趙海龍畢業(yè)論文修改1

1、本 科 畢 業(yè) 論 文 題 目：高粱葉枯病的室內(nèi)毒力測定 學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 專 業(yè)： 植物保護 年級： 2011 級 姓 名： 趙海龍 指導(dǎo)教師： 趙艷琴 完成日期： 2015年5月 目 錄 摘要1ABSTRACT2引言31 材料和方法31.1 供試材料31.2 室內(nèi)藥劑篩選及配制41.3 試驗方法52 結(jié)果與分析62.1 單劑抑制率的測定62.2 孢子抑制率及其顯著性分析82.3 毒力回歸方程的計算113 結(jié)論與討論12參考文獻13致謝14摘 要高粱葉枯病是高粱上一種真菌病害，本文主要是以高粱葉枯病為材料，試驗選用5種低毒殺菌劑，采用生長速率法和孢子萌發(fā)抑制法對常用的五種殺菌劑進行室內(nèi)毒力測

2、定。結(jié)果表明，50%異菌脲500倍液對兩種供試病菌的毒力最強，EC50值分別為4.98E-26、7.47E-02mg/L。50%多菌靈400倍液對高粱葉枯病菌的毒力僅次于異菌脲，55%烯酰·福美雙1200倍液的抑菌效果僅次于50%多菌靈，這3種藥劑都可作為防治2種病害的有效殺菌劑。而50%嘧菌酯400倍液和800倍液下該菌株表現(xiàn)出微弱的生長促進作用。關(guān)鍵詞：高粱葉枯??；殺菌劑；毒力測定；萌發(fā)抑制率AbstractSorghum leaf blight is a new kind of fungi diseases on sorghum.This paper is based on s

3、orghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity.The results show that,the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect ,it's EC50 values res

4、pectively 4.98E-26mg/L、7.47E-02mg/L .Carbendazim 50% 400 times liquid of sorghum leaf blight pathogen virulence after Iprodione. Thiram 55% 1200 times bacteriostatic effect after Carbendazim 50%.The three agents can be as effective fungicides for the prevention and control of two kinds of diseases.

5、And Azoxystrobin 50% ester 400 times and 800 times liquid under the strains showed weak growth promoting effect.Key Words:sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measurement；germination inhibition rate引 言高粱屬禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、蘆粟、茭子、木稷等，高粱是釀酒的重要原料，瀘州特曲、茅臺、竹葉青等名酒都是以高粱為主要原料釀造的【1】。高粱在中國的栽培面積很廣，其中山西地區(qū)是高粱的

6、主產(chǎn)量區(qū)，在內(nèi)蒙地區(qū)，高粱的的產(chǎn)量也占有很大的比重。隨著高粱大面積的種植，高粱病害種類高達30多種，其主要為害以黑穗病，葉斑病，炭疽病和大斑病為主【2】，高粱散黑穗病在我國各高粱產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)病，在華北、東北發(fā)病較重，近幾年來嚴重影響高粱產(chǎn)量【3】。高粱上的新病害也逐步增多，高粱葉枯病在一些地區(qū)也被發(fā)現(xiàn)。高粱葉枯病是由細極鏈格孢（Alternaria tenuissima）引起的真菌性病害，屬于半知菌亞門半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬，鏈格孢屬是全球分布最廣，經(jīng)濟上重要的半知菌類真菌之一，其有性態(tài)在自然條件下難以見到，僅有十余種鏈格孢的有性態(tài)在實驗室條件下被發(fā)現(xiàn)；其菌絲黑色，大量存在于土壤、空氣和

7、作為培養(yǎng)料的各種有機質(zhì)上，其孢子通過空氣傳播【4】。由鏈格孢引起的病害一般都屬于流行性較強的病害。高粱葉枯病主要危害的是高粱的葉片，影響其光合作用，從而使高粱產(chǎn)量降低。在發(fā)病初期，高粱葉片上形成梭形斑，上面長有白色柱狀霉層，由于濕度的增大，在后發(fā)病期病斑的邊緣出現(xiàn)黃褐色輪紋。高粱葉枯病是高粱上一種新的病害，目前還沒有特效的防治藥劑，對此，本文采用菌絲生長速率法和孢子抑制率法對五種殺菌劑對于高粱葉枯病菌的室內(nèi)毒力進行研究，篩選出防治該病害有效藥劑，用來指導(dǎo)田間生產(chǎn)，從而提高產(chǎn)量，增加經(jīng)濟效益。1 材料和方法 1.1 供試材料1.1.1 供試菌種采集于內(nèi)蒙古通遼市內(nèi)蒙古民族大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗田，進行分

