不同啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的活性分析

1、 不同啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的活性分析王煜1, 2, 高輝1, 陳川1, 趙和平1, 李淼1, 孫元1, 仇華吉11 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室豬傳染病研究室, 哈爾濱 150001 2 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院, 呼和浩特 010018摘 要: 為了比較不同啟動(dòng)子在桿狀病毒/昆蟲(chóng)細(xì)胞中的活性, 利用對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus, WSSV 的ie1啟動(dòng)子及其截短的mie1啟動(dòng)子、桿狀病毒ETL 啟動(dòng)子及其加長(zhǎng)的mETL 啟動(dòng)子以及桿狀病毒多角體啟動(dòng)子P PH , 構(gòu)建了含有不同啟動(dòng)子控制下的EGFP 報(bào)告

2、基因的重組桿狀病毒, 分別感染Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞, 利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平。結(jié)果表明, WSSV的ie1啟動(dòng)子和桿狀病毒的mETL 啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9細(xì)胞中都具有較強(qiáng)而早的啟動(dòng)子活性, 能夠控制報(bào)告基因早期高效表達(dá), 而P PH 在感染后期才表現(xiàn)較強(qiáng)活性。并且研究中發(fā)現(xiàn), 桿狀病毒同源重復(fù)區(qū)(hr1可以增強(qiáng)ETL 啟動(dòng)子的活性。 關(guān)鍵詞: 重組桿狀病毒, 啟動(dòng)子活性, 流式細(xì)胞術(shù)Promoter Activity of Different Promoters in Recombinant Baculovirus-infected Sf9 CellsYu Wang1, 2, Hui

3、 Gao1, Chuan Chen1, Heping Zhao1, Miao Li1, Yuan Sun1, and Huaji Qiu11 Division of Swine Infectious Diseases, National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China2 College of Animal Sciences and Vete

4、rinary Medicine, Inner Mongolian Agricultural University, Hohhot 010018, ChinaAbstract : To compare the activity of different promoter in baculovirus-insect system, a series of recombinant baculoviruses weregenerated harboring the E-GFP reporter gene under the control of one of 5 promoters, includin

5、g the ie1 promoter of shrimp white spot syndrome virus (WSSV, the truncated ie1 (mie1 promoter, the ETL promoter of the baculovirus, the elongated ETL (mETL promoter, and the polyhedron promoter (PPH of the baculovirus. The expression efficiency of the E-GFP reporter gene in the recombinant baculovi

6、rus-infected Sf9 cells was determined by flow cytometry. The results showed that both ie1 and mETL promoters had a strong promoter activity at early phase, while PPH showed a strong promoter activity at late phase. The ie1 promoter suggested the strongest promoter activity. The homologous region 1 (

7、hr1 was also found to enhance the ETL promoter activity. Keywords : recombinant baculoviruses, promoter activity, flow cytometry昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)具有安全性高、對(duì)外源基因克隆容量大、重組病毒易于篩選、具有完備的翻譯后加工修飾系統(tǒng)和高效表達(dá)外源基因的能力等目前已開(kāi)發(fā)了一系特點(diǎn)1, 廣泛用于表達(dá)外源蛋白。列新型昆蟲(chóng)桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體和高水平表達(dá)重組蛋白的昆蟲(chóng)細(xì)胞系。隨著桿狀病毒載體的不斷改進(jìn),Received : November 10, 2007; Accepted:

8、December 26, 2007Supported by: the National 973 Projects of China (No. 2005CB523202.王煜等: 不同啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的活性研究599該系統(tǒng)獲得重組病毒的幾率已從最初的0.1%1%提高到目前的80%90%以上, 桿狀病毒載體在藥物研發(fā)、疫苗生產(chǎn)、基因治療、重組桿狀病毒殺蟲(chóng)劑等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。盡管如此, 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)仍存在一些問(wèn)題, 如桿狀病毒的基因組學(xué)研究相對(duì)薄弱, 有關(guān)病毒晚期基因的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制等還不十分清楚, 表達(dá)產(chǎn)物的純化比較困難, 多元表達(dá)等方面的技術(shù)還不夠成熟等, 均有待進(jìn)一步解決。

