酶的特異性和影響酶活性的因素

1、實驗四 酶的特異性和影響酶活性的因素一、實驗目的 驗證酶的特異性，觀察影響酶促反應的一些因素，加深對酶性質(zhì)的認識。二、實驗原理 淀粉酶能催化淀粉水解，生成的麥芽糖屬于還原性糖，能使班氏試劑中二價銅離子還原成一價亞銅，生成磚紅色的氧化亞銅。淀粉酶不能催化蔗糖水解，所以不能產(chǎn)生具有還原性的葡萄糖和果糖，蔗糖本身又無還原性，故不與班氏試劑產(chǎn)生顏色反應。 唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成大小不同的糊精及最后水解成麥芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的顏色反應。直鏈淀粉遇碘呈藍色，糊精按分子的大小遇碘可呈藍色、紫色、暗褐色和紅色。最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯色。根據(jù)顏色反應，可以了解淀粉水解的程度。由于在不同

2、的溫度、不同的酸堿度下唾液淀粉酶活性高低不同，所以淀粉水解的程度也不同。因此，通過與碘產(chǎn)生的顏色反應判斷淀粉水解的程度，來了解溫度、pH、和激活劑與抑制劑對酶促反應的影響。三、實驗材料、器材與試劑 1、材料 自制唾液稀釋液。 2、器材 （1）試管及試管架； （2）恒溫水浴； （3）沸水??； （4）冰浴； （5）記號筆等。 3、試劑 （1）1%淀粉溶液；（2）1%蔗糖溶液；（3） pH6.8緩沖液（200mL）:0.2mol/LNa2HPO4145.5mL+0.1mol/L檸檬酸45.5mL. (4) 班氏試劑：無水硫酸銅1.74g溶于100mL熱水最后，冷卻后稀釋至150mL。取檸檬酸鈉173

3、g,無水硫酸鈉100g和600mL水共熱，溶解后冷卻并加水至850mL.再將冷卻的150mL硫酸銅溶液傾入。本試劑可長久保存。（5）稀釋唾液；（6）pH5.0緩沖液（200mL）: 0.2mol/LNa2HPO4103.0mL+0.1mol/L檸檬酸97mL.（7）pH8.0緩沖液（200mL）: 0.2mol/LNa2HPO4194.5mL+0.1mol/L檸檬酸55mL.（8）碘液。（9）1%NaCl溶液。（10）1%硫酸銅溶液。（11）1%硫酸鈉溶液。四、實驗操作1、稀釋唾液的配制 將痰吐盡，用水漱口，再含蒸餾水做咀嚼運動，2分鐘后吐入燒杯中，再用濾紙過濾后待用。2、煮沸唾液的配制取出一

4、部分稀釋唾液，放入沸水中煮沸5分鐘，使唾液淀粉酶變性失活。3、試劑中還原性物質(zhì)的檢查取試管兩支，分別加入蔗糖和淀粉各10滴，再分別加入班氏試劑2mL，搖勻，共置于沸水中3分鐘。溶液應保持藍色透明，如有渾濁或沉淀，則表明試劑中喲普還原性物質(zhì)存在，不能使用。4、酶的特異性實驗取三支試管標號后按下表加入試劑。號管試劑試緩沖液（pH6.8）淀粉溶液（1%）蔗糖溶液（1%）稀釋唾液煮沸唾液120滴10滴-5滴-220滴10滴-5滴320滴-10滴5滴-各管混勻后，放入37水浴中保溫10分鐘，然后每管加入班氏試劑20滴，放入沸水中煮沸，觀察結果。5、溫度對酶促反應的影響（1）取三支試管，編號，每管加入pH

5、6.8緩沖液20滴。1%淀粉溶液10滴。（2）將第一支試管放入37恒溫水浴，第二支試管放入沸水浴，第三支試管放入冰浴。 （3）放置5分鐘后，分別向各試管中加入稀釋唾液5滴，再放回原處。（4）10分鐘后，分別向各試管中加入碘液1滴，觀察三支試管中顏色的區(qū)別，說明溫度對酶促反應的影響。6、pH對酶促反應的影響(1) 取三支試管,編號后按下表加入各種試劑。管試劑試pH5.0緩沖液pH6.8緩沖液pH8.0緩沖液淀粉溶液1%稀釋唾液420滴-10滴5滴5-20滴-10滴5滴6-20滴10滴5滴（2）將上面三支試管放入37恒溫水浴中保溫10分鐘。（3）取出試管，分別加入1滴碘液，觀察三支試管顏色的區(qū)別，說明pH對酶促反應的影響。7、激活劑和抑制劑的影響取4 支試管，編號，按照下表加入試劑。號管試劑試1%淀粉溶液/mL稀釋唾液/mL1%硫酸銅/mL1%NaCl/mL1%硫酸鈉/mL蒸餾水/mL71.50.50.5-