活血健腦膠囊對大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞的保護作用

1、活血健腦膠囊對大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞的保護作用 09-02-07 15:59:00 作者：盧躍卿編輯：studa20【摘要】 【目的】研究活血健腦膠囊對大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞的保護作用。【方法】選用SD大鼠，隨機分為假手術組、模型組、尼莫地平組（劑量為10.8mgkg-1d-1）、活血健腦膠囊組（劑量為1.8gkg-1d-1），后3組再分為缺血2h及再灌注6、12、24h組；采用線栓法復制大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，免疫組織化學法檢測神經(jīng)細胞細胞色素C（Cyt C），原位雜交法檢測Caspase3mRNA、Caspase9mRNA的表達。【結果】活血健腦膠囊組腦缺血/再灌注

2、6 h 細胞色素C陽性弱表達,與模型組比較有顯著性差異(P0.01)，腦缺血/再灌注12h、24h 細胞色素C的陽性表達與模型組及假手術組比較無顯著性差異(P0.05)。模型組腦缺血再灌注24h海馬Caspase3 mRNA、Caspase9mRNA的表達達高峰(P0.01)；活血健腦膠囊組腦缺血/再灌注24hCaspase3 mRNA、Caspase9mRNA表達均減弱, 與模型組比較有顯著性差異(P0.01)?！窘Y論】活血健腦膠囊對局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)細胞的保護作用可能與其能影響神經(jīng)細胞Cyt C的釋放，降低腦缺血/再灌注后腦組織Caspase3、Caspase9的活性，從而阻斷細胞凋

3、亡的發(fā)生有關。 【關鍵詞】 活血健腦膠囊/藥理學； 腦缺血/中藥療法； 腦組織/病理學； 細胞凋亡； 疾病模型，動物； 大鼠 1 材料與方法 1.1 動物與藥物 SD大鼠78只，體質量300350g，鼠齡56月齡，雌雄各半，由河南省實驗動物中心提供（合格證號： 0001475）。活血健腦膠囊由上海復星臨西制藥有限公司提供（批號：200400306）；尼達爾片（尼莫地平），20mg/片，由天津市中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號：020602）；9g/L的氯化鈉注射液由北京雙鶴藥業(yè)有限公司提供(批號:030312312)。 1.2 試劑與儀器 PM10AD光學顯微鏡 （Olympus optical C

4、o.Ltd，JAPAN）； HITACHI 7500型透射電子顯微鏡（JAPAN）；LEICARM2145型自動切片機（德國）；phorbol estersil ( at final concentration of 0.20 mol/L) + ionomycin (at final concentration of 1 mg/L) for another 48 hours. After marked by monoclonal antibody of CD3 and CD71, the expression of CD3+CD71+ lymphocytes was observed by f

5、low cytometry. Results SINO inhibited the lymphocytes proliferation in a concentrationdependant manner, and particularly had an inhibition on Jurkats cells at G0/G1 phase; MTX had an inhibition on S phase. The stimulation of ConA and phorbol estersil+ionomycin obviously increased the expression of C

6、D3+CD71+ lymphocytes (P0.01); SINO at the concentrations of 1 and 0.5 mmol/L inhibited the expression of CD3+CD71+ lymphocytes after ConA stimulation, and SINO at the concentration of 1 mmol/L inhibited the expression of CD3+CD71+ lymphocytes after stimulation of phorbol estersil+ ionomycin (P0.05).

7、 Conclusion SINO can inhibit the activation and proliferation of T lymphocytes, and block the cells at G0/G1 phase. Its mechanism may be related with the downregulation of transferring receptor of T lymphocytes and with the decrease of intake of iron ion by the cells. Key words：SINOMENINE/pharmacolo

8、gy; ARTHRITIS,RHEUMATOID/TCD therapy; TLYMPHOCYTES; CELL CULTUREHPIAS1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)（同濟醫(yī)科大學千屏影像工程公司）；Cyt C 、Caspase3mRNA、Caspase9mRNA原位雜交試劑盒，由武漢博士德生物工程有限公司提供。 1.3 分組與給藥 將78只大鼠按隨機法分為假手術組6只，模型組、尼莫地平組、活血健腦膠囊組各24只，后3組再分為缺血2h及再灌注后6、12、24 h組，每組6只。于造模前3d，尼莫地平組灌胃給予尼莫地平10.8mgkg1d1，活血健腦膠囊組灌胃給予活血健腦膠囊混懸液1.8g

9、kg1d1 ，假手術組、模型組灌胃生理鹽水，均每天1次,共3d，各組最后1次給藥2h后造模，造模成功后2h拔出栓線進行再灌注，于再灌注后6、12、24h取材。 1.4 造模方法 所有大鼠均按Longa【】的方法栓塞右側大腦中動脈,將單股尼龍線的頭端0.5cm熱膨脹并打磨后，經(jīng)頸外動脈-頸總動脈-頸內動脈進入大腦中動脈起始部位，造成栓塞，于栓塞2h拔出栓線，形成缺血后再灌注，再灌注時間分別為6、12、24h。 1.5 指標與檢測方法 在2010倍的光鏡視野下，對Cyt C 染色陽性細胞進行統(tǒng)計，顯微鏡下胞漿或胞核有棕色顆粒者為陽性細胞。采用彩色病理圖文分析系統(tǒng)，測量Cyt C染色陽性細胞的灰度值，以各測量點的灰度值減去相