8、離純化【5】獲得兩個菌種：高粱葉枯2號菌種和高粱葉枯4號菌種，并保存于冷藏箱備用。1.1.2 供試藥劑及有效成分編 號藥劑名稱有效成分劑型防治對象生產(chǎn)廠家1異菌脲50%可濕性粉劑小麥赤霉病海南正業(yè)中農(nóng)高科技股份有限公司2多菌靈50%可濕性粉劑水果蔬菜等多種病害利民化工3烯酰·福美雙55%水分散粒劑霜霉病青島瀚生科技4中生菌素3%可濕性粉劑辣椒疫病利民化工5嘧菌酯50%可濕性粉劑黃瓜枯萎病陜西美邦農(nóng)藥1.1.3 培養(yǎng)基制備原料 本試驗均采用PDA培養(yǎng)基進行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)基配制原料包括馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g和蒸餾水1000ml。1.1.4 試驗主要儀器設(shè)備超凈工作臺，L

9、RHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱（上海賀德實驗設(shè)備有限公司），立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱（山東濰坊醫(yī)療器械廠），101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（江蘇省通州市通用科技儀器廠），萬分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器公司)，電子顯微鏡( 日本尼康公司)，高壓滅菌鍋（上海三申），酒精燈，培養(yǎng)皿，移液管，接種環(huán)，打孔器，直尺，錐形瓶，燒杯，攪拌棒，電磁爐，鑷子等。1.2 試驗室內(nèi)藥劑梯度調(diào)節(jié)及培養(yǎng)基的配制1.2.1 PDA培養(yǎng)基的制備按照PDA培養(yǎng)基的制備配方，配制1000ml培養(yǎng)基五組，每組分裝至3個三角瓶中，封裝完畢后，用高壓滅菌鍋121滅菌30min后取出冷卻備用。1.2.2 藥劑梯度調(diào)節(jié)及配制方案本試驗的每個藥劑

10、均設(shè)定五個梯度，一個對照，每個梯度三次重復(fù)。具體配制為：50%異菌脲可濕性粉劑配制500倍母液，配制成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%多菌靈可濕性粉劑配制400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；55%烯酰·福美雙水分散粒劑配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液；3%中生菌素可濕性粉劑配制成400倍母液，配制成400、600、800、1000、1200倍液；50%嘧菌酯可濕性粉劑配制400倍母液，配成400、800、1000、1200、1600倍液。1.3 試驗方法1.3.1 生長速率法本試驗需在超凈

11、工作臺上進行，并且試驗所用的培養(yǎng)皿和其他儀器都要放進干熱滅菌箱165滅菌1h，冷卻后取出備用。在無菌條件下，將上述配置好的藥劑取1ml放入9ml冷卻至約50的PDA培養(yǎng)基中混合均勻，倒入消毒滅菌的培養(yǎng)皿中制成帶藥的培養(yǎng)基平板，每個藥劑濃度重復(fù)3次。然后用直徑為5mm的打孔器，在試驗前將已經(jīng)培養(yǎng)好的高粱葉枯病2號菌種的菌落中打取直徑為5mm的菌餅，將菌餅分別接種在含不同濃度藥劑的PDA平板的中心,25下放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。另外，每個藥劑做一個對照處理，對照組取1ml無菌水放入9ml PDA培養(yǎng)基中混合，重復(fù)三次。（高粱葉枯病4號菌種采取同樣的方法）最后在培養(yǎng)的第2、4、6天分別調(diào)查病原菌菌絲生

