超聲波提取野菊花總黃酮及鑒別

1、超聲波提取野菊花總黃酮及鑒別 作者：趙進(jìn)，羅建華，劉嬌，張麗丹，蒙春越， 黃鎖義【摘要】 目的為充分利用野菊花植物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討野菊花總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從野菊花中提取黃酮類(lèi)物質(zhì)，對(duì)所提取的黃酮類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測(cè)定含量。結(jié)果測(cè)得樣品中總黃酮的含量C=0.659 9 mg/ml，回收率為101.1%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過(guò)程，無(wú)任何污染，是提取野菊花黃酮類(lèi)物質(zhì)的有效途徑。 【關(guān)鍵詞】 超聲波提取； 野菊花； 總黃酮； 鑒別bstract：ObjectiveTo make use of the resources of Ch

2、rysanthermum indicum L. ,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of Chrysanthermum indicum L. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Chrysanthermum indicum L. with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check t

3、he flavanone of Chrysanthermum indicum L.ResultsThe density of the total flavanone of Chrysanthermum indicum L. was C=0.6599 mg/ml and the rate of recovery was 101.1%. The outcome and the purity of the flavanone were all very high. ConclusionThis method is a purely physical process and has not any p

4、ollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Chrysanthermum indicum L.Key words：Ultrasonic wave treatment; Chrysanthermum indicum L.； Total flavanone； Identification 野菊花Chrysanthermum indicum L.為菊科多年生草本植物菊花腦的頭狀花序。論文論文參考網(wǎng)每到秋季花盛開(kāi)時(shí)采收，經(jīng)曬干或烘干后，即可入藥。野菊花晚秋初冬開(kāi)花，有黃、白、紫等色，分布于田野，也有人工栽培的。民間多在秋季開(kāi)花時(shí)采后

5、涼干或曬干備用。野菊花可泡茶飲用，但更多的是藥用1。中醫(yī)認(rèn)為1，野菊花性涼，有疏風(fēng)清熱、解毒消腫、健腦明目等功效，可治療風(fēng)熱感冒、肺炎、鼻炎、高血壓病、支氣管炎、咽喉腫痛、目赤模糊、淋巴腺炎、癰癤疔毒、濕疹、皮膚瘙癢、口瘡、丹毒等癥?，F(xiàn)代研究證明1：野菊花是中草藥中的“廣譜抗生素”，對(duì)多數(shù)皮膚真菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌和流感病毒等均有較強(qiáng)的抑制作用。近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)野菊花含有豐富的黃酮類(lèi)化合物，對(duì)擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈有良好作用,可用于治療冠心病、高血壓病。其主要成分為黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有清熱解毒、降血壓、抗病毒、抑制血小板凝聚等功能，野菊花提取物制成的栓劑，應(yīng)用于臨床對(duì)慢性盆腔炎、宮頸糜爛、慢性

6、前列腺炎等有顯著療效2。因此，對(duì)其研究也逐漸備受人們的關(guān)注。 有文獻(xiàn)報(bào)道野菊花中總黃酮的提取方法采用正交實(shí)驗(yàn)2、乙醇提取炮制3，4等方法，但是這些方法的提取效率仍然較低。近年來(lái)，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類(lèi)、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道57，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對(duì)提取成分的影響6。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取野菊花中黃酮類(lèi)物質(zhì)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本文報(bào)道用超聲波提取野菊花總黃酮及鑒

7、別。1 儀器與試劑1.1 儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司）；UV?755B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；ZF?I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB?III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。1.2 試劑95%乙醇；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；乙酸鎂AR；鎂粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；廣西百色市人民菜市市售新鮮野菊花。2 方法與結(jié)果2.1 總黃酮成分提取取新鮮野菊花，烘干，粉碎。稱(chēng)取野菊花粉末約6 g，加8

8、0 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml 95 %乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25 ml左右為止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2 測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定野菊花中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見(jiàn)光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3 定量實(shí)驗(yàn)-總黃酮的含量測(cè)定2.3.1 波長(zhǎng)的選擇取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700 nm波長(zhǎng)范圍測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于

9、510 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故測(cè)定時(shí)選用此波長(zhǎng)。論文論文參考網(wǎng) 2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，于510 nm處測(cè)吸光度。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定蘆丁對(duì)照液吸光度（略） 根據(jù)上表得回歸方程：A=-0.031 10+1

10、3.52C，r=0.999 9。2.3.3 提取物含量的測(cè)定精密吸取樣品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定吸光度A=0.415，根據(jù)回歸方程：A=-0.031 10+13.52C，計(jì)算樣品中總黃酮的含量C=0.659 9 mg/ml。2.3.4 回收實(shí)驗(yàn)精密量取樣品液2.00 ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前樣品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，求出回收率為101.1% 。2.4 定性實(shí)驗(yàn)-總黃酮的鑒別2.4.1 顏色反應(yīng) 紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。 濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶

11、液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?0 s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。 三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。 乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。 鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.4.2 紙層析取樣品溶液10 l點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415（體積比）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)5 h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見(jiàn)熒光斑點(diǎn)。3 討論3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝

12、簡(jiǎn)單，回收率為101.1%，提取效率高于傳統(tǒng)方法，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類(lèi)物質(zhì)其純度和產(chǎn)率均較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過(guò)程，無(wú)任何污染，是一條理想的提取黃酮類(lèi)物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。3.2 黃酮類(lèi)化合物是一大類(lèi)天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價(jià)值。在自然界中最常見(jiàn)的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類(lèi)等8。天然來(lái)源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過(guò)血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、

13、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其它臟器細(xì)胞的功能。 黃酮類(lèi)化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用914。近年來(lái)，世界上掀起了植物藥開(kāi)發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類(lèi)化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目，野菊花分布廣泛，本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，野菊花中含有較為豐富的黃酮。因此，野菊花具有廣泛開(kāi)發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用，加強(qiáng)資源開(kāi)發(fā)。【參考文獻(xiàn)】 1陶昌華 .夏季良藥：野菊花J.醫(yī)藥與保健，2004，12(8)：38.2阮 俊，黃永林. 野菊花總黃酮提取方法研究J

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