9、最近, 臺(tái)灣學(xué)者Liu 等(2005研究發(fā)現(xiàn), 對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus, WSSV的極早期基因ie1啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞中顯示出很強(qiáng)的啟動(dòng)子活性, 其活性甚至強(qiáng)于花旗松毒蛾核型多角體病毒(OPMNPV(一種昆蟲(chóng)桿狀病毒 的極早期基因ie2啟動(dòng)子5,6。為了比較WSSV ie1啟動(dòng)子、桿狀病毒ETL 啟動(dòng)子以及桿狀病毒多角體啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中的啟動(dòng)子活性, 我們構(gòu)建了一系列含有不同啟動(dòng)子控制的EGFP 報(bào)告基因表達(dá)盒的重組桿狀病毒, 通過(guò)感染昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9來(lái)檢測(cè)和比較其啟動(dòng)子活性, 以期尋找一種在昆蟲(chóng)細(xì)胞中有較強(qiáng)活性的啟動(dòng)子, 為構(gòu)建新型高效表達(dá)

10、載體奠定基礎(chǔ)。桿狀病毒同源區(qū)(hr1序列是分散在桿狀病毒基因組中的重復(fù)序列, 已有實(shí)驗(yàn)證明hr1序列既是桿狀病毒復(fù)制原點(diǎn), 又具有增強(qiáng)子作用21, 本研究將hr1序列和ETL 啟動(dòng)子順式連接, 在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中進(jìn)行表達(dá)分析, 探討hr1對(duì)桿狀病毒早晚期基因ETL 啟動(dòng)子是否也具有增強(qiáng)子功能。1.3 轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建用Bam H I和No t I從質(zhì)粒pEGFP-N1(Invitrogen公司 中切下含EGFP 基因的740 bp片段, 插入到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb 的Bam H I和No t I位點(diǎn)之間(位于多角體啟動(dòng)子下游, 獲得重組轉(zhuǎn)移載將含AcMNPV ETL啟動(dòng)子(28

11、5 bp體pFB-P PH -EGFP ?；騧ETL 啟動(dòng)子(308 bp 10的Sma I Bam H I片段、含EGFP 基因的Bam H INo t I片段與Sna B I/No t I雙酶切后得到的轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb 三個(gè)片段按一定比例連接, 得到重組轉(zhuǎn)移載體pFB-ETL-EGFP 和pFB-mETL-EGFP 。將AcMNPV hr121插入到pFB- ETL-EGFP 的Bln I 位點(diǎn), 得到pFB-ETL-EGFP-hr1。同樣, 將含WSSV ie1啟動(dòng)子(1143 bp或mie1啟動(dòng)子(146 bp12的Sma I Bam H I片段、含EGFP 基因的Bam

12、 H INo t I片段與Sna B I/No t I雙酶切后得到的轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb 三個(gè)片段按一定比例連接, 得到重組轉(zhuǎn)移載體pFB-ie1-EGFP 和pFB-mie1-EGFP 。1.4 重組桿粒的獲得及其鑒定用獲得的重組轉(zhuǎn)移載體分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞, 37°C震蕩培養(yǎng)5 h后, 涂布于含X-gal 、IPTG 、慶大霉素、卡那霉素和四環(huán)素的LB 平板, 進(jìn)行藍(lán)白菌落篩選, 挑選白色菌落, 用含有上述3種不同抗生素的液體LB 培養(yǎng)基, 37°C震蕩培養(yǎng)過(guò)夜, 用堿裂解法小量提取重組桿粒, 用通用引物M13進(jìn)行PCR 鑒定。1 材料與

