細菌內(nèi)毒素檢查法標準操作規(guī)程

1、細菌內(nèi)毒素檢查法標準操作規(guī)程目的： 建立細菌內(nèi)毒素檢查的基本操作，為細菌內(nèi)毒素檢查人員提供正確的操作規(guī)程。 2. 依據(jù)： 中華人民共和國藥典2000年版二部。 3. 范圍： 本標準適用于細菌內(nèi)毒素檢查的操作。 4. 職責(zé)： QC細菌內(nèi)毒素檢查人員對本標準的實施負責(zé)。 5. 程序： 5.1. 定義：5.1.1. 細菌內(nèi)毒素檢查法：本法系利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機理，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法，內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。5.1.2. 細菌內(nèi)毒素國家標準品：系自大腸桿菌精制得到的內(nèi)毒素，用于標定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標定細菌內(nèi)毒素工作標準品的效價。

2、5.1.3. 細菌內(nèi)毒素工作標準品：系以細菌內(nèi)毒素國家標準品為基準進行標定，確定其重量相當效價，每1ng工作標準品效價應(yīng)不小于2EU，不大于50EU。細菌內(nèi)毒素工作標準品用于試驗中鱟試劑靈敏度復(fù)核干擾試驗及設(shè)置的各種對照。5.1.4. 細菌內(nèi)毒素檢查用水：系指與靈敏度為0.03EU/ml或更高靈敏度的鱟試劑24小時不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水。 5.2. 實驗設(shè)備：電熱干燥箱（50300±1）、電熱恒溫水溫箱。 實驗用具：注射器(精度0.02ml)、針頭、試管架、白膠布、砂輪、75%酒精棉球、金屬直鑷、注射器盒、時鐘。試劑：鱟試劑（其標示值用表示）、內(nèi)毒素工作標準品、內(nèi)毒素檢查用水。

3、 5.3. 用具除熱原：試驗中所用的試管、注射器、針頭、金屬直鑷等沖洗干凈，置電熱干燥箱中（注射器、針頭、金屬直鑷等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），經(jīng)250加熱30分鐘，除去熱原。 5.4. 檢查法：5.4.1. 打開潔凈工作臺的風(fēng)機及照明開關(guān)，并用75%酒精棉球擦拭臺面，打開恒溫水溫箱的開關(guān)，使水溫恒定在（37±1）。5.4.2. 用75%酒精棉球擦手消毒。5.4.3. 內(nèi)毒素陽性對照溶液的制備： .1. 取內(nèi)毒素工作標準品1支，用75%酒精棉球消毒瓶頸，用砂輪割開瓶頸。 .2. 用注射器吸取1ml內(nèi)毒素檢查用水,加入到內(nèi)毒素工作標準品中，混勻，作為內(nèi)毒素標準品溶液，再從中取

4、出適量，稀釋成2.0濃度的內(nèi)毒素溶液，作為內(nèi)毒素陽性對照溶液。5.4.4. 供試品溶液的配制： .1. 供試品的最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的計算： MVD=CL/ 式中：L為供試品的細菌內(nèi)毒素限值 C為供試品溶液濃度 為鱟試劑靈敏度的標示值。 .2. 取供試品適量，加入內(nèi)毒素檢查用水，制成按最大有效稀釋倍數(shù)稀釋的供試品溶液。 . 供試品陽性對照液的配制：從前面的內(nèi)毒素標準品溶液中取出適量，加入適量的供試品溶液，稀釋成濃度為2.0濃度的供試品陽性對照液。5.4.6. 取0.1ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓶5支，用75%酒精棉球消毒瓶頸。5.4.7. 在安瓶瓶頸處一側(cè)先貼上一小條白膠布，在另一側(cè)用砂輪

5、輕劃數(shù)下，從劃痕處輕輕掰開瓶帽，使瓶帽正好粘在白膠布上，把安瓶放在臺面上。5.4.8. 每支中均加入細菌內(nèi)毒素檢查用水0.1ml，混勻，5支鱟試劑安瓶均如此操作。5.4.9. 向其中兩支中各加入0.1ml供試品溶液作為供試品管。5.4.10. 濃度的內(nèi)毒素陽性對照液作為陽性對照管。5.4.11. 1支中加入0.1ml細菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對照管。5.4.12. 1支中加入0.1ml供試品陽性對照液作為供試品陽性對照管。 . 將安瓶中溶液輕輕混勻后，將粘在白膠布上的瓶帽與割開瓶頸處對正,并封好白膠布,放到試管架上并標明編號。 . 把試管架垂直放入(37±1) 適宜水溫的恒溫水溫箱中，保溫(60±2)分鐘。 5.5. 結(jié)果判斷：5.5.1. 將試管架從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180°時，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整，并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。供試品2管均為（-）應(yīng)認為符合規(guī)定，如2管均為（+）應(yīng)認為不符合規(guī)定。5.5.2. 如兩管中1管為（+），1管為（-）按上述方法另取4支供試品管復(fù)試：