細(xì)菌革蘭氏染色與鑒定技術(shù)教案

1、食品檢驗工教學(xué)教案國家高等職業(yè)教育食品加工技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫子項目課程模塊模塊二 食品微生物檢驗基本技能訓(xùn)練實訓(xùn)項目細(xì)菌革蘭氏染色與鑒定技術(shù)課時3教學(xué)對象食品檢測專業(yè)授課日期教 材食品微生物檢驗技能實訓(xùn)教程主講教師王瑞蘭教學(xué)方法講解、示范、指導(dǎo)輔助教師實驗實訓(xùn)中心簽字實訓(xùn)目的1. 掌握細(xì)菌標(biāo)本片的制作2. 了解革蘭氏染色的原理3. 掌握細(xì)菌單染與革蘭氏染色技術(shù)4. 了解簡單的無菌操作技術(shù)5. 進一步掌握普通光學(xué)顯微鏡的使用技術(shù)教學(xué)內(nèi)容與要求一、 細(xì)菌涂片制作掌握細(xì)菌涂片的制作方法二、 革蘭氏染色1. 了解革蘭氏染色的原理2. 掌握革蘭氏染色的操作技術(shù)重點難點教學(xué)重點：? 細(xì)菌涂片的制片? 革蘭

2、氏染色? 油鏡的使用技術(shù)教學(xué)難點：? 細(xì)菌涂片的制片? 革蘭氏染色? 油鏡的使用技術(shù)儀器普通光學(xué)顯微鏡試劑草酸銨結(jié)晶紫、盧哥氏碘液、番紅、95%乙醇、香柏油/液體石蠟教學(xué)過程設(shè)計一、實訓(xùn)目的 (5min)1. 掌握細(xì)菌標(biāo)本片的制作2. 了解革蘭氏染色的原理3. 掌握細(xì)菌單染與革蘭氏染色技術(shù)4. 了解簡單的無菌操作技術(shù)5. 進一步掌握普通光學(xué)顯微鏡的使用技術(shù)二、實訓(xùn)原理（10min）革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G+)和革蘭氏陰性菌(G)兩大類，是細(xì)菌學(xué)上是常用的鑒別染色法。G+和G的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。（1）G細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、

3、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。（2）G+細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時的顏色。三、實驗材料u 設(shè)備：光學(xué)顯微鏡u 材料：金黃色葡萄球菌；大腸桿菌u 試劑：草酸銨結(jié)晶紫；盧戈碘液；番紅染液；95%乙醇；香柏油四、實驗步驟（60min）（一）細(xì)菌涂片制作1. 涂菌 用無菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種環(huán)在潔凈無脂的載玻片上做一薄而均勻、直徑約1cm的菌膜。涂菌后將接種環(huán)火焰滅菌。2. 干燥 于空

4、氣中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加溫加速干燥(溫度不宜過高)。3. 固定 目的是殺死細(xì)菌并使細(xì)菌粘附在玻片上，便于染料著色，常用加熱法，即將細(xì)菌涂片面向上，通過火焰3次，以熱而不燙為宜，防止菌體燒焦、變形。此制片可用于染色。(二)革蘭氏染色1. 初染：制片上滴加結(jié)晶紫染液，1min后水洗去剩余染料2. 媒染：滴加盧戈氏碘液，1min后水洗3. 脫色：滴加95乙醇脫色，搖動玻片至紫色不再為乙醇脫退為止(根據(jù)涂片之厚薄需時30s至1min)。4. 復(fù)染：滴加番紅液復(fù)染2min，水洗。5. 干燥：晾干或用濾紙吸干（三）顯微鏡檢1.低倍鏡觀察：粗調(diào)、細(xì)調(diào)。依次再進行高倍觀察2.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，移開高倍鏡，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)換油鏡，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。五、革蘭氏染色結(jié)果判斷與成績評定蘭紫色：革蘭氏陽性菌紅色：革蘭氏陰性菌菌名顏色結(jié)果判斷原因分析評分金黃色葡萄球菌大腸桿菌六、實訓(xùn)思考與討論1. 涂片前為什么要點燃酒精燈？2. 革蘭氏染色的關(guān)鍵是哪一步？為什么？ 注意事項1載玻片要潔凈無脂，否則菌液涂不開。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌過厚。2火焰固定時溫度不宜過高，以免破壞菌體結(jié)構(gòu)3. 在染色過程中，不可使染液干涸。4. 在革蘭氏染色過程中脫色時間十分重