美國(guó)及歐洲藥典系統(tǒng)適應(yīng)性要求

1、系統(tǒng)適應(yīng)性美國(guó)藥典系統(tǒng)適應(yīng)性是氣相和液相色譜分析方法的重要組成部分，用于證明色譜系統(tǒng)的分離度和重現(xiàn)性能滿(mǎn)足樣品的分析要求。測(cè)試基于這樣的原理：儀器、電路、方法和樣品組成一個(gè)整體系統(tǒng)，我們可以對(duì)這個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試評(píng)估。影響色譜系統(tǒng)的因素包括：l 流動(dòng)相的組成、離子強(qiáng)度、溫度和pH值l 柱子大小、流速、柱溫和壓力l 固定相特點(diǎn)，包括填料類(lèi)型，載體形狀、粒徑、孔徑、表面積等。l 常用固定相為反相硅膠，以十八碳烷基健合硅膠最常用，其它經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的硅膠也有使用。分離度Rs是理論塔板數(shù)n的函數(shù)（也叫柱效），是分離因子，k是容量因子（所有符號(hào)的意義見(jiàn)前文“色譜定義和說(shuō)明”部分）。在規(guī)定的色譜條件下，n表示洗

2、脫物中相鄰化合物的分離程度，可作為衡量色譜系統(tǒng)柱效能的指標(biāo)，但是不如直接測(cè)試的結(jié)果可靠。峰的尖銳程度部分反映柱效，這個(gè)參數(shù)對(duì)檢查微量物質(zhì)至關(guān)重要。標(biāo)準(zhǔn)品或者標(biāo)準(zhǔn)溶液需要重復(fù)進(jìn)樣以確保精密度。除非個(gè)論中有規(guī)定, 系統(tǒng)適用性五針的數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過(guò)2.0%, 如果超過(guò)2.0%的話(huà), 需要進(jìn)樣六針。在含量測(cè)定中，如果純品含量100%，則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差沒(méi)有最大值限制，這個(gè)值可根據(jù)多次進(jìn)樣對(duì)照溶液來(lái)計(jì)算：%RSD=KBn/t90%，n-1K為常數(shù)0.349，由公式k=(0.6/)×(t90%,5/6)計(jì)算得來(lái)，0.62表示B=1.0時(shí)六次進(jìn)樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。B是個(gè)案中規(guī)定的上限。n是對(duì)照溶

3、液的進(jìn)樣次數(shù)（3n6），t90%,n-1是自由度為n-1、置信水平為90%，雙側(cè)檢驗(yàn)時(shí)的t值。除非另有規(guī)定，RSD不能超過(guò)下表中的值。此規(guī)定不適用于相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)。Relative Standard Deviation Requirents進(jìn)樣次數(shù)3456B%RSD上限2.00.410.590.730.852.50.520.740.921.063.00.620.891.101.27對(duì)稱(chēng)因子AS，用于衡量峰的對(duì)稱(chēng)性，完全對(duì)稱(chēng)時(shí)值為1。拖尾越嚴(yán)重，AS的值越大（見(jiàn)圖4）。偶爾也會(huì)有值小于1的情況。如果對(duì)稱(chēng)因子與1的差值越大，則積分的精密度越差。信噪比（S/N）是系統(tǒng)適應(yīng)性的一個(gè)重要參數(shù)，計(jì)算公式如下

4、（圖5）：S/N = 2H/hH是峰高，即峰最高點(diǎn)到基線(xiàn)的距離；h是噪音最大值和最小值之間的差值。系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試的數(shù)據(jù)通過(guò)重復(fù)進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品或者特定文件中規(guī)定的對(duì)照溶液而得到，此文件中對(duì)相關(guān)參數(shù)的定義同樣適用于其它操作條件，以下情況可做相應(yīng)調(diào)整：l 標(biāo)準(zhǔn)品（包括參考物質(zhì)）對(duì)適應(yīng)性測(cè)試中的所有化合物均適用l 在系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試中為改進(jìn)色譜系統(tǒng)性能而作適當(dāng)調(diào)整對(duì)色譜系統(tǒng)的調(diào)整不能彌補(bǔ)柱子和系統(tǒng)本身的缺陷。為滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性要求而對(duì)分析方法調(diào)整時(shí)，除非另有規(guī)定，以下每個(gè)變量的最大值都應(yīng)考慮；這些調(diào)整需要附加有效數(shù)據(jù)。為驗(yàn)證新方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，需要對(duì)改變條件后的分析方法重新評(píng)價(jià)。多處改動(dòng)會(huì)對(duì)系統(tǒng)性能產(chǎn)生積累效

