蛋白質(zhì)的檢測流程

1、實驗一 生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定教案一、實驗原理（1）鑒定實驗設(shè)計的理念：某些化學(xué)試劑 + 生物組織中有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。（2）具體原理：可溶性還原糖+ 斐林試劑磚紅色沉淀。脂肪小顆粒 + 蘇丹染液橘黃色小顆粒。蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑紫色反應(yīng)。二、目標(biāo)要求初步掌握鑒定生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。三、重點、難點1.重點初步掌握鑒定生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。通過實驗的操作和設(shè)計培養(yǎng)學(xué)生的動手能力，掌握探索實驗設(shè)計技巧，從而培養(yǎng)創(chuàng)新思維能力。2.難點根據(jù)此實驗方法、原理，設(shè)計實驗來鑒定常見食物的成分。四、實驗材料1.可溶性還原糖的鑒

2、定實驗:選擇含糖量較高、顏色為白色或近白色的植物組織，以蘋果、梨為最好。2.脂肪的鑒定實驗:選擇富含脂肪的種子，以花生種子為最好(實驗前浸泡3h4h)。3.蛋白質(zhì)的鑒定實驗:可用浸泡1d2d的黃豆種子(或用豆?jié){、或用雞蛋蛋白)。五、儀器、試劑1.儀器:剪刀,解剖刀,雙面刀片,試管,試管架,試管夾,大小燒杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精燈,三腳架,石棉網(wǎng),火柴,研缽,石英砂,紗布,載玻片,蓋玻片,毛筆,吸水紙,顯微鏡。2.試劑:斐林試劑(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；蘇丹染液；雙縮脲試劑； 體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液；蒸餾水。六、方法步驟(演示教學(xué)課件) 1.

3、制備試劑。2.可溶性還原糖的鑒定、方法、步驟。3.脂肪的鑒定、方法、步驟。4.蛋白質(zhì)的鑒定、方法、步驟。七、教學(xué)過程 新課引入：我們在化學(xué)中學(xué)習(xí)過物質(zhì)的鑒定，其原理是被鑒定的物質(zhì)與所用的化學(xué)試劑要么發(fā)生顏色反應(yīng)，要么產(chǎn)生沉淀，我們生物學(xué)上也采用此原理，在生物學(xué)中物質(zhì)鑒定的理念是：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。新課教學(xué)：（具體原理）可溶性還原糖+ 斐林試劑磚紅色沉淀。（水浴加熱）脂肪小顆粒 + 蘇丹染液橘黃色小顆粒。（要顯微鏡觀察）蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑紫色反應(yīng)。（要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液）教師提問：在我們高中生物中還學(xué)習(xí)過那些利用顏色反

4、應(yīng)鑒定物質(zhì)的？用到了那些化學(xué)試劑？由產(chǎn)生了那些特定的顏色呢？學(xué)生回答：略。如果回答不全教師補充：染色（質(zhì)）體+ 醋酸洋紅（或龍膽紫） 紅色（或紫色）淀粉+碘液藍色DNA+二苯胺試劑藍色（水浴加熱）大腸桿菌+伊紅-美藍產(chǎn)生紫色，略帶金屬光澤今天，我們學(xué)習(xí)鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。（一）、還原糖的鑒定1、還原糖的鑒定步驟: 選材： 蘋果：洗凈、去皮、切塊，取5g放如研缽中制備組織樣液 研磨成漿：加石英砂，加5 ml水研磨注入組織樣液2ml 過濾：將玻璃漏斗插入試管中，漏斗上墊一層紗布加斐林試劑：2ml（由斐林試劑甲液和乙液充分混合而成，不能分別加入）水浴加熱：煮沸2min觀察溶

