第02章核酸的結(jié)構(gòu)與功能

1、11.1.蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)2.2.蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 蛋白質(zhì)的功能依賴特定空間結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的功能依賴特定空間結(jié)構(gòu)3.3.蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 兩性解離、膠體性質(zhì)、變性與復(fù)性兩性解離、膠體性質(zhì)、變性與復(fù)性 紫外吸收、呈色反應(yīng)紫外吸收、呈色反應(yīng)4.4.蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)的分離純化 透析及超濾、丙酮沉淀及鹽析、透析及超濾、丙酮沉淀及鹽析、 電泳、層析、超速離心電泳、層析、超速離心知識(shí)回顧知識(shí)回顧2第二章第二章核酸的結(jié)構(gòu)與功能核酸的結(jié)構(gòu)與功能Structur

2、e and Function of Nucleic Acid授課教師：楊授課教師：楊 瀅瀅生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室3教學(xué)目的與要求教學(xué)目的與要求 教學(xué)時(shí)數(shù)教學(xué)時(shí)數(shù) 4學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)掌握掌握 ：核酸分子中核苷酸的連接方式。核酸分子中核苷酸的連接方式。DNA和和RNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)和基本組成單位。的一級(jí)結(jié)構(gòu)和基本組成單位。DNA二級(jí)結(jié)二級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)的概念和特點(diǎn)。雙螺旋結(jié)構(gòu)的概念和特點(diǎn)。mRNA、tRNA、rRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及功能。核酶的概念。核酸的紫的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及功能。核酶的概念。核酸的紫外吸收作用。外吸收作用。DNA的變性與復(fù)性。的變性與復(fù)性。DNA的增色效的增色效應(yīng)和解鏈

3、溫度的概念。應(yīng)和解鏈溫度的概念。 熟悉熟悉 ：核酸的基本組成單位和核酸的水解產(chǎn)物。核酸的基本組成單位和核酸的水解產(chǎn)物。DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)。核酸的分子雜交。的超螺旋結(jié)構(gòu)。核酸的分子雜交。 了解了解 ：DNA結(jié)構(gòu)的多樣性。基因的定義及結(jié)構(gòu)的多樣性?；虻亩x及DNA的的功能。其他非編碼功能。其他非編碼RNA的種類(lèi)及功能。核酸酶的種的種類(lèi)及功能。核酸酶的種類(lèi)及作用。類(lèi)及作用。n核核 酸酸(nucleic acid) 是以核苷酸為基本組成單位的生物大是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子，攜帶和傳遞遺傳信息。分子，攜帶和傳遞遺傳信息。5l1868年年 Fridrich Miescher 從膿細(xì)胞中提取核

4、素。從膿細(xì)胞中提取核素。 l1944年年 Avery等人證實(shí)等人證實(shí)DNA是遺傳物質(zhì)。是遺傳物質(zhì)。l1953年年 Watson和和Crick發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)DNA的的雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)。l1966年年 Nirenberg破譯遺傳密碼。破譯遺傳密碼。l1975年年 Temin和和Baltimore發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶。發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶。l1981年年 Gilbert和和Sanger建立建立DNA測(cè)序方法。測(cè)序方法。l1985年年 Mullis發(fā)明發(fā)明PCR技術(shù)。技術(shù)。l1990年年 美國(guó)啟動(dòng)人類(lèi)基因組計(jì)劃美國(guó)啟動(dòng)人類(lèi)基因組計(jì)劃(HGP)。l1994年年 中國(guó)人類(lèi)基因組計(jì)劃啟動(dòng)。中國(guó)人類(lèi)基因組計(jì)劃啟動(dòng)。l2006年

