苜蓿總皂苷提取物抗動脈粥樣硬化和降血脂的實驗研究

1、苜?？傇碥仗崛∥锟箘用}粥樣硬化和降血脂的實驗研究         10-08-24 16:35:00     編輯：studa20              作者：邴飛虹，程靜，馮新剛，萬敏，韓俊，李婧，廖一帆【摘要】  目的觀察苜?？傇碥仗崛∥锟勾笫髣用}粥樣硬化和降血脂作用。方法該實驗采用高脂飼料、血管壁鈣超載、內(nèi)皮損傷三者結(jié)合引發(fā)大鼠

2、大血管動脈粥樣硬化斑塊模型。檢測指標：用紫外分光光度計測定血清總膽固醇TCH，甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDLC)的含量;并計算低密度脂蛋白(LDLC)的含量和動脈粥樣硬化指數(shù)(AI);檢測主動脈的病理變化。結(jié)果苜蓿總皂苷提取物可明顯降低高脂血癥大鼠的血清TCH，TG，LDLC水平，明顯升高HDLC水平，明顯降低AI，與模型組比較有顯著性差異(P< 0.05);主動脈斑塊的病變分級，苜蓿總皂苷提取物明顯降低粥樣硬化面積，與模型組比較有顯著性差異(P< 0.05)。冠狀動脈病變分級，苜蓿總皂苷提取物能明顯降低AS病變發(fā)生率，減輕斑塊對管腔的阻塞程度。結(jié)論苜?？傇碥仗崛∥锞哂薪笛?/p>

3、脂和抗動脈粥樣硬化的作用。 【關(guān)鍵詞】  苜蓿總皂苷提取物; 大鼠; 動脈粥樣硬化; 降血脂Abstract：ObjectiveTo observe the antiatherosclerotic and hypolipidemic effects in rats of alfalfa extract of total saponins. MethodsThe atherosclerosis model in rats was set up by high fat diet in combination with blood vessel wall calcium overload

4、and endothelial injury.Bloodfat levels(TC，TG，LDLC , HDLC and AI)in serum were measured by ultraviolet spectrophotometer.The rats were sacrificed and the aorta, heart, liver and renal were collected for pathological changes. ResultsAlfalfa extract of total saponins could significantly decrease the co

5、ntents of serum TC，TG , AI and LDLC，and reduce the score of pathological changes of aorta, heart, liver and renal，while the level of HDLC was increased as compared with those of model group(P<0.05 or P<0.01). Coronary artery lesion classification, total saponins of alfalfa extract could signif

6、icantly reduce the incidence of AS lesions, alleviate the degree of luminal obstruction, compared with the model group,there was significant difference.ConclusionThe results indicate that alfalfa extract of total saponins can inhibit experimental hyperlipidemia,and prevent the formation of atheroscl

7、erosis.Key words： Total saponins of alfalfa extract; Atherosclerosis; Antiatherosclerotic苜蓿為豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。性味：苦，平，主要功能為“清脾胃、利大小腸，下膀胱結(jié)石”。本草綱目記載苜蓿“安中利入，可久食。利五臟、輕身健人?！泵耖g常有“用飼牛草，嫩時人兼食之”之說。在我國中部、西部、華北廣大地區(qū)，人們常摘苜蓿嫩草入菜。自古以來，苜蓿既可以作為食物入菜充饑，又可以作為藥物以療疾患。苜蓿總皂苷提取

8、物不僅對于高脂血癥有治療作用，且由于毒性低微，還可以作為中老年人長期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代謝紊亂和抗AS方面有其獨到之處1。一般降膽固醇制劑的作用部位在肝臟，是當膽固醇通過胃腸道吸收進入血液達到肝臟后才起作用。而苜蓿提取物降膽固醇的機理是在胃部阻止外源性膽固醇在胃腸道吸收，同時促進內(nèi)源性膽固醇和膽汁的排泄，使血清磷脂濃度降低，血漿蛋白在體內(nèi)分布正常，并能有效地控制血漿膽固醇和甘油三酯，從而避免了對肝臟損害的不良反應(yīng)，使苜蓿提取物的開發(fā)具有更大的前景。國外對其展開研究，但是國內(nèi)研究較少。本實驗就苜蓿提取物作為藥物在抗大鼠動脈粥樣硬化和降血脂方面的作用進行研究。1 材料與儀器1.1

9、受試藥物苜?？傇碥仗崛∥铮芍猩绞兄薪∷幬镅芯克邢薰咎峁?，批號：060828，061010。加蒸餾水配成所需濃度，4保存?zhèn)溆谩?.2 藥品和試劑絞股藍總苷片，由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供，批號：E6A003，規(guī)格：每片含絞股藍總苷20 mg，藥片粉碎后加蒸餾水配成所需濃度，4保存?zhèn)溆?丙硫氧嘧啶片，由上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司提供。批號：070901，規(guī)格：每片含丙硫氧嘧啶50 mg;維生素D3注射液，由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供，批號：080401，規(guī)格：7.5 mg/ml?？偰懝檀?CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)測定試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)

