醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)-遺傳病的診斷

1、第十四章第十四章 遺傳病的診斷遺傳病的診斷遺傳病的診斷遺傳病的診斷 概念：臨床醫(yī)生根據(jù)患者癥狀、體征以概念：臨床醫(yī)生根據(jù)患者癥狀、體征以及各種輔助檢查結(jié)果并結(jié)合遺傳學(xué)分析，及各種輔助檢查結(jié)果并結(jié)合遺傳學(xué)分析，從而確認(rèn)是否患有某種遺傳病并判斷其遺從而確認(rèn)是否患有某種遺傳病并判斷其遺傳方式及遺傳規(guī)律。傳方式及遺傳規(guī)律。根據(jù)診斷時(shí)期的不同，可分為：根據(jù)診斷時(shí)期的不同，可分為：現(xiàn)癥患者診斷現(xiàn)癥患者診斷癥狀前診斷癥狀前診斷產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷 新分支：植入前診斷新分支：植入前診斷 遺傳病的診斷遺傳病的診斷診斷水平：診斷水平：臨床診斷臨床診斷細(xì)胞學(xué)診斷細(xì)胞學(xué)診斷蛋白質(zhì)水平診斷蛋白質(zhì)水平診斷基因診斷基因診斷遺傳

2、病的診斷遺傳病的診斷第一節(jié)第一節(jié) 遺傳病的臨床診斷遺傳病的臨床診斷家族史、婚姻史、生育史、家族史、婚姻史、生育史、 疾病的始發(fā)年齡、病程特點(diǎn)疾病的始發(fā)年齡、病程特點(diǎn)綜合分析，初步確定是否為遺傳病，綜合分析，初步確定是否為遺傳病，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步檢查確診。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步檢查確診。第一節(jié)第一節(jié) 遺傳病的臨床診斷遺傳病的臨床診斷二、癥狀與體征二、癥狀與體征 遺傳病和某些普通疾病的癥狀與體征是有遺傳病和某些普通疾病的癥狀與體征是有共性的，但也有其特有的臨床表現(xiàn)，甚至形共性的，但也有其特有的臨床表現(xiàn)，甚至形成成特異性癥候群特異性癥候群。得出對(duì)疾病的初步印象，。得出對(duì)疾病的初步印象，為進(jìn)一步選擇其他檢查提供幫助

3、。為進(jìn)一步選擇其他檢查提供幫助。特異性癥候群特異性癥候群智力發(fā)育不全智力發(fā)育不全毛發(fā)黃毛發(fā)黃腐臭味（尿液、汗液）腐臭味（尿液、汗液）苯丙酮尿征？苯丙酮尿征？副性征發(fā)育不良副性征發(fā)育不良原發(fā)性閉經(jīng)原發(fā)性閉經(jīng)身體矮小身體矮小 肘外翻肘外翻常見染色體病伴隨體征常見染色體病伴隨體征單憑癥狀和體征不能準(zhǔn)確診斷，但可得出疾病初步單憑癥狀和體征不能準(zhǔn)確診斷，但可得出疾病初步印象，為進(jìn)一步選擇其他檢查提供幫助。印象，為進(jìn)一步選擇其他檢查提供幫助。第一節(jié)第一節(jié) 遺傳病的臨床診斷遺傳病的臨床診斷二、癥狀與體征二、癥狀與體征三、系譜分析三、系譜分析繪制系譜應(yīng)注意的事項(xiàng)繪制系譜應(yīng)注意的事項(xiàng)系統(tǒng)、完整系統(tǒng)、完整去偽存真

