DNA定量分析用于宮頸癌及癌前病變的早期篩查探討

1、DNA定量分析用于宮頸癌及癌前病變的早期篩查探討         08-04-14 16:50:00     編輯：studa20                 作者：張薇，劉玉華，易細容，周單華 【摘要】  目的 探討用DNA定量分析和常規(guī)細胞學(xué)相結(jié)合方法而診斷宮頸癌及癌前病變。方法 對3266名婦女用宮

2、頸刷取材，每例液基薄層制片2張，1張巴氏染色做常規(guī)細胞學(xué)檢查，1張Feulgan DNA染色用全自動DNA倍體分析系統(tǒng)做DNA定量測定。常規(guī)細胞學(xué)和DNA倍體分析系統(tǒng)可疑的婦女在陰道鏡下行宮頸組織學(xué)活檢。結(jié)果 3266例宮頸癌標本中，常規(guī)細胞學(xué)發(fā)現(xiàn)42例非典型鱗狀上皮（ASCUS），9例低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）及1例高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）。DNA倍體分析發(fā)現(xiàn)3個或3個以上5C細胞的35例。32例活檢病例中有14例宮頸上皮內(nèi)瘤變2（CIN2）或CIN2以上級別改變，這14例細胞標本中均可見DNA倍體異常，而常規(guī)細胞學(xué)發(fā)現(xiàn)1例正常，8例ASCUS，4例LSIL和1例HSIL。結(jié)論

3、 DNA倍體分析與常規(guī)細胞學(xué)相結(jié)合方法可提高宮頸癌及癌前病變的陽性率。 【關(guān)鍵詞】  宮頸腫瘤 宮頸上皮內(nèi)瘤變    Screening for Early Cervical Cancer and Precancerous Cervical Lesions by DNA Ploid Analysis    Abstract: Purpose To explore the diagnosis for cervical cancer and precancerous cervical lesions by DNA ploid a

4、nalysis combined with cytology. Methods A total of 3266 cervical samples were obtained by cervix brush. Cell monolayers were prepared by a liquid based sample preparation. Two slides were prepared from each case: one slide was stained by Papanicolaou stain for conventional cytology examination, whil

5、e the other slide was stained by Feulgen-Thionin method to measure relative amount of DNA in cell nuclei using an automated DNA imaging cytometer. Women suspected by cytology and DNA ploid underwent a colposcope examination and biopsy. Results Forty-two cases proved atypical squamous cells of 

6、undermined significance (ASCUS) by cytology; 9 cases, low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL); and 1 case, high-grade squamous intraepithelial lesion(HISL) were found, while DNA ploid analysis found 35 cases having 3 or more cells with DNA greater than 5C in a total of 3266 women. Fourteen

7、cases with cervical intraepithelial neoplasia 2(CIN2 or over） out of 32 biopsies were diagnosed as 1 case, normal; 8 cases, ASCUS; 4 cases, LSIL and 1 case, HSIL by cytology. However all 14 cases were determined aneuploid cells by a DNA image cytometry. Conclusion Combination of DNA ploid analysis a

8、nd cytology can increase positive rate of detection for cervical cancer and precancerous cervical lesions.    Key words：DNA ploid; cytology; cervical neoplasms; cervical intraepithelial neoplasia    宮頸癌是婦科高發(fā)的惡性腫瘤之一，宮頸癌及癌前病變的早期篩查與早期治療是防治宮頸癌的主要手段。宮頸細胞學(xué)檢查簡便、可靠，是目前推行最廣、最有成效

9、的防癌篩查方法。但在傳統(tǒng)的宮頸細胞學(xué)檢查過程中可出現(xiàn)：取材時細胞丟失和制片時涂片質(zhì)量差、人眼工作疲勞等問題，往往會影響細胞病理學(xué)醫(yī)生的正確診斷而導(dǎo)致較高的假陰性。近年來，我們采用宮頸刷取材，液基薄層制片，有經(jīng)驗的細胞學(xué)醫(yī)生與全自動DNA圖像分析系統(tǒng)相聯(lián)合，力求把宮頸癌及癌前病變的漏診率降低到最低限度。目前，DNA倍體分析系統(tǒng)進行宮頸癌前病變的診斷及預(yù)測在國內(nèi)外已有大量報道13。在北美及歐洲細胞DNA定量分析診斷方法已是一種常見臨床檢測方法之一4，5。本研究主要探討用宮頸常規(guī)細胞學(xué)結(jié)合全自動DNA圖像分析系統(tǒng)診斷宮頸癌及癌前病變。    1  