10、測定試劑盒，批號分別為011M042、010M050、012L028、012L028，均由上海名典生物工程有限公司提供;膽固醇，由上?？迫鹕镉邢薰咎峁?戊巴比妥鈉，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號：20071019;食用豬油，由宜昌雙匯食品有限責任公司提供。1.3 儀器Spctrumlab 53 power紫外分光光度計，上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品;TB718E組織自動包埋機，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供;TC120S組織自動脫水機，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供;RM2135石蠟切片機，德國Leica公司產(chǎn)品;HM525冰凍切片機，德國Microm公司產(chǎn)品;802B型臺式離心機，上海安亭科學(xué)儀器

11、廠;電子精密天平，奧豪斯公司;恒溫水浴鍋，北京市醫(yī)療設(shè)備廠提供;WH1微型旋渦混合儀，上海瀘西分析儀器廠。1.4 動物Wistar大鼠，SPF級，體質(zhì)量(200±10)g，雄性，由湖北省實驗動物研究中心提供，許可證號：SCXK(鄂)20030005。2 方法1，22.1 造模取雄性大鼠50只，每只大鼠右下肢肌肉注射維生素D3 3×105U/kg，并給予高脂飼料(2%膽固醇，0.5%膽酸鈉，3%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，94.3%基礎(chǔ)粉末飼料，維生素D3粉劑1.25×106 U/kg)，7 d后行球囊損傷手術(shù)。另取10只作為空白對照，給予普通飼料。球囊損傷手術(shù)：動

12、物用戊巴比妥鈉(35 mg/kg體重)腹腔麻醉，仰臥固定，皮膚消毒，正中切開頸部皮膚，分離左側(cè)頸總動脈，結(jié)扎遠心端，插入球囊，進入約8 cm，球囊內(nèi)注入0.2 ml生理鹽水，向回拉動34 cm，放水再進入約8 cm，注水、回拉，共3次。拔出球囊，層縫合皮下組織、皮膚。消毒切口皮膚，切口處灑適量注射用青霉素粉劑。術(shù)后連續(xù)7 d給予肌肉注射青霉素，切口處用碘酒消毒。2.2 分組及給藥術(shù)后按體質(zhì)量隨機分為5組。苜?？傇碥崭邉┝拷M：苜?？傇碥仗崛∥?.7 g/kg;苜蓿總皂苷中劑量組：苜?？傇碥仗崛∥?.35 g/kg;苜?？傇碥盏蛣┝拷M：苜?？傇碥仗崛∥?.18 g/kg;陽性組：絞股藍總苷片56

13、mg/kg;模型組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予高脂飼料;空白組：等體積蒸餾水，灌胃同時給予普通飼料。按體質(zhì)量1.0 ml/100 g灌胃，1次/d，連續(xù)給藥90 d。2.3 取樣及檢測指標末次給藥后，禁食不禁水12 h，斷頭取血，3 000 r/min離心15 min，分離血清。用紫外分光光度計測定血清總膽固醇(TCH) (PAP法)，甘油三酯(TG)(PAP法)和高密度脂蛋白(HDLC)(PTGMg2+ PAP法)的含量;并計算低密度脂蛋白(LDLC)的含量和動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)。分離主動脈，縱行切開，0.9%生理鹽水沖洗干凈，蘇丹染色，照相，以百分率法算出斑塊面積占動脈壁總面積的百分率

14、，按分級法統(tǒng)計主動脈病變級別。計量資料以組間t檢驗進行統(tǒng)計比較，等級資料以秩和檢驗進行統(tǒng)計比較，百分率以卡方檢驗。主動脈斑塊分級標準：0級內(nèi)膜表面光華，無奶油色變化，即無斑塊;0.5級內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化，但無凸出于表面的斑塊;1級有明顯的奶油色凸起斑塊，面積小于3mm2;2級斑塊面積大于3mm2;3級有許多大小不等的斑塊，有的融合成片，大塊的斑塊面積超過3mm2;4級動脈內(nèi)膜表面幾乎為全為融合的斑塊所覆蓋。主動脈用10%福爾馬林溶液固定36 h后，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，在切片機上橫斷面制成5 m厚連續(xù)切片。HE染色片隨機選取10個視野測定主動脈內(nèi)膜厚度，內(nèi)膜/中膜厚度比值。分離心

15、臟，用10%的福爾馬林固定，再將心臟橫切成3塊，每塊冰凍切片至少兩片，用蘇丹及蘇木素染色，每個切片一般都觀察10個動脈斷面并按下列標準分級：0級動脈內(nèi)膜無脂質(zhì)浸潤;0.5級動脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤;1級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/4;2級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2;3級內(nèi)膜斑塊占血管腔面積的1/2以上;4級斑塊幾乎堵塞整個管腔。     10-08-24 16:35:00     編輯：studa203 結(jié)果3.1 苜蓿總皂苷提取物對血脂的影響苜?？傇碥崭?、中劑量組使高脂血癥大鼠的血清TCH、TG、LDLC水平明顯下