4、去偽存真注意新基因突變注意新基因突變?nèi)⑾底V分析三、系譜分析系譜分析中要注意系譜分析中要注意孟德爾遺傳病孟德爾遺傳病非孟德爾遺傳病非孟德爾遺傳病具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病（一）（一）孟德爾式遺傳病孟德爾式遺傳?。ǘ┓牵ǘ┓敲系聽柺竭z傳病孟德爾式遺傳病( (三三) )具有特殊遺傳方式的疾病具有特殊遺傳方式的疾病( (三三) )具有特殊遺傳方式的疾病具有特殊遺傳方式的疾病第二節(jié)第二節(jié) 遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷一、染色體檢查一、染色體檢查核型分析核型分析染色體檢查的適應(yīng)征：染色體檢查的適應(yīng)征： v智能發(fā)育不全、生長(zhǎng)遲緩或伴有其它先天畸形者智能發(fā)育不全、生長(zhǎng)遲緩或

5、伴有其它先天畸形者v夫婦中有染色體異常，如平衡易位、嵌合體等夫婦中有染色體異常，如平衡易位、嵌合體等v家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異?；蛳忍旎蝹€(gè)體家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異常或先天畸形個(gè)體v多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫v原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者v3434歲以上的高齡孕婦歲以上的高齡孕婦v有兩性內(nèi)外生殖器畸形者有兩性內(nèi)外生殖器畸形者第二節(jié)第二節(jié) 遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷一、染色體檢查一、染色體檢查核型分析核型分析二、性染色質(zhì)檢查二、性染色質(zhì)檢查vX X染色質(zhì)、染色質(zhì)、Y Y染色質(zhì)：染色質(zhì)： 方法簡(jiǎn)單，可鑒別胎兒性別以助于方法簡(jiǎn)單，可鑒別胎兒性別以助于X X連

6、鎖遺傳病診斷；連鎖遺傳病診斷；協(xié)助診斷兩性畸形或性染色體數(shù)目異常疾病診斷或協(xié)助診斷兩性畸形或性染色體數(shù)目異常疾病診斷或產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷v標(biāo)本來源標(biāo)本來源 發(fā)根鞘細(xì)胞、皮膚或口腔上皮細(xì)胞、女性的陰道上發(fā)根鞘細(xì)胞、皮膚或口腔上皮細(xì)胞、女性的陰道上皮細(xì)胞、也可取自絨毛和羊水的胎兒脫落細(xì)胞。皮細(xì)胞、也可取自絨毛和羊水的胎兒脫落細(xì)胞。第二節(jié)第二節(jié) 遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷一、染色體檢查一、染色體檢查核型分析核型分析二、性染色質(zhì)檢查二、性染色質(zhì)檢查第二節(jié)第二節(jié) 遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷遺傳病的細(xì)胞學(xué)診斷一、染色體檢查一、染色體檢查核型分析核型分析二、性染色質(zhì)檢查二、性染色質(zhì)檢查v 應(yīng)用熒光素標(biāo)記的應(yīng)

7、用熒光素標(biāo)記的DNADNA探針與標(biāo)本進(jìn)行探針與標(biāo)本進(jìn)行原位雜交后，使雜交原位雜交后，使雜交區(qū)域發(fā)出熒光。區(qū)域發(fā)出熒光。v優(yōu)點(diǎn)：快速、安全優(yōu)點(diǎn)：快速、安全 靈敏度高靈敏度高 特異性強(qiáng)。特異性強(qiáng)。 圖示為圖示為2121三體綜合征患三體綜合征患 者的者的FISHFISH檢測(cè)檢測(cè)Normal maleNormal maleTumor cell Tumor cell 第三節(jié)第三節(jié) 遺傳病的蛋白質(zhì)水平診斷遺傳病的蛋白質(zhì)水平診斷蛋白質(zhì)水平診斷蛋白質(zhì)水平診斷 基因突變引起單基因?。好负偷鞍踪|(zhì)的質(zhì)和量的基因突變引起單基因?。好负偷鞍踪|(zhì)的質(zhì)和量的改變或缺如改變或缺如定性定量分析診斷單基因病或分定性定量分析診斷單基