5、果，在分析之前能仔細(xì)考慮。在梯度洗脫中不推薦改變流動(dòng)性組成，如果必須改變，則只對(duì)溶劑體積或滯后體積改變。流動(dòng)相pH（HPLC）：在配備流動(dòng)相時(shí)，水相緩沖液的pH波動(dòng)范圍在正負(fù)0.2個(gè)單位緩沖液鹽濃度（HPLC）：在滿(mǎn)足pH值條件下，緩沖液中鹽的濃度波動(dòng)范圍在±10%。流動(dòng)相的組成（HPLC）：以下調(diào)整限度適用于流動(dòng)相中的小組分（比例小于等于50%）。這些組分的量可在正負(fù)30%范圍內(nèi)調(diào)整。但是不能超過(guò)總流動(dòng)相的10%。下面是兩相體系和三相體系組分的調(diào)整范圍。兩相體系：溶劑比為50:50時(shí)，50的30%是15%，超過(guò)了10%的限度，因此流動(dòng)相比例只能在40:60到60：40范圍內(nèi)調(diào)整。容

6、積比為2：98時(shí)，2的30%時(shí)0.6%，因此改變范圍在1.4：98.6到2.6:97.4三相體系：溶劑比為60:35:5時(shí)，第二組分35的30%時(shí)10.5%，超過(guò)10%的限度，只能在25%到45%的范圍內(nèi)改變。第三組分5的30%是1.5%。加上組分一共同構(gòu)成洗脫體系。因此三相體系的比例變化范圍是50:45:5到70:25:5或者58.5:35:6.5到61.5:35：3.5。紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器的波長(zhǎng)：操作過(guò)程中不允許波長(zhǎng)有誤差，廠(chǎng)家或者其它機(jī)構(gòu)對(duì)檢測(cè)器波長(zhǎng)的校正誤差不超過(guò)3nm。固定相:柱長(zhǎng)：可變范圍為原柱長(zhǎng)的±70%柱內(nèi)徑（HPLC）：如果線(xiàn)速度恒定可做適當(dāng)調(diào)節(jié)，見(jiàn)流速項(xiàng)（HPLC

7、）下.柱內(nèi)徑（GC）：調(diào)整范圍為原柱內(nèi)徑的±50%薄膜厚度（毛細(xì)管GC）：調(diào)整范圍為-50%到100%粒徑（HPLC）：填料顆粒尺寸可以減小50%，但是不能增大。粒徑（GC）：在滿(mǎn)足色譜系統(tǒng)適應(yīng)性要求的情況下，粒徑由大換小或者由小換大都可以，調(diào)料的粒徑比率由最大顆粒的直徑除以最小顆粒的直徑而來(lái)。流速（GC）：流速可調(diào)范圍在±50%流速（HPLC）；柱子尺寸改變時(shí)，流速可由下式計(jì)算：F2=F1l2d22/l1d12F1是文件中規(guī)定的流速，單位是mL/min，F(xiàn)2是調(diào)整后的流速；l1是文件中規(guī)定的柱長(zhǎng)，l2是使用柱長(zhǎng)；d1為文件中規(guī)定的柱內(nèi)徑，d2為使用柱內(nèi)徑。流速可變范圍是&

