15 島津LC2030高效液相色譜儀使用維修保養(yǎng)操作規(guī)程

1、1目的：建立島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)操作規(guī)程，確保儀器的正確操作。2范圍：本規(guī)程適用于島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養(yǎng)。3責(zé)任：化驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，化驗(yàn)員。4內(nèi)容：4.1概述本系統(tǒng)由四元低壓梯度系統(tǒng)輸送泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、UV檢測(cè)器、柱溫箱、LabSolutions色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成。4.2原理儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱固定相內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通

2、過檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。4.3技術(shù)參數(shù)流量設(shè)定范圍0.000110 mL/min流速精度±1% 或 ±2µL/min最大操作壓力44MPa進(jìn)樣數(shù)216個(gè)樣品外形尺寸mm410×500×605mm波長重現(xiàn)性±0.1nm溫控精度±0.1波長范圍190700nm噪聲±2.5×10-6AU漂移100×10-6AU/h4.4設(shè)備安裝位置設(shè)備名稱放置房間LC-2030型高效液相色譜儀精密儀器室4.5操作方法準(zhǔn)備.1準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45µ

3、m濾膜過濾，超聲脫氣2030min。.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）。.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45µm濾膜過濾。.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。開機(jī)接通電源，依次開啟高效液相色譜儀開關(guān)，電腦主機(jī)、顯示器，待高效液相色譜儀自檢結(jié)束后，打開色譜工作站。等度洗脫.1排氣打開Purge，點(diǎn)擊程序中的“自動(dòng)排氣”，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行排氣，若使用多通道，根據(jù)實(shí)際需要選擇通道進(jìn)行排氣；如果不出液，用針頭接上“p”的管路，進(jìn)行抽氣，至到有液體從“Purge”這個(gè)管路排出。.2參數(shù)設(shè)定.2.1波長設(shè)定：在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間程序視

4、圖中檢測(cè)器A，選擇波長(1)輸入所需波長。.2.2流速設(shè)定：在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間程序視圖中泵，選擇泵總流量，輸入所需流速。.2.3流動(dòng)相比例設(shè)定：在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間程序中泵，選擇所用泵，輸入泵項(xiàng)下所需的濃度比例。.3設(shè)置好后，點(diǎn)擊“下載”系統(tǒng)自動(dòng)按照設(shè)置好的方法，進(jìn)行走基線。.4基線平穩(wěn)后，方可進(jìn)樣?？梢赃M(jìn)行單次分析或批處理分析。.4.1單次分析:單擊數(shù)據(jù)采集窗口助手欄上的“單次開始”圖標(biāo)；設(shè)置“樣品名”“方法文件”“數(shù)據(jù)文件”“樣品瓶”“樣品架”“進(jìn)樣體積”等信息；點(diǎn)擊確定，系統(tǒng)即自動(dòng)進(jìn)行單次分析。.4.2批處理分析:單擊數(shù)據(jù)采集窗口助手欄上的“批處理”圖標(biāo)；從文件菜單中選擇新建批處理文件

5、；設(shè)置“樣品名”“方法文件”“數(shù)據(jù)文件”“樣品瓶”“樣品架”“進(jìn)樣體積”等信息；點(diǎn)擊保存，保存批處理文件；點(diǎn)擊批處理助手欄中的“批處理開始”，系統(tǒng)即執(zhí)行批處理程序。梯度洗脫.1排氣:打開Purge，點(diǎn)擊程序中的“自動(dòng)排氣”，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)行排氣，若使用多通道或梯度，根據(jù)實(shí)際需要選擇通道進(jìn)行排氣；如果不出液，用針頭接上“p”的管路，進(jìn)行抽氣，至到有液體從“Purge”這個(gè)管路排出。.2參數(shù)設(shè)定.2.1波長設(shè)定：在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間程序視圖中檢測(cè)器A，選擇波長(1)輸入所需波長。.2.2流速設(shè)定：在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間程序視圖中泵，選擇泵總流量，輸入所需流速。.3 梯度洗脫設(shè)置程序:在數(shù)據(jù)采集窗口的時(shí)間

6、程序視圖，選擇時(shí)間程序圖標(biāo)中的LC時(shí)間程序；設(shè)置程序洗脫的時(shí)間及流動(dòng)相比例；設(shè)置完后應(yīng)以controllerstop（控制儀器停止）為結(jié)尾；點(diǎn)擊“時(shí)間程序”查看設(shè)置時(shí)間程序是否正確；點(diǎn)擊“泵”選擇泵，調(diào)節(jié)壓力限制(最大壓力設(shè)為20.0MPa)；.4 設(shè)置好后，點(diǎn)擊“下載”系統(tǒng)自動(dòng)按照設(shè)置好的方法，進(jìn)行走基線。.5 基線平穩(wěn)后，方可進(jìn)樣?？梢赃M(jìn)行單次分析或批處理分析。.5.1單次分析:單擊LC實(shí)時(shí)分析窗口助手欄上的“單次開始”圖標(biāo)；設(shè)置“樣品名”“方法文件”“數(shù)據(jù)文件”“樣品瓶”“樣品架”“進(jìn)樣體積”等信息；點(diǎn)擊確定，系統(tǒng)即自動(dòng)進(jìn)行單次分析。.5.2批處理分析:單擊數(shù)據(jù)采集窗口助手欄上的“批處理