10、材料與方法    2005年10月至2006年5月，3 266名婦女在本院進行宮頸癌篩查。參與檢查婦女的年齡多數(shù)在2262歲。宮頸癌普查試劑盒由武漢蘭丁腫瘤早期診斷檢測中心提供，其中包括：宮頸刷、盛有固定液的標本管、標簽、申請單等。    1.1   取   材    婦科醫(yī)生在陰道擴張器直視下，手持宮頸刷的刷柄，通過擴陰器，將刷頭中央較長的刷絲從子宮頸外口插入子宮頸管內(nèi)（約8mm）處，周邊刷絲頂部抵觸于子宮頸黏膜面，順時針或逆時針旋轉(zhuǎn)35圈，取出宮頸刷后，用鑷子夾

11、緊刷頭底座，拔脫刷頭，將刷尖向下垂直方向浸泡在樣本收集管固定液內(nèi)，旋緊管蓋后震蕩搖晃，然后將貼上標簽的標本管送到細胞實驗室制片。    1.2   液基薄層制片及染色    將裝有固定液和刷頭的標本收集管，經(jīng)化學(xué)和物理處理，每例制成2張薄層細胞學(xué)片。其中1張巴氏染色做常規(guī)細胞學(xué)診斷，另外1張Feulgen DNA染色做DNA定量測定。    1.3   細胞學(xué)診斷    所有巴氏染色片經(jīng)有經(jīng)驗的細胞病理醫(yī)生讀片。根據(jù)Bethesda診斷

12、分為5組：正?；蛄夹?；不明意義的非典型鱗狀上皮(typical squamous cells of  undermined significance，ASCUS)；低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(low?鄄grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)；高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(high?鄄grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)或原位癌(carcinoma in sita，CIS)；鱗狀上皮浸潤癌。    1.4   細胞DNA定量分析  &

13、#160; 所有Feulgen染色片用AcCell全自動細胞圖像分析系統(tǒng)進行掃描處理6，7，該系統(tǒng)已達到歐洲定量細胞病理學(xué)會所制定的有關(guān)DNA定量分析圖像系統(tǒng)的各項標準8。一般情況下，AcCell系統(tǒng)對每張玻片上6 000個以上的細胞核進行掃描測定。經(jīng)掃描后的每個細胞核均有128個特征值，其中包括形態(tài)特征、吸光特征、具體結(jié)構(gòu)特征、Markovian和非Markovian結(jié)構(gòu)特征和長度特征等。AcCell系統(tǒng)根據(jù)不同細胞成分所具有的不同特征參數(shù)來完成自動細胞分類和計數(shù)過程，如正常上皮細胞，增生或癌變細胞，淋巴細胞，中性白細胞及未參與診斷的垃圾細胞（重疊細胞核，聚焦不良細胞核和核碎片等）。標準對照

14、細胞為同張玻片上的100個正常上皮細胞，所測出的平均光密度(intergrated optical density，IOD)為2C的參考值，其CV（coefficient of variantion）值5%。如果出現(xiàn)以下三種情況就診斷異常：出現(xiàn)5C（DNA指數(shù)2.5）非整倍細胞。4C細胞數(shù)超過被測細胞總數(shù)的10%。出現(xiàn)非整倍體細胞峰。    凡是有DNA指數(shù)2.5以上細胞的玻片，都要通過細胞技術(shù)員在顯微鏡下逐一對DNA指數(shù)2.5細胞進行核實，以排除AcCell系統(tǒng)將垃圾和重疊的細胞核誤認為癌細胞或異常細胞。    1.5   結(jié)