13、方法1.1 質(zhì)粒、菌株和細(xì)胞桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb 和大腸桿菌DH10Bac 感受態(tài)菌株購(gòu)自Invitrogen 公司。昆蟲(chóng)細(xì)胞株Sf9由本實(shí)驗(yàn)室保存, 用于重組桿粒的轉(zhuǎn)染和重組桿狀病毒的增殖, 用含10%胎牛血清(FBS的Graces培養(yǎng)基(Invitrogen公司 進(jìn)行培養(yǎng)。1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染用含10%FBS的Graces培養(yǎng)基將Sf9細(xì)胞培養(yǎng)于50 mL培養(yǎng)瓶中, 當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至約80%單層, 用彎頭滴管吹下細(xì)胞, 按1:2的分種比例鋪于6孔板中, 28°C培養(yǎng)12 h時(shí), 將無(wú)菌提取的重組桿粒用轉(zhuǎn)染試劑Cellfectin(Invitrogen公司 按其操作

14、說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞, 5 d后收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清, 再進(jìn)行傳代培養(yǎng), 4 d后收集第二代病毒液, 接種于正常Sf9細(xì)胞中, 2 d后置于倒置熒光顯微鏡(Nikon TE200下觀(guān)察, 3 d后收集培養(yǎng)上清, 以獲得滴度更高的重組病毒。1.2 不同啟動(dòng)子多角體啟動(dòng)子(PPH 是桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTb 攜帶的啟動(dòng)子; WSSV ie1啟動(dòng)子位于ie1基因945+52 bp處, mie1啟動(dòng)子位于94+52 bp處; ETL啟動(dòng)子是位于桿狀病毒ETL 基因2801 bp處, mETL啟動(dòng)子位于3021 bp處。1.6 病毒滴定與細(xì)胞感染將Sf9細(xì)胞以80%覆蓋率鋪于24孔板中, 置2

15、8°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜, 將收集的重組桿狀病毒上清以10倍梯度稀釋后接種Sf9細(xì)胞, 感染1 h后加入 2 mL用2 × Graces培養(yǎng)基配制的低熔點(diǎn)瓊脂糖 (0.8 g/mL, 置于室溫30 min至凝膠固化, 置28°C600 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech April 25, 2008 Vol.24 No.4培養(yǎng)5 d, 每種重組病毒做2個(gè)重復(fù), 每天進(jìn)行蝕斑計(jì)數(shù)直至連續(xù)2 d不變?yōu)橹? 用中性紅染色后計(jì)算蝕斑數(shù)量。本研究在感染后第4 d收集含病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清, 用蝕斑試驗(yàn)測(cè)定病毒的滴度(蝕斑形成單位, p

16、laque forming unit, PFU。rBac/ETL-EGFP、rBac/mETL-EGFP、rBac/ie1-EGFP、rBac/mie1-EGFP和rBac/ETL-EGFP-hr1。用上述重組病毒感染S f 9細(xì)胞, 分別以不同感染復(fù)數(shù)(MOI=10、20或50 于感染后12、24、36、48和60 h收集細(xì)胞, 用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果表明, 報(bào)告基因EGFP 均能在其中得到高效表達(dá)。當(dāng)MOI=10時(shí), WSSV的ie1啟動(dòng)子細(xì)胞熒光數(shù)從感染后12 h的47.7%升高到感染后60 h的69.9%, 表明WSSV 的ie1啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞中具有早期啟動(dòng)子特征, 能夠較早地