8、#177;50%。進(jìn)樣體積（HPLC）：只要滿(mǎn)足精密度和檢測(cè)限，進(jìn)樣體積可以適當(dāng)減少，但不能增加。進(jìn)樣體積和分流體積（GC）：檢測(cè)器和重現(xiàn)性較好時(shí)可做適當(dāng)調(diào)整。柱溫（HPLC）：柱溫波動(dòng)范圍在±10º進(jìn)樣口溫度（GC）：可調(diào)范圍±10º程序升溫（GC）：溫度可做適當(dāng)改變，需要保持一定溫度或者改變到另一溫度值時(shí)，溫度變化做大容許范圍是±20º。除非另有規(guī)定，系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)由待測(cè)物峰的數(shù)據(jù)計(jì)算、樣品的Rr，RF，tR實(shí)測(cè)值應(yīng)與對(duì)照品的實(shí)測(cè)值一致，文件中給的相對(duì)保留時(shí)間值是為了方便峰的指認(rèn)，對(duì)于相對(duì)保留時(shí)間沒(méi)有評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。適應(yīng)性測(cè)試時(shí)為了確保

9、最終操作結(jié)果的有效性。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為確保系統(tǒng)適應(yīng)性，進(jìn)樣前應(yīng)做適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)備工作。配置待測(cè)溶液時(shí)，溶液中包括一定量的待測(cè)物和一些其它物質(zhì)（如藥品輔料或者雜質(zhì)）。當(dāng)色譜系統(tǒng)有顯著變化時(shí)，或者要用特殊試劑，則要重新做系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，否則不能進(jìn)行樣品分析。色譜分離技術(shù)色譜分離技術(shù)是一種多級(jí)分離方法，樣品在固定相和流動(dòng)相之間多次分配，達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。固定相一般是附在硅膠或者其它固體載體上的固體或液體，可填充在層析柱上或鋪在薄層版/薄膜上，流動(dòng)相可以是氣體、液體或者超臨界流體。分離原理包括吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、分子排阻色譜等，也可根據(jù)樣品分子的大小、空間體積、質(zhì)量等物理化學(xué)性質(zhì)來(lái)分離。本章介紹了系統(tǒng)

10、適應(yīng)性測(cè)試涉及的參數(shù)定義及計(jì)算方法，分析方法和儀器介紹等已分別在以下章節(jié)做了介紹:l 紙色譜l 薄層色譜l 氣相色譜l 液相色譜l 排阻色譜l 超臨界流體色譜定義下面分別介紹系統(tǒng)適應(yīng)性和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)參數(shù)定義。有些儀器的軟件系統(tǒng)包含了一些特定參數(shù)的計(jì)算方法（例如性噪比、分離度）。操作人員有責(zé)任確認(rèn)該計(jì)算方法是否符合歐洲藥典要求，如果有差別，應(yīng)對(duì)該方法做適當(dāng)調(diào)整以符合藥典規(guī)定。色譜圖反應(yīng)檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)、洗脫劑濃度或體積與時(shí)間的關(guān)系等。理想的色譜圖是在平穩(wěn)的基線(xiàn)上各色譜峰彼此分離，呈高斯分布。色譜峰色譜柱中洗脫的單個(gè)組分或者未分離的多個(gè)組分在檢測(cè)器上的響應(yīng)信號(hào)，是色譜圖的一部分。一般用峰面積、峰

11、高h(yuǎn)和半高峰寬wh、峰高h(yuǎn)和峰寬wi等參數(shù)來(lái)描述色譜峰。高斯峰有如下關(guān)系(圖2.2.46-1)：wh = 1.18wi保留時(shí)間tR組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需時(shí)間保留體積VR組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需的流動(dòng)相體積，可用保留時(shí)間乘以流速F。VR = tR × F死時(shí)間tM不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需時(shí)間死體積VM不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需流動(dòng)相體積。VM = tM × F排阻色譜中用Vo表示（見(jiàn)下面）。保留因子k有時(shí)用容量因子k或者分配比Dm表示，計(jì)算公式如下：K = 固定相中的組分量流動(dòng)相中的組分量 = kcVSVMKc表示分配常數(shù)，也叫平衡