7、”圖標(biāo)；從文件菜單中選擇新建批處理文件；設(shè)置“樣品名”“方法文件”“數(shù)據(jù)文件”“樣品瓶”“樣品架”“進(jìn)樣體積”等信息；點(diǎn)擊保存，保存批處理文件；點(diǎn)擊批處理助手欄中的“批處理開始”，系統(tǒng)即執(zhí)行批處理程序。泵的清洗 檢測(cè)完畢后，如流動(dòng)相無鹽、酸及緩沖液，可直接用甲醇或乙腈沖洗30分鐘即可，如流動(dòng)相含有鹽、酸及緩沖液，先用甲醇:水=10:90沖流30分鐘，再用甲醇沖洗30分鐘即可。 樣品測(cè)試完畢后，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法如下：.1點(diǎn)擊“LabSolutions”中的再解析圖標(biāo)，LC再解析開始；.2單擊再解析助手欄中的LC數(shù)據(jù)分析圖標(biāo)，出現(xiàn)LC數(shù)據(jù)分析窗口；.3選擇文件菜單中的打開數(shù)據(jù)文件，然后選擇與測(cè)量

8、的數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)文件打開；.4單擊助手欄中的向?qū)D標(biāo)，出現(xiàn)化合物向?qū)В?5請(qǐng)確保設(shè)置了正確的積分參數(shù)，然后單擊下一步；.6記錄要識(shí)別的峰的保留時(shí)間，然后單擊下一步；.7指定定量計(jì)算方法和校準(zhǔn)曲線類型，然后單擊下一步；.8設(shè)置識(shí)別的方法，然后單擊下一步；.9提供化合物表的詳細(xì)設(shè)置，然后單擊完成；.10單擊LC數(shù)據(jù)助手欄中的應(yīng)用到方法圖標(biāo)；.11命名方法文件并單擊保存；.12單擊確定而不進(jìn)行任何更改；.13單擊再解析助手欄中的校準(zhǔn)圖標(biāo)；.14打開用于生成校準(zhǔn)曲線的方法文件；.15拖入需要作校準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)，即得出校準(zhǔn)曲線。使用校準(zhǔn)曲線計(jì)算數(shù)據(jù)濃度.1選擇文件菜單中的打開數(shù)據(jù)文件，然后指定數(shù)據(jù)文件名；

9、.2選擇文件菜單中的加載方法參數(shù)，然后指定方法文件名，出現(xiàn)方法參數(shù)屏幕；.3使用方法文件中的校準(zhǔn)曲線計(jì)算數(shù)據(jù)的濃度。出具報(bào)告.1根據(jù)需要設(shè)置相應(yīng)的報(bào)告格式；.2把測(cè)定的數(shù)據(jù)拖入設(shè)置好的報(bào)告模塊中，即得報(bào)告。4.5.9關(guān)機(jī)全部分析完畢后，先關(guān)檢測(cè)器和柱溫箱電源，再用適宜的溶劑清洗色譜系統(tǒng)。依次關(guān)閉系統(tǒng)控制器、泵和微機(jī)電源，拔下各插頭，做好使用記錄。4.6泵的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性，必須按照下列注意事項(xiàng)進(jìn)行操作：.1防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒，而常用的方法是濾過，可

10、采用微孔濾膜（0.2µm或0.45µm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。.2流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在柱內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入加入少量甲醇或乙腈和純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇水）。.3泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封

11、環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。.4輸液泵的工作壓力決不要超過規(guī)定的最高壓力，否則會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。.5流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性如果有大量氣泡，泵就無法正常工作。如果輸液泵產(chǎn)生故障，須查明原因，采取相應(yīng)措施排除故障。.1沒有流動(dòng)相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。.2壓力和流量不穩(wěn)。原因可能是氣泡，須要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，進(jìn)入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠?/p>