5、液顏色變化：淺藍色棕色磚紅色。結(jié)論：還原糖與斐林試劑在加熱煮沸的過程中生成磚紅色沉淀無色藍色磚紅色加熱2min剛配制斐林試劑2ml組織樣液2ml開水 2、實驗成功的要點：還原糖的鑒定實驗:選擇含糖量較高、顏色為白色或近白色的植物組織，以蘋果、梨為最好。斐林試劑要兩液混合均勻且現(xiàn)配現(xiàn)用。斐林試劑的配制過程示意：斐林試劑按一定比例混合均勻斐林試劑甲液（ 0.1 g/ml的 NaOH 溶液）斐林試劑乙液（ 0.05 g/ml的 CuSO4 溶液）在鑒定尿液中是否含有葡萄糖時還能用其他那些鑒定方法？學(xué)生回答：還可以用斑氏試劑產(chǎn)生磚紅色沉淀；及糖尿試紙據(jù)糖的由少到多產(chǎn)生淺藍、淺綠、棕或深棕色。（二）、脂

6、肪的鑒定1、脂肪的鑒定步驟: 取材：花生種子（浸泡3-4h）,將子葉削成薄片 取理想薄片制片在薄片上滴2-3滴蘇丹染液去浮色制成臨時裝片觀察：先在低倍鏡下，找到材料的脂肪滴，然后，轉(zhuǎn)為高倍鏡觀察。結(jié)論：細胞中的圓形脂肪小顆粒已經(jīng)被染成橘黃色。2、實驗成功的要點：.脂肪的鑒定實驗:選擇富含脂肪的種子，以花生種子為最好(實驗前浸泡3h4h)。該試驗成功的關(guān)鍵是獲得只含有單層細胞理想薄片。滴蘇丹染液染液染色2-3min，時間不宜過長，以防細胞的其他部分被染色。（三）、蛋白質(zhì)的鑒定1、 蛋白質(zhì)的鑒定步驟：呈色反應(yīng)選材：卵清稀釋液或黃豆（浸泡1-2d） 豆?jié){ 濾液雙縮脲試劑B液4 5滴雙縮脲試劑A液2m

7、l組織樣液 （或蛋白稀釋液）2ml 無顏色變化紫色結(jié)論：蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應(yīng)。2、實驗成功的要點：蛋白質(zhì)的鑒定實驗:可用浸泡1d2d的黃豆種子(或用豆?jié){、或用雞蛋蛋白稀釋液)。雙縮脲試劑的使用，一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液)，再加入雙縮脲試劑B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液)。還可設(shè)計一只加底物的試管，不加雙縮脲試劑，進行空白對照，說明顏色反應(yīng)的引起是蛋白質(zhì)的存在與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)，而不是空氣的氧化引起。教學(xué)小結(jié)：1、斐林試劑和雙縮脲試劑的比較相同點：都由NaOH溶液和CuSO4溶液構(gòu)成；斐林試劑甲液和雙縮脲試劑A都為0.1g/mL NaOH

8、溶液。不同點：CuSO4溶液濃度不一樣：斐林試劑乙液為 0.05 g/mLCuSO4溶液，雙縮脲試劑 B為 0.01g/mLCuSO4溶液。配制比例不一樣。使用方法不一樣：斐林試劑是甲、乙液一起混合后再使用，雙縮脲試劑則是先向待鑒定材料加入A試劑搖勻后，再加入試劑B。鑒定的對象不一樣：斐林試劑鑒定的是還原糖，雙縮脲試劑鑒定的是蛋白質(zhì)。反應(yīng)本質(zhì)及顏色反應(yīng)不一樣。2、還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定之比較還原糖的鑒定脂肪的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定材料的選?。焊缓?，顏色為白色或近于白色富含脂肪富含蛋白質(zhì)材料的處理：去皮、研磨浸泡試劑的使用：甲液與乙液混合均勻后使用染色和洗浮色不宜過長先加A液再滴加B液反應(yīng)的本質(zhì)：