17、啟動(dòng)外源基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá), ETL啟動(dòng)子隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)效率也隨之逐漸增強(qiáng), 但增強(qiáng)的幅度沒(méi)有P PH 啟動(dòng)子的快; 而P PH 啟動(dòng)子在感染后24 h之前僅顯示微弱活性, 在48 h之前其活性明顯弱于其它啟動(dòng)子, 呈現(xiàn)晚期啟動(dòng)子特征, 在感染后60 h達(dá)到最大值, 此時(shí)幾乎高于其它所有啟動(dòng)子(圖1A 。當(dāng)MOI=20時(shí), 不同啟動(dòng)子活性隨時(shí)間的變化趨勢(shì)與MOI=10時(shí)幾乎相同, 但達(dá)到最高表達(dá)效率的時(shí)間明顯縮短, 幾乎在感染48 h后便接近最大值(圖1B 。當(dāng)MOI=50時(shí), ie1、mie1、 mETL1.7 流式細(xì)胞術(shù)分別于12、24、36、48和60 h收集上述感染重組桿狀

18、病毒的Sf9細(xì)胞。吸去24孔板中細(xì)胞上清, 用500 L 的PBS(pH7.4吹打Sf9細(xì)胞至懸浮成單個(gè)細(xì)胞, 1000 r/min離心5 min, 重復(fù)洗細(xì)胞沉淀兩次至無(wú)細(xì)胞碎片, 用400 L 的PBS 溶解細(xì)胞沉淀, 轉(zhuǎn)到流式細(xì)胞檢測(cè)專(zhuān)用管中, 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光數(shù)和熒光強(qiáng)度。2 結(jié)果2.1 不同啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的活性用獲得的重組桿粒轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞并進(jìn)行傳代, 獲得了含有不同啟動(dòng)子(PPH 、ETL 、mETL 、ie1和mie1 的高滴度重組桿狀病毒rBac/PP H -EGFP 、圖1 感染后不同時(shí)間各啟動(dòng)子控制的EGFP 表達(dá)水平比較Fig. 1 Expression leve

19、ls of EGFP under the control of different promoters at different post-infection timeAC: the mean percentage of EGFP-expressing cells (MOI=10, 20 or 50; D: rhe mean fluorescence intensity (MOI=50王煜等: 不同啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的活性研究601和ETL 啟動(dòng)子控制的EGFP 表達(dá)水平在感染后12 h分別達(dá)到46.9%和32.5%、32.0%和24.5%, 而此時(shí)P PH (晚期啟動(dòng)子 控制的E

20、GFP 表達(dá)效率還不到3.3%, 到感染后60 h幾種不同啟動(dòng)子的表達(dá)效率都達(dá)到了90%左右, 而P PH 表達(dá)的EGFP 甚至可以達(dá)到100%, 此時(shí)P PH 控制表達(dá)的EGFP 的熒光強(qiáng)度(綠色熒光蛋白表達(dá)量 要比其它幾種啟動(dòng)子控制的EGFP 熒光強(qiáng)度高近1倍(圖1C 和D 。MOI=20時(shí), 表達(dá)水平升至21%63%, MOI=50時(shí), 表達(dá)水平則提高到40%65%, 表明對(duì)不同啟動(dòng)子來(lái)說(shuō), 報(bào)告基因的表達(dá)效率均與MOI 呈正相關(guān)(圖2A 和B 。2.3 hr1對(duì)ETL 啟動(dòng)子的增強(qiáng)作用分別將rBac/ETL-EGFP和rBac/ETL-EGFP-hr1按MOI=20接種于Sf9細(xì)胞中,

21、 分別于感染后12、24、36、48、60 h收集細(xì)胞, 使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)表達(dá)EGFP 細(xì)胞的百分比和熒光強(qiáng)度, 結(jié)果表明, 40 h之前hr1對(duì)報(bào)告基因的表達(dá)無(wú)增強(qiáng)作用, 甚至影響報(bào)告基因的表達(dá), 但40 h之后對(duì)報(bào)告基因的表達(dá)逐漸表現(xiàn)出了增強(qiáng)作用; 48 h后rBac/ETL-EGFP報(bào)告基因表達(dá)的熒光強(qiáng)度出現(xiàn)了下降趨勢(shì), 而rBac/ETL-EGFP-hr1的熒光強(qiáng)度仍呈現(xiàn)上升趨勢(shì)(圖3A 和B, 顯示出hr1在晚期對(duì)桿狀病毒ETL 啟動(dòng)子具有增強(qiáng)作用。 2.2 不同感染復(fù)數(shù)與表達(dá)效率的關(guān)系將重組桿狀病毒rBac/PPH -EGFP 、rBac/ETL- EGFP 、rBac/mETL