8、因病或分子代謝病。子代謝病。臨床上常用檢測(cè)方法臨床上常用檢測(cè)方法 PrPr和酶分析：確定單基因病和酶分析：確定單基因病 代謝產(chǎn)物檢測(cè)：反映酶活性代謝產(chǎn)物檢測(cè)：反映酶活性標(biāo)本來源標(biāo)本來源 產(chǎn)前診斷：絨毛、羊水、臍帶血和皮膚。產(chǎn)前診斷：絨毛、羊水、臍帶血和皮膚。 新生兒篩查：新生兒篩查：血、尿。血、尿。上海：上海：1981198119871987年對(duì)年對(duì)284,396284,396名新生兒進(jìn)行名新生兒進(jìn)行PKUPKU篩查，篩查，查出查出PKUPKU患兒患兒1515名，高苯丙氨酸血癥名，高苯丙氨酸血癥4 4名。名。生物化學(xué)檢查生物化學(xué)檢查第四節(jié)第四節(jié) 遺傳病的基因診斷遺傳病的基因診斷v概念：利用概念

9、：利用分子生物學(xué)技術(shù)，分子生物學(xué)技術(shù)，直接直接探測(cè)遺傳物質(zhì)的結(jié)探測(cè)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化情況，從而對(duì)被檢查者的狀態(tài)和構(gòu)或表達(dá)水平的變化情況，從而對(duì)被檢查者的狀態(tài)和疾病做出診斷疾病做出診斷。v 基因診斷材料：基因診斷材料： DNADNA：分析基因結(jié)構(gòu)：分析基因結(jié)構(gòu) RNARNA：分析基因功能分析基因功能一、基因診斷的特點(diǎn)一、基因診斷的特點(diǎn)1 1、以探測(cè)基因?yàn)槟繕?biāo)，屬于、以探測(cè)基因?yàn)槟繕?biāo)，屬于“病因診斷病因診斷”，針針對(duì)性強(qiáng)對(duì)性強(qiáng)；2 2、基因診斷取材來源廣泛；、基因診斷取材來源廣泛；3 3、利用基因探針進(jìn)行檢測(cè)，、利用基因探針進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高、特異性靈敏度高、特異性強(qiáng)強(qiáng)；4 4、基因探

10、針、基因探針適用性強(qiáng)適用性強(qiáng)，診斷范圍廣；，診斷范圍廣；5 5、目的基因是否處于活化狀態(tài)均可、目的基因是否處于活化狀態(tài)均可, ,無組織和無組織和發(fā)育特異性。發(fā)育特異性?；蛟\斷基因診斷診斷遺傳病最有前途方法診斷遺傳病最有前途方法二、基因診斷的基本途徑二、基因診斷的基本途徑v直接診斷：直接診斷：直接檢測(cè)致病基因本身異常直接檢測(cè)致病基因本身異常v間接診斷：間接診斷：當(dāng)致病基因已知而異常未知時(shí)，或者當(dāng)致病基因已知而異常未知時(shí)，或者致病基因尚屬未知時(shí)，可通過對(duì)受檢者或者家系致病基因尚屬未知時(shí)，可通過對(duì)受檢者或者家系進(jìn)行連鎖分析進(jìn)行連鎖分析, ,以推斷其是否獲得了帶有致病基因以推斷其是否獲得了帶有致病基

11、因的染色體。的染色體?；蛟\斷標(biāo)本基因診斷標(biāo)本v癥狀前診斷癥狀前診斷 外周靜脈血外周靜脈血v產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷 孕早期的絨毛細(xì)胞孕早期的絨毛細(xì)胞 孕中期羊水胎兒脫落細(xì)胞孕中期羊水胎兒脫落細(xì)胞 母親外周血中胎兒有核紅細(xì)胞母親外周血中胎兒有核紅細(xì)胞v植入前診斷植入前診斷 受精卵卵裂細(xì)胞受精卵卵裂細(xì)胞產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是針對(duì)胎兒的診斷，其適應(yīng)征是針對(duì)胎兒的診斷，其適應(yīng)征（P207-209P207-209）(1)(1)夫婦之一有染色體畸變，特別是平衡易位攜帶者，或者夫婦之一有染色體畸變，特別是平衡易位攜帶者，或者 夫婦染色體正常，但出生過染色體異常的患兒的夫婦夫婦染色體正常，但出生過染色體異常的患兒的夫婦