5、年 人類(lèi)基因組計(jì)劃全部完成。人類(lèi)基因組計(jì)劃全部完成。n核酸研究的發(fā)展簡(jiǎn)史核酸研究的發(fā)展簡(jiǎn)史n核酸的分類(lèi)及分布核酸的分類(lèi)及分布存在于細(xì)胞核和線粒體存在于細(xì)胞核和線粒體 分布于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、線粒體分布于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、線粒體(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸 核糖核酸核糖核酸攜帶遺傳信息，并通過(guò)復(fù)制傳遞攜帶遺傳信息，并通過(guò)復(fù)制傳遞給下一代。給下一代。是是DNADNA轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物，參與遺傳信轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物，參與遺傳信息的復(fù)制與表達(dá)。某些病毒息的復(fù)制與表達(dá)。某些病毒RNARNA也可作為遺傳信息的載體也可作為遺傳信息

6、的載體第一節(jié)第一節(jié)核酸的化學(xué)組成及其一級(jí)結(jié)構(gòu)核酸的化學(xué)組成及其一級(jí)結(jié)構(gòu)The Chemical Component and Primary Structure of Nucleic Acid8與蛋白質(zhì)相比，核酸的元素組成特點(diǎn)有二：與蛋白質(zhì)相比，核酸的元素組成特點(diǎn)有二： 核酸中一般不含核酸中一般不含S； 核酸中核酸中P的含量較多且相當(dāng)恒定，約占的含量較多且相當(dāng)恒定，約占9%10%。9核酸核酸 ( (DNA和和RNA) )核苷酸核苷酸 核苷核苷磷酸磷酸戊糖戊糖堿基堿基嘌呤嘌呤嘧啶嘧啶核糖核糖脫氧核糖脫氧核糖n核酸組成核酸組成 DNA的組成單位是脫氧核糖核苷酸（的組成單位是脫氧核糖核苷酸（deoxy

7、ribonucleotide）RNA的組成單位是核糖核苷酸（的組成單位是核糖核苷酸（ribonucleotide）n分子組成分子組成堿基堿基(base)：嘌呤堿，嘧啶堿：嘌呤堿，嘧啶堿戊糖戊糖(ribose)：核糖，脫氧核糖：核糖，脫氧核糖磷酸磷酸(phosphate)一、核苷酸是構(gòu)成核酸的基本組成單位一、核苷酸是構(gòu)成核酸的基本組成單位11堿基堿基(base)是含氮的雜環(huán)化合物。是含氮的雜環(huán)化合物。堿基堿基嘌呤嘌呤嘧啶嘧啶腺嘌呤腺嘌呤鳥(niǎo)嘌呤鳥(niǎo)嘌呤尿嘧啶尿嘧啶胸腺嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶胞嘧啶存在于存在于DNA和和RNA中中僅存在于僅存在于RNA中中僅存在于僅存在于DNA中中n堿基堿基(扁平、疏水扁平

8、、疏水)嘌呤嘌呤(purine，Pu) NNNHN123456789NNNHNNH2腺嘌呤腺嘌呤(adenine, A)NNHNHNNH2O鳥(niǎo)嘌呤鳥(niǎo)嘌呤(guanine, G)NNH132456嘧啶嘧啶(pyrimidine，Py)胞嘧啶胞嘧啶(cytosine, C)NNHNH2O尿嘧啶尿嘧啶(uracil, U)NHNHOO胸腺嘧啶胸腺嘧啶(thymine, T)NHNHOOCH314n堿基的互變異構(gòu)體堿基的互變異構(gòu)體 HNHNCNH2+O+HNNH2NNH2亞氨式氨式+ H+NCOHNCO- -+ H+酮式烯醇式n戊糖戊糖（構(gòu)成（構(gòu)成RNA）1 2 3 4 5 OHOCH2OHOHOH核

9、糖核糖(ribose)（構(gòu)成（構(gòu)成DNA）OHOCH2OHOH脫氧核糖脫氧核糖(deoxyribose) -D-核糖核糖 -D-脫氧核糖脫氧核糖16n脫氧核苷脫氧核苷嘌呤嘌呤N-9 或或嘧啶嘧啶N-1與脫氧核糖與脫氧核糖C-1 通過(guò)通過(guò)-N-糖糖苷鍵苷鍵相連形成相連形成脫氧核苷脫氧核苷(deoxyribonucleoside)。1上的上的-OH與與5上的上的-OH在糖環(huán)在糖環(huán)的同一側(cè)為的同一側(cè)為型，不同側(cè)為型，不同側(cè)為型型（C-N鍵）鍵）A17 嘌呤嘌呤N-9 -9或或嘧啶嘧啶N-1 -1與核糖與核糖C-1C-1 通過(guò)通過(guò) - -N- -糖苷糖苷鍵鍵相連形成相連形成核苷核苷(ribonucle