22、-EGFP、rBac/ie1-EGFP和rBac/ mie1-EGFP 分別以不同感染復(fù)數(shù)(MOI=10、20或50 接種于Sf9細(xì)胞中, 24 h后收集細(xì)胞, 使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EGFP 基因表達(dá)細(xì)胞比例和熒光強(qiáng)度, 結(jié)果顯示, MOI=10時(shí), EGFP表達(dá)水平為20%48%,圖2 感染復(fù)數(shù)對(duì)不同啟動(dòng)子控制的EGFP 表達(dá)水平的影響Fig. 2 Effects of different MOIs on the expression of EGFP under the control of different promotersA: the mean percentage of EGFP-e

23、xpressing cells; B: the mean fluorescence intensity of expressed EGFP 圖3 hr1對(duì)ETL 啟動(dòng)子活性的增強(qiáng)作用Fig. 3 Enhancement of hr1 on ETL promoter activityA: the mean percentage of EGFP-expressing cells of ETL promoter with or without hr1; B: the mean fluorescence intensity of expressed EGFP under the control of

24、ETL with or without hr13 討論長(zhǎng)期以來(lái), 昆蟲(chóng)桿狀病毒作為一種高效表達(dá)系統(tǒng)在蛋白表達(dá)和基因功能研究中得到廣泛應(yīng)用。近年來(lái), 研究還發(fā)現(xiàn), 含有哺乳動(dòng)物活性啟動(dòng)子的重組桿狀病毒可以轉(zhuǎn)導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞并表達(dá)外源基 因24, 桿狀病毒作為基因轉(zhuǎn)移載體在基因治療和非復(fù)制型載體疫苗研究上展示了廣闊應(yīng)用前景。該602 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech April 25, 2008 Vol.24 No.4表達(dá)系統(tǒng)通常使用晚期啟動(dòng)子, 重組桿狀病毒外源蛋白表達(dá)受病毒晚期啟動(dòng)子的控制, 表達(dá)效率很高, 但也會(huì)帶來(lái)一些問(wèn)題, 例如當(dāng)?shù)鞍桩a(chǎn)量出現(xiàn)

25、峰值時(shí), 細(xì)胞卻由于病毒感染而即將死亡。在本研究中, 我們利用WSSV 的ie1和mie1啟動(dòng)子、桿狀病毒ETL 和mETL 啟動(dòng)子以及桿狀病毒多角體啟動(dòng)子P PH , 分別構(gòu)建了含有不同啟動(dòng)子控制下的EGFP 報(bào)告基因表達(dá)盒的重組桿狀病毒, 然后感染Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞, 結(jié)果顯示, 這5種不同啟動(dòng)子在Sf9細(xì)胞中都有較強(qiáng)的活性, 均能高效表達(dá)報(bào)告基因EGFP, 這與前人的研究是一致的1719, 但5種不同啟動(dòng)子在Sf9細(xì)胞中的活性跟感染時(shí)間有很大關(guān)系。在MOI=50時(shí), 重組桿狀病毒感染后12 h, ie1和ETL 等早期啟動(dòng)子控制的EGFP 的表達(dá)水平達(dá)到24.5%46.9%, 而此時(shí)P PH