12、(2)35(2)35歲以上的高齡孕婦歲以上的高齡孕婦 (3)(3)夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形，或出生過這種畸形患兒夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形，或出生過這種畸形患兒 的夫婦的夫婦(4)(4)夫婦之一有先天性代謝缺陷，或出生過這種患兒的夫婦夫婦之一有先天性代謝缺陷，或出生過這種患兒的夫婦(5)X(5)X連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦 (6)(6)原因不明的習(xí)慣性流產(chǎn)的孕婦原因不明的習(xí)慣性流產(chǎn)的孕婦(7)(7)羊水過多的孕婦羊水過多的孕婦 (8)(8)夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦(9)(9)具有遺傳病家族史，又系近親婚配的孕婦具有遺傳病家族史，又系近

13、親婚配的孕婦 醫(yī)生在超聲波探頭的引醫(yī)生在超聲波探頭的引導(dǎo)下，用一根細(xì)長(zhǎng)的穿刺針導(dǎo)下，用一根細(xì)長(zhǎng)的穿刺針穿過腹壁、子宮肌層及羊膜穿過腹壁、子宮肌層及羊膜進(jìn)入羊膜腔，抽取進(jìn)入羊膜腔，抽取202030ml30ml羊水，以檢查其中胎兒細(xì)胞羊水，以檢查其中胎兒細(xì)胞的染色體、的染色體、DNADNA、生化成分等、生化成分等，是目前最常用的一種產(chǎn)前，是目前最常用的一種產(chǎn)前診斷技術(shù)。診斷技術(shù)。羊膜穿刺法羊膜穿刺法 創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷v孕中期（孕中期（16-1816-18周）的周）的羊水胎兒脫落細(xì)胞羊水胎兒脫落細(xì)胞v在懷孕在懷孕1212周之前，一般周之前，一般不采用羊膜穿刺法進(jìn)行不采用羊膜穿刺法進(jìn)行采樣

14、與診斷采樣與診斷. .0.5%0.5%的孕婦會(huì)出現(xiàn)羊膜炎、的孕婦會(huì)出現(xiàn)羊膜炎、胎膜破裂及流產(chǎn)。胎膜破裂及流產(chǎn)。羊膜穿刺法羊膜穿刺法創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷絨毛取樣絨毛取樣-創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷v絨毛膜絨毛取樣絨毛膜絨毛取樣比羊膜穿刺法更比羊膜穿刺法更早采樣與檢查的早采樣與檢查的診斷方法診斷方法v懷孕懷孕10101212周周 v但風(fēng)險(xiǎn)比羊膜穿但風(fēng)險(xiǎn)比羊膜穿刺法要高。流產(chǎn)刺法要高。流產(chǎn)率高達(dá)率高達(dá)2%2% 孕婦血有核紅細(xì)胞（孕婦血有核紅細(xì)胞（NRBCNRBC）含量極少，大約每）含量極少，大約每1ml1ml母血中只含母血中只含5 52020個(gè)胎兒細(xì)胞，個(gè)胎兒細(xì)胞，NRBCNRBC更少，為