12、分配系數(shù)Vs表示固定相體積VM表示流動(dòng)相體積在色譜系統(tǒng)中某組分的保留因子也可按下式計(jì)算：K = tR-tMtM流動(dòng)相總時(shí)間tt，當(dāng)組分粒徑小于固定相膠體孔徑的最小尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需時(shí)間（圖）流動(dòng)相總體積Vt，當(dāng)組分粒徑小于固定相膠體孔徑的最小尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需流動(dòng)相體積，可按下式計(jì)算Vt = tt×F滯留時(shí)間t0：當(dāng)組分粒徑大于固定相膠體孔徑的最大尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需時(shí)間滯留體積V0：當(dāng)組分粒徑大于固定相膠體孔徑的最大尺寸時(shí)，該組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)最大峰所需體積，可按下式計(jì)算V0 = t0×F分配常數(shù)k0：表示排阻色譜中某一組

13、分的洗脫能力，也叫分配系數(shù)，可用下式計(jì)算：K0 = tR-t0tt-t0滯留因子RF：在平面色譜中也叫保留因子Rf，表示組分在板上的點(diǎn)到原點(diǎn)之間的距離與溶劑前沿到原點(diǎn)的距離的比值（圖）。Rf=baB是分析物的移動(dòng)距離A是溶劑前沿的移動(dòng)距離塔板數(shù)N：可反映柱效，又叫理論塔板數(shù)，計(jì)算公式如下：N = 5.54(tRwh)2tR是組分的保留時(shí)間，wh是該物質(zhì)的半高峰寬色譜柱類(lèi)型、柱溫、流動(dòng)相以及化合物類(lèi)型都會(huì)影響理論塔板數(shù)的值滯后體積D：也叫梯度延遲體積，指從流動(dòng)相混合點(diǎn)至柱頭的系統(tǒng)體積，可用以下方法計(jì)算：色譜柱：用適當(dāng)?shù)拿?xì)管（如1 m×0.12 mm）代替流動(dòng)相：A相是水，B相是0.1

14、%（V/V）的丙酮水流速F：能達(dá)到足夠的反壓為準(zhǔn)（如2ml/min）時(shí)間minA相體積百分比B相體積百分比0-201000010020-300100檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm記錄吸光度到達(dá)最大值的50%時(shí)的時(shí)間t0.5（圖）D = tD×FtD = t0.5-tG，tG預(yù)設(shè)為20 minF為流速，單位為ml/min對(duì)稱(chēng)因子A色譜峰的對(duì)稱(chēng)因子（圖）按下式計(jì)算As = w0.052dW0.05表示在二十分之一峰高處峰寬d表示二十分之一峰高處到峰頂點(diǎn)投射到水平線(xiàn)之間的距離As值為1表示峰絕對(duì)對(duì)稱(chēng)，大于1則為拖尾峰，小于1則為前置峰分離度Rs兩組分之間的分離度（）計(jì)算公式如下Rs = 1.

15、18tR2-tR1wh1+wh2tR2 > tR1tR1和tR2是色譜峰的保留時(shí)間wh1和wh2是半高峰寬在定量平面色譜中，用移動(dòng)距離代替保留時(shí)間來(lái)計(jì)算兩組分之間的分離度，計(jì)算公式如下：Rs = 1.18aRF2-RF1wh1+wh2RF1和RF2是色譜峰的阻滯因子wh1和wh2是半高峰寬a是溶劑前沿到基線(xiàn)的距離峰谷比（p/v）做有關(guān)物質(zhì)的系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試時(shí)，如果兩峰之間的基線(xiàn)分離效果不好，可以用峰谷比作為評(píng)價(jià)依據(jù)（圖）。p/v = p/vHpHvHp表示基線(xiàn)以上最小峰的最高點(diǎn)到基線(xiàn)的距離Hv表示基線(xiàn)以上最小峰和主峰之間的最低點(diǎn)到基線(xiàn)的距離相對(duì)保留因子r相對(duì)保留因子的計(jì)算公式如下：r =

