發(fā)酵液溶磷含量測(cè)定

1、編號(hào)共 4 頁(yè)制訂人制訂日期審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期頒發(fā)部門質(zhì)量管理部實(shí)施日期發(fā)酵液溶磷含量測(cè)定SOP 一、 目的： 制訂發(fā)酵液溶磷含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保發(fā)酵液中溶磷含量檢測(cè)的準(zhǔn)確。二、 適用范圍：適用于公司發(fā)酵液溶磷含量的檢驗(yàn)。三、 責(zé)任者：質(zhì)量檢驗(yàn)部QC操作人員四、內(nèi)容：1、原理：正磷酸鹽在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸銨，再用抗壞血酸使之還原成低價(jià)的鉬藍(lán)，此藍(lán)色溶液符合比爾定律。2、 儀器：電子分析天平 分光光度計(jì) 恒溫水浴堝 容量瓶 刻度吸管3、磷標(biāo)準(zhǔn)溶液配置取一定量KH2PO4(A.R)置于稱量瓶?jī)?nèi)，在105干燥至恒重，精密稱取0.439克，加水溶解，加入1mL硫酸，于10

2、0mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mg/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。有效期10天。準(zhǔn)確吸取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得 10ug/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。此標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。4、定磷試劑配制：將下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比1211的比例混勻即得。現(xiàn)配現(xiàn)用。5、繪制磷標(biāo)準(zhǔn)曲線取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，45水浴20分鐘，冷卻至室溫，按照分光光度計(jì)校準(zhǔn)使用SOP在660nm波長(zhǎng)下測(cè)量其OD值。以溶液磷含量為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。管號(hào)012345610ug/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（mL）00.51.

3、01.52.02.53.0溶液磷含量（ug）051015202530水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷試劑（mL）3.03.03.03.03.03.03.0線性回歸系數(shù)0.9996、樣品磷含量檢測(cè)取發(fā)酵液離心后上清液0.1mL，至試管中，加2.9 mL水，再加入定磷試劑3mL，振搖，于45水浴20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對(duì)照，按照分光光度計(jì)校準(zhǔn)使用SOP于660波長(zhǎng)測(cè)OD 值。5計(jì)算：根據(jù)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線以及稀釋倍數(shù)計(jì)算磷含量(ug/mL)。五、文件發(fā)放范圍公司生物產(chǎn)業(yè)部質(zhì)量管理部1份，質(zhì)量檢驗(yàn)部2份，產(chǎn)業(yè)部相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)每人1份，存檔2份。 六、變更記錄：上版文件編號(hào)上版文件實(shí)施日期

4、本次變更原因、依據(jù)及詳細(xì)變更內(nèi)容SL-QAD-248-00采用新版格式和編號(hào)，增加文件修訂內(nèi)容SLB-QC-010-01增加了定磷試劑的配制、標(biāo)定方法、標(biāo)定記錄，規(guī)定了定磷試劑的有效期磷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制記錄批號(hào)： 編號(hào)：SLB-QC-010-02R1磷標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：（天平編號(hào)： ）精密稱取0.439克于105干燥至恒重的磷酸二氫鉀，加水溶解，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，即得1mg/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。有效期10天。配制人： 配制日期： 年 月 日準(zhǔn)確吸取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得 10ug/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。配制人： 配制日期

5、： 年 月 日定磷試劑配制：將下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%鉬酸銨、10%抗壞血酸按體積比1211的比例混勻即得?，F(xiàn)配現(xiàn)用。試劑取用數(shù)量:3mol/L硫酸水2.5%鉬酸銨10%抗壞血酸配制人： 配制日期： 年 月 日磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：（分光光度計(jì)編號(hào)： ）取7支試管，分別按下表加入各試劑，充分搖勻，45水浴20分鐘，冷卻至室溫，于660nm波長(zhǎng)處分別測(cè)溶液OD值。以溶液磷含量為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。管號(hào)012345610ug/mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mL）3.02.52.01.51.00.50定磷試劑（mL）3.03.03.03.03.03.03.0測(cè)得溶液OD值為：管號(hào)0123456溶液磷含量（ug）051015202530OD值線性回歸方程（磷標(biāo)準(zhǔn)曲線）為：線性回歸系數(shù)應(yīng)0.999 線性回歸系數(shù)為： 符合規(guī)定 不符合規(guī)定標(biāo)定人： 標(biāo)定日期： 年 月 日 復(fù)核人： 日期： 年 月 日發(fā)酵液溶磷檢驗(yàn)記錄 編號(hào)：SLB-QC-010-02R2品名：批號(hào)：操作步驟：取發(fā)酵液離心上清液0.1mL至試管中，加2.9 mL水，加定磷試劑3mL，振搖，于45水浴20分鐘，冷卻至室溫，以空白做對(duì)照，按照分光光度計(jì)校準(zhǔn)使用SOP于