乳腺癌VEGFC mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

1、乳腺癌VEGFC mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系         11-01-07 13:29:00     編輯：studa20              作者：王虎霞，盛薇，王光輝，樊林，單濤，趙偉，李萌【摘要】  目的 探討乳腺癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)的表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。方法 用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶

2、鏈反應(yīng)(RTPCR)法檢測(cè)60例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌VEGFC mRNA的表達(dá)情況，取15例乳腺纖維腺瘤標(biāo)本作為對(duì)照。結(jié)果 乳腺癌組VEGFC mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)程度明顯高于對(duì)照組(P均<0.01);乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGFC mRNA的表達(dá)率及表達(dá)程度高于淋巴結(jié)非轉(zhuǎn)移組(P均<0.05);VEGFC mRNA的表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.638，P<0.01)。結(jié)論 乳腺癌中VEGFC mRNA的表達(dá)水平增高;VEGFC mRNA的表達(dá)促進(jìn)乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 【關(guān)鍵詞】  乳腺癌;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C mRNA;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移ABSTRACT: Obj

3、ective To study the expression of vascular endothelial growth factor C (VEGFC) in breast cancer and its correlation with clinicopathological indexes of lymph node metastasis. Methods Reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) method was adopted in detecting VEGFCmRNA expression in 60 ca

4、ses of breast infiltrative tubular cancer. We took 15 cases of breast fibroadenoma as controls. Results The positive rate and degree of VEGFCmRNA expression were higher in the breast cancer group than in the control group (P<0.01). VEGFCmRNA expression was significantly higher in the lymph node m

5、etastasispositive group than in lymph node metastasisnegative group (P<0.05). VEGFCmRNA expression was positively correlated with lymph node metastasis (r=0.638, P<0.01). Conclusion VEGFCmRNA expression was higher in breast cancer and it promoted lymph node metastasis in breast cancer.KEY WORD

6、S: breast cancer; vascular endothelial growth factor C mRNA; lymph node metastasis研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(vascular endothelial growth factor C, VEGFC)是較特異的促淋巴管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，在乳腺癌淋巴管的生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著不可忽視的作用1。目前關(guān)于VEGFC基因水平的研究，國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。本研究通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chainreaction, RTPCR)法檢測(cè)乳腺癌組織中VEGFC mRNA

7、的表達(dá)，以三磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)對(duì)照對(duì)目的基因進(jìn)行半定量分析，探討VEGFC基因表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。1 材料與方法1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2006年3月2007年5月間乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌新鮮標(biāo)本60例為研究對(duì)象，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例，無(wú)轉(zhuǎn)移31例。腫塊長(zhǎng)徑2cm 23例，>2cm且5cm 30例，>5cm 7例。按WHO乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌病理學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：級(jí)19例，級(jí)18例，級(jí)23例。所有患者均為女性，平均年齡(45.21±8.23)歲，術(shù)前均未接受放、化療等，均行乳腺癌改良根治術(shù)，清除淋巴結(jié)數(shù)目均大于15枚。取門(mén)診乳腺纖

8、維腺瘤新鮮標(biāo)本15例作為對(duì)照。1.2 主要試劑 焦炭酸二乙酯(DEPC)購(gòu)自Sigma公司;Trizol試劑購(gòu)自Invitrogen公司;RevertAidTMcDNA第1鏈合成試劑盒購(gòu)自MBI公司;2×Taq PCR MasterMix(KT201，含染料)及DNA Markers購(gòu)自天根生物技術(shù)有限公司。引物由北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成。VEGFC引物1：ACCAAACAAGGAGCTGGATG，引物2：AAGAGGCCTTTTGCAGATGA，產(chǎn)物長(zhǎng)度600bp，退火溫度58;GAPDH引物1：ATCATCCCTGCCTCTACTGG，引物2：CCCTCCGACGCCTG

9、CTTCAC，產(chǎn)物長(zhǎng)度188bp，退火溫度58。1.3 方法 每例標(biāo)本術(shù)后留取新鮮組織，用處理過(guò)的剪刀把組織剪成小塊，立即放入1mL/L的DEPC水溶液處理過(guò)的凍存管，迅速投入液氮，隨后轉(zhuǎn)送實(shí)驗(yàn)室，-80冰箱保存。取100mg組織，Trizol法提取的總RNA，并進(jìn)行RNA純度及完整性測(cè)定。按照RevertAidTMcDNA第1鏈合成試劑盒說(shuō)明反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA。取cDNA<1g(1L)進(jìn)行PCR反應(yīng)，GAPDH為內(nèi)參照，采取分管擴(kuò)增，反應(yīng)體系25L，退火溫度58，34個(gè)循環(huán)。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并送北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任公司測(cè)序。每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)有內(nèi)參GAPDH作為對(duì)照，避免RN

10、A定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應(yīng)體系中擴(kuò)增效率不均一、各孔間的溫度差等所造成的誤差。計(jì)算目的基因與內(nèi)參基因吸光度的比值，即目的基因相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)行半定量比較。同時(shí)設(shè)有陰性對(duì)照，防止非特異性擴(kuò)增，即PCR體系不加模板;PCR體系中只加內(nèi)參引物而不加目的基因引物。1.4 結(jié)果判定 RNA純度及濃度測(cè)定：分光光度計(jì)讀取RNA溶液在260nm、280nm波長(zhǎng)的吸光度比值A(chǔ)260/A280即RNA濃度。比值判定：A260/A280在1.82.0視為抽取的RNA純度較高，蛋白質(zhì)和酚去除較干凈，該樣品可用于下一步實(shí)驗(yàn)。RNA完整性鑒定：經(jīng)10g/L瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)28S和18S條帶的完整性和他們的比

11、值。28S和18S條帶明亮、邊緣清晰、條帶銳利，并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，認(rèn)為RNA質(zhì)量是好的。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)值均以±s表示，由SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析用Spearman法。顯著性檢驗(yàn)水平=0.05。2 結(jié) 果2.1 RNA檢測(cè)及VEGFC產(chǎn)物測(cè)序 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)反復(fù)提取RNA，每例樣品RNA純度均符合要求。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)RNA電泳顯示，每例樣品RNA質(zhì)量均符合要求(圖1)。產(chǎn)物經(jīng)純化和雙向測(cè)序，VEGFC目的片段符合預(yù)期擴(kuò)增目標(biāo)，無(wú)堿基錯(cuò)配、突變等(圖2)。2.2 兩組VEGFC m

12、RNA表達(dá)率的比較 乳腺癌組VEGFC mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為73.3%(44/60)，明顯高于對(duì)照組的13.3%(2/15)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2.3 VEGFC mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床、病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系 乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGFC mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率(86.2%)高于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組(61.3%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在不同月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、病理分級(jí)、雌激素、孕激素受體及HER2表達(dá)分組中VEGFC mRNA表達(dá)均無(wú)顯著性差異(表1)。表1 VEGFC mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床、病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系2.4 兩組VEGFC mRNA表達(dá)程度的比較 乳腺癌組VEGFC mRNA的相對(duì)表達(dá)量(0.561±0.3