10、oside)。n核苷核苷NNNN9NH2OOHOHHHHCH2OHH12糖苷鍵糖苷鍵1819磷酸的結(jié)構(gòu)和書(shū)寫(xiě)方法磷酸的結(jié)構(gòu)和書(shū)寫(xiě)方法20核苷或脫氧核苷與磷酸通過(guò)核苷或脫氧核苷與磷酸通過(guò)酯鍵酯鍵結(jié)合構(gòu)成結(jié)合構(gòu)成核苷酸核苷酸(ribonucleotide)或或脫氧核苷酸脫氧核苷酸(deoxyribonucleotide)。n核苷酸核苷酸(ribonucleotide)NNNN9NH2OO HO HHHHCH2H1 2OPO- -HOO糖苷鍵糖苷鍵酯鍵酯鍵A21POOOHOHOCH2OHOHNNNH2OOHOCH2OHOHNNNH2O 核苷核苷 ( (脫氧核苷脫氧核苷) ) 和磷酸以和磷酸以磷酸酯鍵

11、磷酸酯鍵連接形成連接形成核苷酸核苷酸( (脫氧核苷酸脫氧核苷酸) ) 核苷酸：核苷酸：AMP, GMP, UMP, CMP脫氧核苷酸：脫氧核苷酸：dAMP, dGMP, dTMP, dCMP OPOOHOHHn核苷酸的形成核苷酸的形成生物體內(nèi)多數(shù)核苷酸生物體內(nèi)多數(shù)核苷酸都是都是5 5 - -核苷酸核苷酸。C22n多磷酸核苷酸多磷酸核苷酸環(huán)化核苷酸：環(huán)化核苷酸：cAMP、cGMP，是細(xì)胞信，是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的第二信使號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的第二信使,第二信使第二信使不是核酸的組成成不是核酸的組成成分，而是重要的分，而是重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)。調(diào)節(jié)物質(zhì)。NOCH2OOHONNNNH2POOHcAMPn核苷酸衍生物核苷酸

12、衍生物2425二、二、DNA是脫氧核苷酸通過(guò)是脫氧核苷酸通過(guò)3,5-磷酸二酯磷酸二酯鍵連接形成的大分子鍵連接形成的大分子一個(gè)脫氧核苷酸一個(gè)脫氧核苷酸3 3 的的羥基羥基與另一個(gè)核苷酸與另一個(gè)核苷酸5 5 的的 - - 磷 酸磷 酸 基 團(tuán) 縮 合 形 成基 團(tuán) 縮 合 形 成 磷 酸 二 酯 鍵磷 酸 二 酯 鍵(phosphodiester bond)。 多個(gè)脫氧核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵構(gòu)成了多個(gè)脫氧核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵構(gòu)成了具有具有方向性方向性的線性分子，稱為的線性分子，稱為多聚脫氧核苷多聚脫氧核苷酸酸(polydeoxynucleotide)，即即DNA鏈鏈。273,5-磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵

13、 CA285-末端末端3-末端末端CGA磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵29交替的磷酸基團(tuán)和戊交替的磷酸基團(tuán)和戊糖構(gòu)成了糖構(gòu)成了DNA的骨架的骨架 (backbone)。DNA鏈的方向是鏈的方向是5 5 3 3 A、T、G、C30三、三、RNA也是具有也是具有3,5-磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵的線性大分子的線性大分子 RNA也是多個(gè)核苷酸分子通過(guò)也是多個(gè)核苷酸分子通過(guò)3 ,5 -磷酸二酯磷酸二酯鍵連接鍵連接形成的線性大分子，也具有形成的線性大分子，也具有5 3 方方向性向性; ; RNA的戊糖是核糖；的戊糖是核糖； RNA的嘧啶是胞嘧啶和尿嘧啶。的嘧啶是胞嘧啶和尿嘧啶。 構(gòu)成構(gòu)成RNA的四種