15、每更少，為每1ml1ml含含2 26 6個(gè)胎兒細(xì)胞，必須進(jìn)行分離純化才能利于進(jìn)一步分個(gè)胎兒細(xì)胞，必須進(jìn)行分離純化才能利于進(jìn)一步分析，做產(chǎn)前診斷。析，做產(chǎn)前診斷。 正常胎盤并非是完善的、細(xì)胞透不過的屏障。正常胎盤并非是完善的、細(xì)胞透不過的屏障。在人類正常妊娠當(dāng)中，進(jìn)入母體血液循環(huán)中的胎兒在人類正常妊娠當(dāng)中，進(jìn)入母體血液循環(huán)中的胎兒血量估計(jì)是血量估計(jì)是0.10.10.3ml0.3ml。胚胎植入前遺傳學(xué)診斷胚胎植入前遺傳學(xué)診斷 （Preimplantation GenerticPreimplantation Genertic Diagnosis Diagnosis， PGDPGD）v PGD PGD

16、主要是對(duì)體外受精的胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。主要是對(duì)體外受精的胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。v PGDPGD是輔助生育技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展是輔助生育技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展 的產(chǎn)前診斷技術(shù)，俗稱第三代試管嬰兒。的產(chǎn)前診斷技術(shù)，俗稱第三代試管嬰兒。v 從體外受精第從體外受精第3 3日的胚胎或第日的胚胎或第5 5日的囊胚取日的囊胚取1-21-2個(gè)卵裂球個(gè)卵裂球 或部分細(xì)胞進(jìn)行核型胚胎移植，取樣不影響胚胎發(fā)育，或部分細(xì)胞進(jìn)行核型胚胎移植，取樣不影響胚胎發(fā)育， 得到健康下一代。得到健康下一代。三、基因診斷常用方法及應(yīng)用三、基因診斷常用方法及應(yīng)用v原理：用已知核苷酸序列測(cè)定未知核苷酸序列。原理：用已

17、知核苷酸序列測(cè)定未知核苷酸序列。v方法：分子雜交、方法：分子雜交、DNADNA體外擴(kuò)增（體外擴(kuò)增（PCRPCR）、）、DNADNA測(cè)序、基測(cè)序、基因芯片技術(shù)因芯片技術(shù)，其中最基本技術(shù)是核酸分子雜交技術(shù)。，其中最基本技術(shù)是核酸分子雜交技術(shù)。v應(yīng)用：應(yīng)用： 19781978年簡(jiǎn)悅威（年簡(jiǎn)悅威（YW KanYW Kan）首次用）首次用DNADNA重組技術(shù)進(jìn)行鐮重組技術(shù)進(jìn)行鐮刀型貧血病產(chǎn)前診斷；刀型貧血病產(chǎn)前診斷； 19821982年普遍開始試用基因診斷技術(shù)；年普遍開始試用基因診斷技術(shù)； 迄今已對(duì)數(shù)百種遺傳性疾病進(jìn)行基因診斷和產(chǎn)前基迄今已對(duì)數(shù)百種遺傳性疾病進(jìn)行基因診斷和產(chǎn)前基因診斷。因診斷。v應(yīng)用特異

18、性探針在復(fù)應(yīng)用特異性探針在復(fù)雜的待檢雜的待檢DNADNA中，利用中，利用堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理來鑒定其同源來鑒定其同源DNADNA分子分子的過程的過程。vSouthernSouthern印跡雜交印跡雜交vASOASO斑點(diǎn)雜交斑點(diǎn)雜交 分子雜交分子雜交SouthernSouthern印跡雜交印跡雜交ASOASO斑點(diǎn)雜交斑點(diǎn)雜交19861986年，胡流清等基于點(diǎn)突變?cè)?，胡流清等基于點(diǎn)突變?cè)?，用寡核苷酸探針進(jìn)行基因診斷。理，用寡核苷酸探針進(jìn)行基因診斷。正常探針正常探針突變探針突變探針苯丙酮尿癥苯丙酮尿癥(AR(AR） PCRPCR技術(shù)技術(shù)vPCRPCR技術(shù)：體外快速擴(kuò)增特異性技術(shù)：