12、長情況，并用十字交叉法測量其菌落直徑，記錄數(shù)據(jù)。菌落直徑抑制率=孢子抑制率=1.3.2 孢子數(shù)目法將培養(yǎng)5至6天的病原菌取出，在培養(yǎng)皿中滴加5L tween-20試劑和50L的蒸餾水，用玻璃棒攪拌，配制成均勻的孢子懸浮液，用球計數(shù)板記錄孢子數(shù)目。2 結(jié)果與分析2.1 單劑抑制率的測定根據(jù)實驗記錄的菌落直徑數(shù)據(jù)繪制表格，運用數(shù)據(jù)分析軟件計分析，對于高粱葉枯2號菌株，50%異菌脲抑制率范圍為82.3%-48.3%，其次為55%烯酰·福美雙，而抑制率最低的是50%嘧菌酯；進行顯著性分析的結(jié)果表示50%異菌脲500-2000倍液抑菌效果最好，都處于同一顯著水平，各倍液之間防效相同，但較其他藥

13、劑有差異。55%福美雙抑菌效果次于50%異菌脲，50%多菌靈、50%嘧菌酯、3%中生菌素及各倍液顯著水平較低，各藥劑之間存在差異，但不明顯。表1 五種藥劑各梯度對高粱葉枯2號菌株菌落生長平均速率及抑制藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)GLYK2顯著水平菌落生長平均速率抑制率0.05CK6.333350%異菌脲500倍液1.12220.8228A50%異菌脲1000倍液1.62780.7429A50%異菌脲1500倍液2.19440.6535A50%異菌脲2000倍液2.62780.5851A50%異菌脲2500倍液3.27220.4833ABCK9.138950%多菌靈400倍液4.45370.5127A

14、BCDE50%多菌靈600倍液6.29440.3112ABCDE50%多菌靈800倍液6.91850.2429ABCDE50%多菌靈1000倍液5.74260.3716BCDEF50%多菌靈1200倍液7.42780.1872ABCDECK12.055655%烯酰·福美雙400倍液6.96850.4219ABCDE55%烯酰·福美雙800倍液5.28520.5616ABC55%烯酰·福美雙1000倍液5.57960.5371ABCD55%烯酰·福美雙1200倍液4.94070.5901ABCD55%烯酰·福美雙1600倍液3.46110.712

15、9ABCDECK12.27783%中生菌素400倍液7.21110.4126GHK3%中生菌素600倍液8.39810.3159FGHK3%中生菌素800倍液9.54810.2223EFGH3%中生菌素1000倍液9.39070.2351EFGH3%中生菌素1200倍液9.56670.2208KCK10.277850%嘧菌酯400倍液8.49260.1736DEFGH50%嘧菌酯800倍液5.96390.4197HK50%嘧菌酯1000倍液6.41020.3763ABCDE50%嘧菌酯1200倍液5.54540.4604CDEFG50%嘧菌酯1600倍液7.56940.2635DEFG對于高粱

16、葉枯4號菌株，50%異菌脲抑制率范圍為68.1%-45.6%，其次為55%烯酰·福美雙，而50%嘧菌酯低倍液下對于該菌種的生長具有增效作用；進行顯著性分析的結(jié)果表示50%異菌脲500倍液抑菌效果最好，較藥劑有差異。55%福美雙抑菌效果次于50%異菌脲，50%嘧菌酯顯著水平最低，其抑菌效果最差。表2 五種藥劑各梯度對高粱葉枯4號菌株菌落生長平均速率及抑制率比較藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)GLYK4顯著水平菌落生長平均速率抑制率0.05CK7.166750%異菌脲500倍液2.28890.6806A50%異菌脲1000倍液2.96110.5868AB50%異菌脲1500倍液3.47780.51

17、47ABC50%異菌脲2000倍液2.92780.5914ABC50%異菌脲2500倍液3.90.4558ABCDCK8.666750%多菌靈400倍液4.60190.469EF50%多菌靈600倍液6.02040.3053EF50%多菌靈800倍液6.33520.269EF50%多菌靈1000倍液5.39810.3771EF50%多菌靈1200倍液6.75190.2209FCK10.305655%烯酰·福美雙400倍液5.97220.4204ABC55%烯酰·福美雙800倍液6.26850.3917ABCDE55%烯酰·福美雙1000倍液3.350.6749AB