14、基本核苷酸是的四種基本核苷酸是AMP、GMP、CMP和和UMP。31兩類(lèi)核酸的基本化學(xué)組成比較兩類(lèi)核酸的基本化學(xué)組成比較 DNA RNA 嘌呤堿嘌呤堿 腺嘌呤腺嘌呤 (A ) 腺嘌呤腺嘌呤 (A) 鳥(niǎo)嘌呤鳥(niǎo)嘌呤 (G) 鳥(niǎo)嘌呤鳥(niǎo)嘌呤 (G) 嘧啶堿嘧啶堿 胞嘧啶胞嘧啶 (C) 胞嘧啶胞嘧啶(C) 胸腺嘧啶胸腺嘧啶(T) 尿嘧啶尿嘧啶 (U) 戊糖戊糖 D-2-脫氧核糖脫氧核糖 D-核糖核糖 酸酸 磷酸磷酸 磷酸磷酸dAMP、dGMPdCMP、dTMPAMP、GMPCMP、UMP組成單位組成單位堿基堿基32n定義定義核酸中從核酸中從55末端到末端到33末端核苷酸的排列順序。末端核苷酸的排列順序。

15、由于核苷酸間的差異由于核苷酸間的差異主要是堿基不同，所以也主要是堿基不同，所以也稱為稱為堿基序列堿基序列。55端端3端端CGA四、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)是四、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)是核苷酸的排列順序核苷酸的排列順序A G P5 P T PG PC PT P OH 3 n書(shū)寫(xiě)方法：書(shū)寫(xiě)方法：5 pApCpTpGpCpT-OH 3 5 A C T G C T 3 35 單鏈單鏈DNA和和RNA分子的大小常用核苷酸數(shù)目分子的大小常用核苷酸數(shù)目（nucleotide，nt）表示；雙鏈核酸分子的大表示；雙鏈核酸分子的大小常用小常用堿基對(duì)堿基對(duì)(base pair，bp)或千堿基對(duì)或千堿基對(duì)(base kilobase

16、pair,kbp)數(shù)目來(lái)表示。數(shù)目來(lái)表示。 小的核酸片段小的核酸片段(80)。rRNA與核蛋白體蛋白結(jié)合組成與核蛋白體蛋白結(jié)合組成核蛋白體核蛋白體(ribosome)，為蛋白質(zhì)的合成提供場(chǎng)所。，為蛋白質(zhì)的合成提供場(chǎng)所。三、以三、以rRNA為組分的核蛋白體是為組分的核蛋白體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所89n核蛋白體的組成核蛋白體的組成9070S ribosome50S large subunit23S rRNA5S rRNA31 proteins16S rRNA21 proteins30S small subunitn大腸桿菌的核蛋白體大腸桿菌的核蛋白體91n1818S rRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)

17、的二級(jí)結(jié)構(gòu)92n蛋白質(zhì)合成時(shí)形成的復(fù)合體蛋白質(zhì)合成時(shí)形成的復(fù)合體93四、四、其他非編碼其他非編碼RNA參與基因表達(dá)的調(diào)控參與基因表達(dá)的調(diào)控長(zhǎng)鏈非編碼長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA, lncRNA）n非編碼非編碼RNA（ Non-coding RNA, ncRNA）不編碼蛋白質(zhì)但具有重要生物學(xué)功能的不編碼蛋白質(zhì)但具有重要生物學(xué)功能的RNA分子。分子。 短鏈（?。┓蔷幋a短鏈（?。┓蔷幋aRNA（small non-coding RNA, sncRNA）94n ncRNA 、 lncRNA功能功能 參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、RNA的剪切和修飾、的剪切和修飾、mRNA的穩(wěn)定和