16、降，而HDLC水平明顯上升，AI明顯下降，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)，與絞股藍總苷片組比較無顯著性差異(P>0.05)。苜?？傇碥盏蛣┝拷M對高脂血癥大鼠的血清TCH、TG、LDLC水平和AI呈下降趨勢，HDLC水平呈上升趨勢，但與模型組比較無顯著性差異(P>0.05)，與絞股藍總苷片組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見表1。表1 苜?？傇碥仗崛∥飳ρ挠绊?.2 主動脈病變情況3.3 苜?？傇碥仗崛∥飳跔顒用}粥樣硬化病變發(fā)生率及粥樣硬化病變程度的影響苜?？傇碥仗崛∥锔鲃┝拷M可使冠狀動脈病變分級及AS病變發(fā)生率降低，苜蓿總皂苷提

17、取物各劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01或P<0.001)，苜蓿總皂苷提取物各劑量組與絞股藍總苷片組比較無顯著性差異(P>0.05)。見表4。表4 苜?？傇碥仗崛∥飳跔顒用}粥樣硬化病變發(fā)生率及粥樣硬化病變程度的影4 討論動脈粥樣硬化是大、中動脈內(nèi)膜出現(xiàn)含膽固醇、類脂肪等的黃色物質(zhì)，多由脂肪代謝紊亂、神經(jīng)血管功能失調(diào)引起3。隨著人們生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變，該病已成為我國發(fā)病死亡的主要原因之一。其病理變化主要累及體循環(huán)系統(tǒng)的大型彈力型動脈(如主動脈)和中型肌彈力型動脈(以冠狀動脈和腦動脈罹患最多)，受累動脈的病變從內(nèi)膜開始，先后有多種病變同

18、時存在，包括局部有脂質(zhì)和復(fù)合糖類積聚，出血和血栓形成，纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著，并有動脈中層的逐漸退化和鈣化?，F(xiàn)代細胞分子生物學(xué)技術(shù)顯示，病變都具有平滑肌細胞增生，大量膠原纖維、彈力纖維和蛋白多糖等結(jié)締組織基質(zhì)形成，以及細胞內(nèi)外脂質(zhì)積聚的特點。所以控制高血脂對于治療動脈粥樣硬化是非常重要的途徑3。目前國內(nèi)外在治療AS疾病中運用最多的是他汀類4,臨床發(fā)現(xiàn)長期服用這些化學(xué)降脂藥物可發(fā)生多種不良反應(yīng)如對肝、腎功能有一定損害作用,嚴重時甚至危及人體生命安全;具有用藥漸降,停藥漸升弊端。所以國外正在研究免疫治療動脈粥樣硬化，但仍在實驗階段4。天然中草藥防治高脂血癥及抗動脈粥樣硬化的研究工作正日益受到國內(nèi)外

19、醫(yī)學(xué)界的重視,大量藥理研究及臨床報道業(yè)已證明中草藥具有一定的調(diào)脂作用和抗動脈粥樣硬化作用,且毒副作用少5。中藥苜蓿無毒性，一直以來，作為食物入菜充饑或飼料喂養(yǎng)牲畜，在防治血脂代謝紊亂和抗AS方面有其獨到之處。國外對其展開了研究，但是國內(nèi)研究較少。動脈粥樣硬化按其臨床表現(xiàn) AS屬于中醫(yī)“痰濁”“血淤”的范疇，“痰凝”“血淤”是其主要病理改變。脾虛失運是形成 AS痰濁的主要內(nèi)因。飲食不當是促成AS痰濁的重要外因。年老體衰，天癸將竭，腎氣漸衰。 腎陽衰則心陽不振，心氣虧虛。腎陰不足則不能滋養(yǎng)五臟。臟腑功能減退，鼓動無力，氣血津液失于溫煦，不能運行， 則致氣虛、氣滯 、痰聚、血淤，諸因素損傷脈絡(luò)，并與脈絡(luò)相搏結(jié)，著而不去，終損傷脾胃， 致運化失健，水濕津液停滯，聚而成痰，痰阻脈絡(luò)，氣血運行不暢，致氣滯血淤。痰、濕、淤也正是多臟虛損( 其中主要是脾、 肝、 腎的虧虛)、功能失調(diào)的產(chǎn)物。因而脾、肝、腎三臟虛損及功能失調(diào)，是動脈粥樣硬化發(fā)生的根本所在6，7?；贏S的中醫(yī)病因病機，苜蓿通過清脾胃達到祛痰除濕的作用;通過利大小腸達到潤腸清血的目的;通過利五臟氣血津液有力運行