18、CDE55%烯酰·福美雙1200倍液3.64070.6467BCDEF55%烯酰·福美雙1600倍液3.76110.635BCDEFCK12.22223%中生菌素400倍液6.22040.4911ABCDEF3%中生菌素600倍液8.62960.2939BCDEF3%中生菌素800倍液9.65560.2099CDEF3%中生菌素1000倍液9.67590.2083EF3%中生菌素1200倍液9.87220.1922KCK5.833350%嘧菌酯400倍液8.0648-0.3825K50%嘧菌酯800倍液8.7148-0.4939H50%嘧菌酯1000倍液5.29540.09

19、22G50%嘧菌酯1200倍液3.14170.4614F50%嘧菌酯1600倍液1.84720.6833EF2.2 孢子抑制率及其顯著性分析根據(jù)試驗記錄的孢子數(shù)量進行相對抑制率的分析和顯著水平分析，對于2號菌種，50%異菌脲的防效較其他殺菌劑高，其中50%異菌脲500倍液，孢子抑制效果最好；其次為50%異菌脲1500倍液，50%異菌脲2000倍液；顯著水平最低的為3%中生菌1200倍液，其防效表現(xiàn)為最差。表3 五種藥劑各梯度對高粱葉枯2號菌株孢子抑制率顯著性差異比較藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)孢子相對抑制率顯著水平0.010.053%中生菌素1200倍液0.8321gK50%嘧菌酯800倍液0.87

20、54fgHK3%中生菌素400倍液0.8016efgGHK3%中生菌素600倍液0.8495defgFGHK3%中生菌素800倍液0.8567cdefgEFGH50%嘧菌酯1600倍液0.8431cdefgdefgh3%中生菌素1000倍液0.8852cdefgEFGH50%嘧菌酯400倍液0.8946bcdefDEFGH50%嘧菌酯1200倍液0.8846abcdefCDEFG50%多菌靈1000倍液0.9089abcdefBCDEF50%嘧菌酯1000倍液0.8992abcdeABCDE50%多菌靈1200倍液0.9115abcdeABCDE50%多菌靈800倍液0.9123abcdeAB

21、CDE50%多菌靈400倍液0.9216abcdABCDE55%烯酰·福美雙1600倍液0.9253abcdABCDE50%多菌靈600倍液0.9311abcdABCDE55%烯酰·福美雙400倍液0.9564abcdABCDE55%烯酰·福美雙1000倍液0.9434abcABCD55%烯酰·福美雙1200倍液0.9658abcABCD55%烯酰·福美雙800倍液0.9684abcABC50%異菌脲2500倍液0.9838abAB50%異菌脲2000倍液0.9844aA50%異菌脲1500倍液0.9857aA50%異菌脲1000倍液0.986

22、4aAB50%異菌脲500倍液0.9875aA對于4號菌種，50%異菌脲500倍液顯著水平最高，其防效最好，50%異菌脲1000倍液僅次之。其他藥劑之間都存在著差異性；顯著水平最低的為50%嘧菌酯，其抑制效果最差。3%中生菌素，55%福美雙和50%多菌靈之間都存在著差異，防治效果都不同。表4 五種藥劑各梯度對高粱葉枯4號菌株孢子抑制率顯著性差異比較藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)孢子相對抑制率顯著水平0.010.0550%嘧菌酯400倍液-0.3529hK50%嘧菌酯800倍液-0.4165gH50%嘧菌酯1000倍液0.1521fG3%中生菌素1200倍液0.8105hK50%嘧菌酯1600倍液0.8

23、452efEF50%多菌靈1200倍液0.7986eF50%嘧菌酯1200倍液0.5498deF50%多菌靈600倍液0.8213cdeEF50%多菌靈800倍液0.8252cdeEF50%多菌靈1000倍液0.8123cdeEF50%多菌靈400倍液0.8547bcdeEF3%中生菌素1000倍液0.8426bcdeEF3%中生菌素800倍液0.8245bcdeCDEF3%中生菌素600倍液0.8459abcdeBCDEF55%烯酰·福美雙1200倍液0.8947abcdeBCDEF55%烯酰·福美雙1600倍液0.8959abcdeBCDEF3%中生菌素400倍液0.8