18、翻譯調(diào)控、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定和轉(zhuǎn)運(yùn)、染色的穩(wěn)定和翻譯調(diào)控、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定和轉(zhuǎn)運(yùn)、染色體的形成和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等細(xì)胞重要功能體的形成和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等細(xì)胞重要功能 n短鏈非編碼短鏈非編碼RNA亦稱為非編碼小亦稱為非編碼小RNA（small non-messenger RNA） 核內(nèi)小核內(nèi)小RNA、核仁小核仁小RNA、胞質(zhì)小胞質(zhì)小RNA催化性小催化性小RNA、小干擾小干擾 RNA 、微微 RNA95 核內(nèi)小核內(nèi)小RNA（small nuclear RNA, snRNA）位于細(xì)胞核）位于細(xì)胞核內(nèi)。內(nèi)。snRNA有有5種，分別稱為種，分別稱為U1、U2、U4、U5、U6，它們與多種蛋白形成復(fù)合體，參與它們與多種蛋白形成復(fù)

19、合體，參與真核細(xì)胞真核細(xì)胞hnRNA的內(nèi)的內(nèi)含子加工剪接含子加工剪接（第十六章）。（第十六章）。 核仁小核仁小RNA（small nucleolar RNA, snoRNA）：定位于）：定位于核仁，主要核仁，主要參與參與rRNA的加工和修飾的加工和修飾，如，如rRNA中核糖中核糖C-2 的甲基化修飾。的甲基化修飾。96 胞質(zhì)小胞質(zhì)小RNA（small cytoplasmic RNA, scRNA）：存）：存在于細(xì)胞質(zhì)中，在于細(xì)胞質(zhì)中，參與形成信號(hào)識(shí)別顆粒，參與形成信號(hào)識(shí)別顆粒，引導(dǎo)含有信引導(dǎo)含有信號(hào)肽的蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成（第十七章）。號(hào)肽的蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成（第十七章）。 催化性小

20、催化性小RNA亦被稱為亦被稱為核酶核酶（ribozyme）。是）。是細(xì)胞內(nèi)具有催化功能的一類(lèi)小分子細(xì)胞內(nèi)具有催化功能的一類(lèi)小分子RNA，具有，具有催化特定催化特定RNA降解的活性降解的活性，在，在RNA的剪接修飾的剪接修飾中具有重要作用。中具有重要作用。97n微微RNA（microRNAs, miRNAs ）是一類(lèi)長(zhǎng)度為是一類(lèi)長(zhǎng)度為22nt左右的左右的內(nèi)源性單鏈內(nèi)源性單鏈sncRNA。miRNAs主要是通過(guò)結(jié)合主要是通過(guò)結(jié)合mRNA而選擇性調(diào)控基因的表達(dá)。而選擇性調(diào)控基因的表達(dá)。 小干擾小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）是生）是生物宿主對(duì)于物宿主對(duì)于外源侵入

21、基因外源侵入基因表達(dá)的表達(dá)的雙鏈雙鏈RNA進(jìn)行切割所進(jìn)行切割所產(chǎn)生的具有特定長(zhǎng)度（產(chǎn)生的具有特定長(zhǎng)度（2123 bp）和特定序列的小片）和特定序列的小片段段RNA。這些。這些siRNA可以單鏈形式與外源基因表達(dá)的可以單鏈形式與外源基因表達(dá)的mRNA相結(jié)合，并相結(jié)合，并誘導(dǎo)相應(yīng)誘導(dǎo)相應(yīng)mRNA降解降解。 98n原核生物基因表達(dá)的特異性原核生物基因表達(dá)的特異性五、核酸在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中五、核酸在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中表現(xiàn)了不同的時(shí)空特性表現(xiàn)了不同的時(shí)空特性99n真核生物基因表達(dá)的特異性真核生物基因表達(dá)的特異性核酸的理化性質(zhì)核酸的理化性質(zhì)The Physical and Chemical Char