12、堵塞，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⒓啚V棒浸入稀酸內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。.3壓力過高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。關(guān)于試劑.1試劑類別：有機(jī)溶劑、無機(jī)化合物、水.2試劑的要求：.2.1有機(jī)溶劑的級(jí)別優(yōu)級(jí)純以上專用試劑。.2.2無機(jī)化合物要求分析純以上。.2.3水要求是去離子純凈水。流動(dòng)相.1無氣泡，通過超聲脫氣，通氦氣等方法進(jìn)行脫氣。.2純凈無雜質(zhì)，常用方法為用0.45µm微孔過濾膜進(jìn)行過濾。色譜柱的注意事項(xiàng).1壓力：注意每根柱的耐壓（最大使用壓力）。.2pH的范圍：不同柱子的pH

13、值范圍有所不同。.3清洗：柱子需要必要的清洗，請(qǐng)用戶參考柱子的說明書。.4保存：長時(shí)間不使用柱子時(shí)需要用合適的試劑進(jìn)行保存，請(qǐng)參考柱子的說明書。關(guān)于吸濾過濾器堵塞.1現(xiàn)象：塞吸現(xiàn)象、管路中不斷產(chǎn)生氣泡.2處理方式：將吸濾頭1從溶劑管中拔出，放在正己烷或稀硝酸（一般10%中超聲清洗。在線過濾器堵塞.1現(xiàn)象：不連接柱子及管路、混合器（松開泵進(jìn)混合器或柱子的管路接頭），設(shè)定泵流速為1ml/min，泵壓力大于0.3MPa，說明在線過濾器堵塞。.2處理方式：一般建議用戶更換新的過濾器，也可以將在線過濾器拆下，用稀硝酸（濃度小于10%），進(jìn)行超聲清洗。壓力波動(dòng)的原因及處理方法.1產(chǎn)生波動(dòng)的原因：有氣泡；密

14、封圈有磨損，產(chǎn)生微量的泄液；進(jìn)口單向閥中有異物（較常見）；在線過濾器，管路，柱子進(jìn)口處有鹽析出或雜物；.2處理方法：流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，排除流路中的氣泡；更換密封圈； 清洗進(jìn)出口單向閥，將單向閥置于燒杯中，用異丙醇進(jìn)行超聲清洗；檢查并清洗過濾器及流路。引起柱壓升高的原因.1色譜柱長時(shí)間使用后用戶發(fā)現(xiàn)柱壓比以往要高出許多，造成此情況可能由以下幾個(gè)因素引起。在線過濾器堵；高壓混合器堵；進(jìn)樣器堵；流路中部分細(xì)管堵； 流通池堵；柱子內(nèi)部吸附樣品產(chǎn)生堵。.2確認(rèn)方法：進(jìn)行分段檢測(cè)，確認(rèn)的確是柱子壓力高還是以上5點(diǎn)原因中某個(gè)引起的。進(jìn)樣峰分叉的原因.1流路及柱子等沒有做任何改變的情況下，分析樣品時(shí)，被檢測(cè)峰產(chǎn)

15、生分叉，則說明保護(hù)柱或分析柱柱效下降，需再生保護(hù)柱或分析柱。.2柱的出口到檢測(cè)池的管路偏長或管路內(nèi)徑寬所致（常用內(nèi)徑0.3mm以下）,導(dǎo)致樣品擴(kuò)散,造成峰分叉。什么情況下需更換D2Lamp（氘燈）.1顯示D2LampERROR時(shí)，一般情況下認(rèn)為氘燈不良需更換。.2氘燈超過使用時(shí)間（理論為2000小時(shí)），需要更換氘燈。造成檢測(cè)池能量低的原因.1氘燈使用時(shí)間過長（大于2000小時(shí)），燈老化所致。.2光路系統(tǒng)受到污染或老化。說明：檢測(cè)池能量高低以參比池為準(zhǔn)。 檢測(cè)池中有氣泡如何排除一般情況下，很小的氣泡會(huì)停留在檢測(cè)池中，所以需要在池管路出口1處加一個(gè)背壓管，池中氣泡不易在池中產(chǎn)生。（加背壓：出口處加上一段阻尼管增加壓力）如何清洗流通池一般情況下，請(qǐng)用戶不要將池拆散，而是用儀器附帶的工具進(jìn)行清洗。常用流程：水-甲醇-異丙醇-甲醇，或再用稀硝酸沖洗池流路?；€漂移，噪音增大的原因。.1所用試劑不純.2整個(gè)流路系統(tǒng)不干凈.3流動(dòng)池污染.4氘燈使用時(shí)間過長.5電壓不穩(wěn)，或者有環(huán)境干擾.6柱子污染等因素梯度洗脫時(shí)可能產(chǎn)生的干擾峰在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于溶劑的變化，導(dǎo)致吸光度背景值的該改變。所以會(huì)產(chǎn)生基線上下波動(dòng)，這是正?，F(xiàn)象。由于不斷的洗脫，特別是水及無機(jī)鹽混合的流路，流過柱子后部分雜質(zhì)被柱子吸附，隨著體系洗脫