16、tRi-tMtRst+tMtRi表示待測(cè)峰的保留時(shí)間tRst表示參照峰的保留時(shí)間tM表示滯留時(shí)間未調(diào)整相對(duì)保留因子rG計(jì)算公式如下：rG = tRitRst除非另有規(guī)定，相對(duì)保留因子和未調(diào)整的相對(duì)保留因子的值基本一致在平面色譜中，用滯留因子RFst和RFi代替保留時(shí)間tRst和tRi信噪比（S/N）小的噪音峰會(huì)影響定量分析的精密度。信噪比計(jì)算公式如下：S/N = 2HhH表示組分的峰高，在參比溶液的色譜圖中，測(cè)量從信號(hào)峰的最高點(diǎn)到基線(xiàn)之間的距離。該信號(hào)峰的峰寬至少大于半高峰寬的5倍（圖）。h表示色譜圖中噪音峰的最高點(diǎn)到最低點(diǎn)之間的距離系統(tǒng)重現(xiàn)性系統(tǒng)重復(fù)性表示至少連續(xù)進(jìn)樣三次后，所得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

17、的百分?jǐn)?shù)。計(jì)算公式如下：sr（%）= 100y(yi-y)2n-1yi表示內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)方法中的峰面積、峰高或者面積比的值y表示平均值n表示值的個(gè)數(shù)系統(tǒng)適應(yīng)性用于測(cè)試的成分應(yīng)該明確，能滿(mǎn)足系統(tǒng)性能和含量測(cè)定的要求。系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試反映了色譜系統(tǒng)的性能，是建立分析方法不可或缺的一部分。柱效、保留因子、分離度、相對(duì)保留因子和對(duì)稱(chēng)因子等參數(shù)用來(lái)描述柱子的性能。這些參數(shù)可能從以下方面影響色譜行為：­ 流動(dòng)相的組成、離子強(qiáng)度、溫度和pH值­ 流速、色譜柱尺寸、柱溫和柱壓­ 固定相特性，包括填充劑類(lèi)型、填充劑粒徑、孔徑、比表面積­ 反相材料類(lèi)型或者對(duì)固定相表面進(jìn)行其它的結(jié)構(gòu)

18、修飾除非另有規(guī)定，還需滿(mǎn)足以下要求：­ 在相關(guān)物質(zhì)測(cè)定或含量測(cè)定中，用于定量的參照色譜峰，其對(duì)稱(chēng)因子取值范圍必須在0.8到1.5之間­ 如果某成分的純度為100%，則可容許的參比溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大值計(jì)算公式如下：sr（%）max = KBnt90%，n-1K是常數(shù)0.349，由公式K = 0.62×t90%,56計(jì)算而來(lái)，0.62表示當(dāng)B = 1.0時(shí)，六次進(jìn)樣后的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差百分?jǐn)?shù)B表示方法中規(guī)定的含量上限減去100%n表示進(jìn)樣次數(shù)（3n6）t90%, n-1表示雙側(cè)檢驗(yàn)、置信度為90%、自由度為n-1時(shí)的t值除非另有規(guī)定，可允許的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大值不能超過(guò)

19、下表（表）的值，此規(guī)定不適用于有關(guān)物質(zhì)測(cè)試。表2.2.46-1 重復(fù)性要求進(jìn)樣次數(shù)3456B（%）最大容許標(biāo)準(zhǔn)偏差2.00.410.590.730.852.50.520.310921.063.00.620.891.101.27測(cè)試有關(guān)物質(zhì)時(shí)，定量限度與此表相等或小于表中數(shù)值測(cè)試員要根據(jù)一些致變因素來(lái)選擇合適的方案驗(yàn)證色譜系統(tǒng)，以保證在測(cè)試過(guò)程中色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性不受影響。色譜條件的調(diào)整為滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性，在不對(duì)分析方法做根本改變的情況下，可對(duì)色譜參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整。在梯度洗脫時(shí)，改變洗脫條件會(huì)導(dǎo)致基線(xiàn)漂移，不利于色譜峰的劃分識(shí)別，甚至?xí)霈F(xiàn)假峰和延長(zhǎng)洗脫時(shí)間。因此要改變梯度洗脫的條件時(shí)，需重新驗(yàn)證方法