26、 (晚期啟動(dòng)子 控制的EGFP 表達(dá)效率還不到4%, 到感染后60 h幾種不同啟動(dòng)子控制的EGFP 的表達(dá)水平都達(dá)到了90%左右, 而P PH 控制的EGFP 甚至可以達(dá)到100%, 此時(shí)P PH 控制的EGFP 的熒光強(qiáng)度(綠色熒光蛋白表達(dá)量 要比其它幾種啟動(dòng)子控制的EGFP 熒光強(qiáng)度高1倍 (圖1D 。據(jù)報(bào)道, 用MOI=1的重組桿狀病毒感染細(xì)胞時(shí), 即能檢測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá)15。在本研究中, 我們發(fā)現(xiàn), 重組桿狀病毒MOI=10時(shí), 感染后24h 報(bào)告基因的表達(dá)效率能達(dá)到20%48%, 同時(shí)也發(fā)現(xiàn), 桿狀病毒感染復(fù)數(shù)的增加可顯著提高外源基因的表達(dá)效率(圖2A 和B, 這與前人的研究結(jié)果是

27、一致的16。桿狀病毒同源重復(fù)區(qū)(hr1序列是分散在桿狀病毒基因組中的重復(fù)序列, 已有研究證明hr1既是桿狀病毒復(fù)制原點(diǎn), 又具有增強(qiáng)子的作用21。本研究證實(shí)hr1對(duì)ETL 啟動(dòng)子具有一定的增強(qiáng)作用, 盡管在感染初期不明顯, 但在感染后期, 增強(qiáng)作用變得比較顯著(圖3 。這說(shuō)明hr1是與極晚期啟動(dòng)子相互作用的, 同時(shí)還需要其它病毒因子的參與。hr1增強(qiáng)子作用機(jī)制目前尚不很清楚。增強(qiáng)子作用機(jī)制有以下幾種假說(shuō): 增強(qiáng)子為轉(zhuǎn)錄因子提供進(jìn)入啟動(dòng)子區(qū)的位點(diǎn); 增強(qiáng)子可改變?nèi)旧|(zhì)或DNA 的構(gòu)象, 即增強(qiáng)子作用機(jī)制的拓?fù)淠Ｐ? 增強(qiáng)子模塊化作用模型。桿狀病毒基因組的復(fù)制表達(dá)是一個(gè)級(jí)聯(lián)事件, 晚期和極晚期基因

28、的表達(dá)均需要早期基因表達(dá)產(chǎn)物的參與。一些病毒反式激活因子, 如在病毒復(fù)制的級(jí)聯(lián)事件中起著重要作用的立刻早期基因產(chǎn)物IE-1, 能夠影響晚期表達(dá)基因的轉(zhuǎn)錄, 并為病毒復(fù)制所必需20。桿狀病毒極晚期多角體啟動(dòng)子雖具有極強(qiáng)的啟動(dòng)子活性, 但其啟動(dòng)外源基因表達(dá)的時(shí)間較晚, 蛋白產(chǎn)量出現(xiàn)峰值時(shí), 細(xì)胞卻由于病毒感染而即將死亡。WSSV 的ie1啟動(dòng)子在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中具有早而強(qiáng)的啟動(dòng)子活性, 能夠控制報(bào)告基因早期高效表達(dá)。最近我們的研究表明, ie1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始與真核啟動(dòng)子的相似, 不需要重組桿狀病毒立即早期基因的激活而能夠在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中直接啟動(dòng)外源基因的表達(dá)22, 這對(duì)于重組桿狀病毒外源基因的早

29、期表達(dá)及開(kāi)發(fā)基于重組桿狀病毒的哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)移載體是十分有價(jià)值的, 可用于構(gòu)建高效基因轉(zhuǎn)移載體, 應(yīng)用于基因表達(dá)和基因治療以及非復(fù)制型載體疫苗和亞單位疫苗的研究。REFERENCES1 Possee RD. Baculoviruses as expression vectors. CurrOpin Biotech, 1997, 8(5: 569572.2 Hofmann C, Sandig V, Jennins G, et al. Efficient genetransfer into human hepatocytes by baculovirus vectors. Proc Natl Ac

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