24、989abcdeABCDEF55%烯酰·福美雙1000倍液0.9018abcdeABCDE55%烯酰·福美雙800倍液0.9125abcdeABCDE50%異菌脲2500倍液0.9431abcdABCD55%烯酰·福美雙400倍液0.9541abcABC50%異菌脲2000倍液0.9689abcABC50%異菌脲1500倍液0.9657abABC50%異菌脲1000倍液0.9798abAB50%異菌脲500倍液0.9875aA2.3 毒力回歸方程的計算最后對5種殺菌劑進行毒力回歸方程的計算，對于高粱葉枯2號菌株，五種殺菌劑的EC50高低排列為:50%異菌脲可濕性粉

25、劑<50%多菌靈可濕性粉劑<55%烯酰·福美雙水分散粒劑<50%嘧菌酯可濕性粉劑<3%中生菌素可濕性粉劑，50%異菌脲最靈敏，因此抑菌效果最好，而3%中生菌素EC50很大，且r值是負值，濃度與抑制率表現(xiàn)負相關(guān)，其抑菌效果最差。表5 五種殺菌劑對高粱葉枯2號菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50（mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50%多菌靈可濕性粉劑0.69y=5.68+0.23x1.09E-0355%烯酰·福美雙水分散粒劑0.51y=5.65+0.34x1.23E-023%中生菌素可濕性粉劑-0

26、.594.27E+05 50%嘧菌酯可濕性粉劑0.70y=5.29+0.29x9.88E-02對于高粱葉枯4號菌株，50%異菌脲可濕性粉劑的EC50為7.47E-02，表現(xiàn)為最靈敏，抑菌效果最好，而50%嘧菌酯可濕性粉劑的EC50非常，抑菌效果表現(xiàn)為最差。表6 五種殺菌劑對高粱葉枯4號菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50（mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.96y=5.55+0.49x7.47E-02 50%多菌靈可濕性粉劑0.94y=4.65+0.41x7.21E+0055%烯酰·福美雙水分散粒劑0.90y=4.44+0.64x7.60E+003%中生菌素可濕性粉劑0.89

27、5.15E+01 50%嘧菌酯可濕性粉劑-0.629.35E+023 結(jié)論與討論本文選用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用來防治真菌病害常用的5種殺菌劑對高粱葉枯病進行室內(nèi)的藥劑篩選和毒力測定，這5種殺菌劑對于鏈格孢的病害都具有很好的防治作用，并且具有不同程度的抑制作用，通過選取不同梯度的藥劑用于試驗，計算菌絲的生長抑制率和孢子抑制率，最終結(jié)合毒力回歸方程，結(jié)果表明50%異菌脲可濕性粉劑對于該病菌的防治效果表現(xiàn)最好，尤其是在400-100倍液之間，其防治效果最高。另外，55%烯酰·福美雙水分散粒劑和50%多菌靈對于高粱葉枯病的防治也有一定的效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微；而50%嘧菌酯在這幾個方法中

28、得出的結(jié)果均是對病害的發(fā)生有促進作用，因此在大田防治高粱葉枯病害時，盡量不要用此藥劑。目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病為害最為嚴重，在農(nóng)業(yè)防治中目前還沒有特效的藥劑，一般使用的化學(xué)藥劑多為光譜性殺菌劑或是一些新型生物源藥劑。本文最終篩選出的藥劑異菌脲屬于低毒類內(nèi)吸性殺菌劑，對于蔬菜水果上的霜霉病，葉斑病都有很好的防治效果，另外，異菌脲對于玉米交鏈格孢葉枯病的防治效果也比較好，與高粱細極鏈格孢葉枯病很相似，張希福教授曾對玉米葉枯病做過相關(guān)的試驗，其結(jié)果表示退菌特、撲海因、代森錳鋅、異菌脲等對病菌分生孢子萌發(fā)有較強的抑制作用【6】 ，因此對于退菌特、撲海因、代森錳鋅是否同樣適用于高粱葉枯病還有待于下一步的試驗。雖然此試驗結(jié)果表明50%異菌脲是防治高粱葉枯病的最佳藥劑，但是此試驗屬于室內(nèi)的藥