20、的有效性。系統(tǒng)適應(yīng)性是定性分析或含量測(cè)定結(jié)果的有效保障。市售液相色譜柱的固定相材料類(lèi)型多樣，可滿(mǎn)足不同色譜行為需要，為滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性要求，可對(duì)色譜條件做適當(dāng)調(diào)整。但是在反相色譜系統(tǒng)中，調(diào)整色譜參數(shù)不能總是達(dá)到既定要求，這時(shí)可選擇替換色譜柱。網(wǎng)站EDQM上有各種柱子的性能信息，可根據(jù)分析需要選擇合適的色譜柱。一般文件會(huì)明確規(guī)定一些重要參數(shù)以滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性。薄層色譜和紙色譜展開(kāi)劑的組成：對(duì)其中較少的組分，調(diào)整范圍為相對(duì)差值±30%或絕對(duì)差值±2%，可選其中較大的一種，但任何組分的絕對(duì)差值不得超過(guò)±10%。例如含量為10%的組分，按相對(duì)差值±30%計(jì)算其可調(diào)范

21、圍在7%-13%，按絕對(duì)差值±2%計(jì)算可調(diào)范圍在8%-12%，固可按相對(duì)差值計(jì)算的范圍來(lái)調(diào)整。假如一組分含量為5%，按相對(duì)差值計(jì)算其可調(diào)范圍在3.5-6.5%，按絕對(duì)差值計(jì)算其可調(diào)范圍在3-7%，此時(shí)可按絕對(duì)差值范圍調(diào)整，但是改變范圍絕對(duì)不能超過(guò)10%。除非另有規(guī)定，流動(dòng)相水相pH值可調(diào)范圍在±0.2個(gè)單位，非離子溶劑可調(diào)范圍在±1個(gè)單位。緩沖溶液中的鹽濃度可調(diào)范圍在±10%。點(diǎn)樣體積：如果薄層板或?qū)游黾埖牧６攘己茫?-10m），點(diǎn)樣體積可為規(guī)定的10-20%液相色譜：等度洗脫流動(dòng)相組成：對(duì)其中較少的組分，調(diào)整范圍為相對(duì)差值±30%或絕對(duì)差值&

22、#177;2%，可選其中較大的一種，但任何組分的絕對(duì)差值不得超過(guò)±10%。除非另有規(guī)定，流動(dòng)相水相pH值可調(diào)范圍在±0.2個(gè)單位，非離子溶劑可調(diào)范圍在±1個(gè)單位。緩沖溶液中的鹽濃度可調(diào)范圍在±10%。流速：一般可在±50%范圍內(nèi)調(diào)整，如果改用大尺寸的柱子，調(diào)整范圍可適當(dāng)加大。色譜柱參數(shù)固定相：­ 不能改變固定相填料類(lèi)型（例如不能用C8柱替換C18柱）­ 粒徑：最多可將粒徑減小到原來(lái)的50%，但是不能增加填料粒徑色譜柱尺寸：­ 長(zhǎng)度：可調(diào)范圍±50%­ 內(nèi)徑：可調(diào)范圍±25%如果色譜柱尺