22、acters of Nucleic Acid第四節(jié)第四節(jié)核酸在波長(zhǎng)核酸在波長(zhǎng) 260nm 處有強(qiáng)烈的吸收，是處有強(qiáng)烈的吸收，是由由堿基的共軛雙鍵堿基的共軛雙鍵所決定的。這一特性常用作所決定的。這一特性常用作核酸的定性和定量分析。核酸的定性和定量分析。一、核酸分子具有強(qiáng)烈的紫外吸收一、核酸分子具有強(qiáng)烈的紫外吸收102n堿基的紫外吸收光譜堿基的紫外吸收光譜103DNA或或RNA的定量的定量A260 = 1.0 相當(dāng)于相當(dāng)于 50g/ml 雙鏈雙鏈DNA(dsDNA)40g/ml 單鏈單鏈DNA (ssDNA or RNA)20g/ml 寡核苷酸寡核苷酸確定樣品中核酸的純度確定樣品中核酸的純度 純純

23、 DNA: A260/A280 = 1.8純純 RNA: A260/A280 = 2.0n紫外吸收的應(yīng)用紫外吸收的應(yīng)用104二、二、DNA變性是雙鏈解離為單鏈的過(guò)程變性是雙鏈解離為單鏈的過(guò)程某些理化因素導(dǎo)致某些理化因素導(dǎo)致DNA雙鏈互補(bǔ)堿基雙鏈互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，對(duì)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，DNA雙鏈解離為雙鏈解離為單鏈單鏈的過(guò)程。的過(guò)程。 n定義定義DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。105nDNA的變性的變性106n部分變性部分變性DNA的電鏡圖像的電鏡圖像增色效應(yīng)增色效應(yīng)(hyperchromic effect)：DNA變性時(shí)由變性時(shí)由于共軛雙鍵暴露，其

24、溶液于共軛雙鍵暴露，其溶液OD260增高增高的現(xiàn)象。的現(xiàn)象。nDNA解鏈時(shí)的紫外吸收變化解鏈時(shí)的紫外吸收變化nDNA的解鏈曲線的解鏈曲線連續(xù)加熱連續(xù)加熱DNA的的過(guò)程中以溫度相對(duì)于過(guò)程中以溫度相對(duì)于A260值作圖，所得的值作圖，所得的曲線稱為曲線稱為解鏈曲線解鏈曲線。 解鏈過(guò)程中，紫外解鏈過(guò)程中，紫外吸光度的變化達(dá)到最大吸光度的變化達(dá)到最大變化值的一半時(shí)所對(duì)應(yīng)變化值的一半時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度。的溫度。解鏈溫度解鏈溫度(melting temperature，Tm)50%的的DNA雙雙鏈被打開(kāi)時(shí)所鏈被打開(kāi)時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度對(duì)應(yīng)的溫度 G+C 含量越高，解鏈溫度就越高。含量越高，解鏈溫度就越高。n解鏈曲線的

25、變化解鏈曲線的變化三、變性的核酸可以復(fù)性或形成三、變性的核酸可以復(fù)性或形成雜交雙鏈雜交雙鏈當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)鏈當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)鏈可重新配對(duì)，恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一現(xiàn)可重新配對(duì)，恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一現(xiàn)象稱為象稱為DNA復(fù)性復(fù)性(renaturation) 。減色效應(yīng)：減色效應(yīng)：DNA復(fù)性時(shí)，其溶液復(fù)性時(shí)，其溶液OD260降低。降低。熱變性的熱變性的DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過(guò)程稱為過(guò)程稱為退火退火(annealing) 。111 不同種類(lèi)的不同種類(lèi)的DNA單鏈分子或單鏈分子或RNA分子放在同一溶分子放在同一溶液中，只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的液中，只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系，在適宜的條件可以在不同的分子堿基配對(duì)關(guān)系，在適宜的條件可以在不同的分子間形成間形成雜化雙鏈雜化雙鏈(heteroduplex)。 這種雜化雙鏈可以在不同的這種雜化雙鏈可以在不同的DNA與與DNA之間形成，之間形成，也可以在也可以在DNA和和RNA分子間或者分子間或者RNA與與RNA分子分子間形成。這種現(xiàn)象稱為間形成。這種現(xiàn)象稱為核酸分子雜交核酸分子雜交。n核酸分子雜交核酸分子雜交(hybridization) n核酸分