)論執(zhí)行人年 月 日復(fù)核人年 月 日驗證小組年 月 日附件4風險評估表風險編號過程步驟可能的失敗/失效結(jié)果原因SPD起始RPN起始風險水平控制措施驗證/驗證活動實

15、施后預(yù)判SPDRPN風險水平1文件與人員培訓(xùn)儀器操作失當，出現(xiàn)操作事故無操作指導(dǎo)文件，操作人員未經(jīng)培訓(xùn)54120中經(jīng)驗證檢驗操作規(guī)程正確無誤、儀器規(guī)程合理實用，并已對相關(guān)人員進行培訓(xùn)2環(huán)境影響儀器正常運行環(huán)境溫濕度不符合要求54120中調(diào)節(jié)環(huán)境的溫濕度度在規(guī)定范圍內(nèi)3儀器狀態(tài)損壞儀器儀器運行不正常；功能障礙、電源不符合要求54120中維修儀器，采用合適電源4試劑、試液、工具導(dǎo)致驗證失敗或結(jié)果不準確不符合要求54240高重新選用附件5培 訓(xùn) 表 日 期： 培 訓(xùn) 者：培訓(xùn)地點： 培訓(xùn)題目： 培訓(xùn)時間：培訓(xùn)人數(shù)： 人受 訓(xùn) 人 簽 字姓名簽名考核結(jié)果姓名簽名考核結(jié)果考核方式考核人備注：附件6 線性

16、范圍測試溶液濃度的確定² 本次研究線性范圍濃度點確定依據(jù)以LOQ濃度點為最低濃度點，最大允許殘留量（Ld）為最高濃度點來設(shè)定線性范圍的濃度點。² 最低濃度點確定由于LOQ即為在檢測時該方法能檢測到的最低濃度，故直接將LOQ濃度最為最低濃度點。² 最高濃度點確定采用擦拭法和淋洗法兩種方式下最大允許殘留量相對應(yīng)于可供檢測時的最高濃度點作為線性研究時的最高濃度。1. 擦拭法方式下最高濃度點確定根據(jù)“產(chǎn)品生產(chǎn)設(shè)備清潔程序驗證方案”中計算得到的擦拭法下的最大允許殘留量，Ld為71.3g /cm2；在清洗后取樣檢測時溶液中濃度為178.25g/ml。 說明：在按25cm2擦拭

17、后取樣后，需要用10ml甲醇溶解后才能測定，在假定DOND3回收率在100%的情況下（即被甲醇100%提?。?，此時擦拭前的濃度至少達到178.25g/ml時方能保證置于最大允許殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2）；故在擦拭法方式下最大允許殘留量對應(yīng)的檢測時濃度為178.25g/ml。2. 淋洗法方式下最高濃度點確定根據(jù)“產(chǎn)品生產(chǎn)設(shè)備清潔程序驗證方案”中計算得到的淋洗法下的最大允許殘留量，最大Ld 為109.0g /ml，最小Ld 為32.9g /ml；該濃度即為在清洗后取樣檢測時的濃度。故在淋洗法方式下最大允許殘留量對應(yīng)的檢測時濃度為109.0g/ml。² 本次研究線性范圍濃度

18、點最高濃度點：178.25g/ml最低濃度點：LOQ （如LOQ小于32.9g /ml時，以32.9g /ml為最低濃度）另外中間3個濃度點在范圍內(nèi)最高和最低濃度范圍內(nèi)合理均衡布置附件7回收率驗證測試溶液濃度的確定 ² 本次研究回收率濃度點確定依據(jù)以LOQ濃度點為最低濃度點，最大允許殘留量（Ld）為最高濃度點來設(shè)定回收率的濃度點。² 擦拭法回收率測試溶液濃度的確定1. 最高濃度點最大允許殘留量（Ld）來設(shè)定根據(jù)“產(chǎn)品生產(chǎn)設(shè)備清潔程序驗證方案”中計算得到的擦拭法下的最大允許殘留量，Ld為71.3g /cm2；在清洗后取樣檢測時溶液中濃度為178.25g/ml。 說明：在按25

19、cm2擦拭后取樣后，需要用10ml甲醇溶解后才能測定，在假定3回收率在100%的情況下（即被甲醇100%提?。?，此時擦拭前的濃度至少達到178.25g/ml時方能保證置于最大允許殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2）；由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液10ml噴在20cm×20cm的區(qū)域內(nèi)，然后在5cm×5cm區(qū)域內(nèi)棉簽擦拭取樣，取樣后需要用10ml甲醇溶解后才能測定，考慮到棉簽轉(zhuǎn)移和檢測方法的綜合回收率最低限為70%，故此時研究的溶液濃度須達到4074g/ml時方能保證在檢測時檢測濃度達到最大允許殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2；擦拭后

20、檢測時濃度178.25g/ml）；計算如下：178.25g/ml×（20cm×20cm）×10ml/（5cm×5cm）×10ml×70%）=4074g/ml2. 最低濃度點以LOQ濃度來設(shè)定：由于在檢測時該方法能檢測到的最低濃度為LOQ，由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液10ml噴在20cm×20cm的區(qū)域內(nèi)，然后在5cm×5cm區(qū)域內(nèi)棉簽擦拭取樣，取樣后需要用10ml甲醇溶解后才能測定，考慮到棉簽轉(zhuǎn)移和檢測方法的綜合回收率最低限為70%，故此時研究的溶液濃度須達到23LOQ時方能保證在檢測時檢測濃度達到最低濃度點以LOQ； 計算如下：LOQ×（20cm×20cm）×10ml/（5cm×5cm）×10ml×70%）=23 LOQ3. 故設(shè)定的濃度點為（即需要配制的取樣方法和檢驗方法回收率研究溶液濃度）:最高濃度點：4074g/ml最低濃度點：23 LOQ另外中間3個濃度點在范圍內(nèi)最高和最低濃度范圍內(nèi)合理均衡布置² 淋洗法回收率測試溶液濃度的確定1. 最高濃度點最大允許殘