23、寸改變，流速也需按以下公式做適當(dāng)調(diào)整：F2 = F1l2d22l1d12F1：方法中規(guī)定的流速，單位ml/minF2：改變后的流速，單位ml/minl1：方法中規(guī)定的柱長(zhǎng)，單位mml2：改變后的柱長(zhǎng)，單位mmd1：方法中規(guī)定的柱內(nèi)徑，單位mmd2：改變后的柱內(nèi)徑，單位mm柱溫：±10，除非另有說(shuō)明，操作時(shí)的柱溫需明確規(guī)定檢測(cè)波長(zhǎng)：不能改變進(jìn)樣體積：在滿(mǎn)足檢測(cè)限和重現(xiàn)性的情況下可減少進(jìn)樣體積，但不能增加進(jìn)樣體積液相色譜：梯度洗脫梯度洗脫不像等度洗脫，要改變洗脫條件的話(huà)需要慎重考慮流動(dòng)相：只有在滿(mǎn)足下列條件時(shí)才可對(duì)流動(dòng)相組成做微小調(diào)整：­ 滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性要求­ 主峰的

24、洗脫時(shí)間改變范圍不超過(guò)方法中規(guī)定的±15%­ 改變后的流動(dòng)相洗脫能力不能比方法中規(guī)定的差如果改變條件不能滿(mǎn)足系統(tǒng)適應(yīng)性要求，則需考慮滯留體積和換色譜柱滯留體積：實(shí)驗(yàn)儀器的布局能顯著改變分離度、保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間等。如有此情況，可能是滯留體積過(guò)大。在開(kāi)始梯度洗脫程序之前，會(huì)有一段等度洗脫過(guò)程?？紤]到規(guī)定的方法與實(shí)際使用方法中的滯留體積有差異，可在等度洗脫時(shí)調(diào)整開(kāi)始梯度洗脫的時(shí)間。測(cè)試員有責(zé)任使等度洗脫時(shí)間適應(yīng)所用的分析儀器。如果方法中規(guī)定了滯留體積，梯度洗脫的開(kāi)始時(shí)間可根據(jù)下面公式換成實(shí)際開(kāi)始時(shí)間：tc = t-D-D0FD：滯留體積，單位mlD0：實(shí)際滯留體積，單位ml

25、F：流速，單位ml/min如果沒(méi)有等度洗脫這個(gè)步驟也不影響數(shù)據(jù)的有效性，那么此步驟可以省略流動(dòng)相pH，不能改變緩沖液鹽濃度：不能改變流速：色譜柱尺寸改變時(shí)可改變流速（公式見(jiàn)前面）色譜柱參數(shù)固定相：­ 不能改變填料類(lèi)型­ 不能改變粒徑大小色譜柱尺寸：­ 長(zhǎng)度：可調(diào)范圍±70%­ 內(nèi)徑：可調(diào)范圍±25%如果色譜柱尺寸改變，流速也需按以下公式做適當(dāng)調(diào)整：F2 = F1l2d22l1d12F1：方法中規(guī)定的流速，單位ml/minF2：改變后的流速，單位ml/minl1：方法中規(guī)定的柱長(zhǎng)，單位mml2：改變后的柱長(zhǎng)，單位mmd1：方法中規(guī)定的柱

26、內(nèi)徑，單位mmd2：改變后的柱內(nèi)徑，單位mm柱溫：±5，除非另有說(shuō)明，操作時(shí)的柱溫需明確規(guī)定檢測(cè)波長(zhǎng)：不能改變進(jìn)樣體積：在滿(mǎn)足檢測(cè)限和重現(xiàn)性的情況下可減少進(jìn)樣體積，但不能增加進(jìn)樣體積氣相色譜色譜柱參數(shù)固定相：­ 粒徑：(填充柱)最多可減少50%，不能增大粒徑尺寸­ 薄膜厚度：(毛細(xì)管柱)可調(diào)范圍從-50%到+100%色譜柱尺寸：­ 長(zhǎng)度：可調(diào)范圍±70%­ 內(nèi)徑：可調(diào)范圍±50%流速：±50%柱溫：±10%進(jìn)樣體積和分流體積：在滿(mǎn)足檢測(cè)限和重現(xiàn)性的情況下可做適當(dāng)調(diào)整超臨界流體色譜流動(dòng)相組成：填充色譜中，對(duì)其中較少的組分，調(diào)整范圍為相對(duì)差值±30%或絕對(duì)差值±2%，可選其中較大的一種，但是毛細(xì)管色譜系統(tǒng)不能