9、新制的Cu(OH)2溶液與CHO(還原糖的醛基)反應(yīng)堿性條件下Cu2+ 與肽鍵反應(yīng)3、蘇丹染液與蘇丹染液的比較都是用來鑒定脂肪。蘇丹染液更易溶于脂肪，所以染色更深，同時要求染色時間更短課后作業(yè)：基礎(chǔ)檢測1.可用于鑒定生物組織中還原糖的試劑是（ ）A.斐林試劑 B.雙縮脲試劑 C.蘇丹染液 D.蘇丹染液2.下列哪個實驗用到顯微鏡（ ）A.還原糖的鑒定 B.蛋白質(zhì)的鑒定C.脂肪的鑒定 D.淀粉的鑒定3.下列哪組試劑在使用過程中，必須經(jīng)過加熱( ) A.斐林試劑鑒定還原糖的過程中B.蘇丹和蘇丹染液在鑒定動物組織中的脂肪時C.雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時D.碘化鉀溶液鑒定淀粉時4.用斐林試劑鑒定還原糖時，溶

10、液顏色的變化過程為（ ）A.無色一磚紅色（沉淀） B.淺藍色一磚紅色（沉淀）C.淺藍色一藍色一磚紅色（沉淀） D.淺藍色一棕色一磚紅色（沉淀）5、用蘇丹染液對脂肪組織進行染色時，可用來沖洗浮色的藥品是( ) A.吸水紙 B.H C.50%的酒精 D.無水酒精6.用斐林試劑鑒定還原糖時，必須注意以下幾點：（1）被鑒定材料應(yīng)選擇含 較高，顏色為 的植物組織，以 為最好。（2）斐林試劑很不 ，必須 時再配制并立即使用。配制的方法是將4 5滴 滴入2m1 中。（3）鑒定反應(yīng)必須在 中進行。7.在鑒定花生種子細胞內(nèi)含脂肪的實驗過程中，應(yīng)先將花生子葉薄片用 染色，然后用 洗去 ，再制成 最后，鏡檢結(jié)果是

11、.8.鑒定豆?jié){中的蛋白質(zhì)時，應(yīng)先加入2m1 ，搖蕩均勻后，再加入34滴 ，再搖蕩均勻后，顏色變化是 .能力素質(zhì)提高9.下列物質(zhì)中，能被蘇丹IV染液染成紅色的是（ ）A.馬鈴薯塊莖 B.浸軟的蓖麻種子C.蛋清液 D.蘋果10下列可用于鑒定脂肪的實驗材料是( )A.蘋果 B.梨 C.卵白 D.花生種子11.對斐林試劑和雙縮脲試劑的配方，敘述不正確的是（ ）A.都含有NaOH溶液和CuSO4溶液B.斐林試劑的配制是將45滴0.05g/ml的CuSO4溶液滴入2ml 0.1gml的 NaOH溶液中即成C.雙縮脲試劑是將34滴0.01g/ml的CuSO4溶液滴入2ML0.1g/ml的 NaOH溶液中混合

12、而成的D.雙縮脲試劑含有兩種試劑：質(zhì)量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液和質(zhì)量濃度為0.O1g/ml的CuSO4溶液12鑒定蛋白質(zhì)樣品時加雙縮脲試劑的正確做法是( )A. 先加A液，混合后再加B液搖勻觀察 B. 先加B液，混合后再加A液搖勻觀察C.A、B液混合后加入，搖勻后觀察D.A、B液同時加入樣液，搖勻后觀察遷移與擴展13與硫酸銅溶液在堿性環(huán)境中反應(yīng)，生成紫色物質(zhì)的是( )A.淀粉 B.脂肪C.蛋白質(zhì) D.核酸14將面團包在紗布中在清水中搓洗，鑒定黏留在紗布上的黏稠物質(zhì)和洗出的白漿用的試劑分別是( )A.碘液、蘇丹溶液 B.雙縮脲試劑、碘液C.亞甲基藍溶液、蘇丹 D.碘液、斐林試劑15下列實驗中所用試劑錯誤的是（ ）A在觀察植物細胞有絲分裂實驗中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B在提取葉綠體色素實驗