19、體外快速擴(kuò)增特異性DNADNA片斷地技術(shù)，片斷地技術(shù)，使能夠達(dá)到足夠分析的純度和量。模板使能夠達(dá)到足夠分析的純度和量。模板DNADNA可可以來自一個(gè)細(xì)胞，一根頭發(fā)、一滴精斑等都可以來自一個(gè)細(xì)胞，一根頭發(fā)、一滴精斑等都可以得到有效的擴(kuò)增。以得到有效的擴(kuò)增。 vPCR-SSCPPCR-SSCPvPCR-RFLPPCR-RFLPPCR-SSCPPCR-SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）19891989年，年，OritaOrita等建立的等建立的PCRPCR產(chǎn)物單鏈產(chǎn)物單鏈DNADNA凝膠電泳技術(shù)凝膠電泳技術(shù)。1 1：正常人：正常人 2,4,52,4,5：純合體患者：純合體患者 3 3：雜合

20、體：雜合體(2(2的弟弟的弟弟) )左為泳動(dòng)變位模式：左為泳動(dòng)變位模式：A A 正常人；正常人；B B 純合體患者純合體患者RFLP(RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性) ) v人群中不同個(gè)體基因的核苷人群中不同個(gè)體基因的核苷酸序列存在差異酸序列存在差異DNADNA多態(tài)多態(tài)性。性。vDNDN序列上發(fā)生變化而出現(xiàn)序列上發(fā)生變化而出現(xiàn)或丟失某一限制性酶切位點(diǎn)，或丟失某一限制性酶切位點(diǎn)，使酶切產(chǎn)生的片段長(zhǎng)度和數(shù)使酶切產(chǎn)生的片段長(zhǎng)度和數(shù)量發(fā)生變化稱為量發(fā)生變化稱為RFLPRFLP（ restriction fragment restriction fragment length pol

21、ymorphism length polymorphism ）。）。鐮狀細(xì)胞貧血鐮狀細(xì)胞貧血(HbS(HbS) )： 第第5 57 7位密碼子位密碼子MstMst： CCTNAGGCCTNAGGHbHbA A： CCTGAGGAGCCTGAGGAGHbHbS S： CCTGTGGAGCCTGTGGAG1.2 Kb 0.2KbRFLP(RFLP(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性) ) RFLPRFLP分析分析 在親子鑒定中的作用在親子鑒定中的作用XXXXXXXXRFLP RFLP 分析在法醫(yī)學(xué)中的作用分析在法醫(yī)學(xué)中的作用 1 2 3 4 5 6 7RFLPRFLP分析在遺傳病診斷中的作用

22、分析在遺傳病診斷中的作用根據(jù)上述分析，這個(gè)胎兒的根據(jù)上述分析，這個(gè)胎兒的基因型是：基因型是： 1. AS1. AS 2. AA 2. AA 3. SS 3. SS 4. Unknown 4. Unknown DNADNA序列定序列定DNADNA自動(dòng)測(cè)序儀采用自動(dòng)測(cè)序儀采用4 4種不同顏色的熒光分別標(biāo)記種不同顏色的熒光分別標(biāo)記4 4種雙脫氧種雙脫氧核苷酸，基本實(shí)現(xiàn)了測(cè)序自動(dòng)化。核苷酸，基本實(shí)現(xiàn)了測(cè)序自動(dòng)化。 DNADNA自動(dòng)測(cè)序儀生成序列自動(dòng)測(cè)序儀生成序列 DNADNA芯片芯片l成千上萬個(gè)寡核苷酸或成千上萬個(gè)寡核苷酸或cDNAcDNA探針密集、規(guī)律地排列在探針密集、規(guī)律地排列在1cm1cm2 2大小的硅片或玻璃芯片上，容量可達(dá)大小的硅片或玻璃芯片上，容量可達(dá)20204040萬個(gè)基因探針。萬個(gè)基因探針。l熒光標(biāo)記的熒光標(biāo)記的DNADNA或或cDNA