血清糖化蛋白四氮唑藍測定法

1、血清糖化蛋白四氮唑藍測定法1. 實驗原理血清糖化蛋白（即：果糖胺）是一種大分子酮胺類化合物。堿性條件下可將四氮唑藍還原成紫色甲月替，其生成量與血清果糖胺濃度成正比。用比色法 在 540mm（ 530-550mm ）、以 糖 化 血 清 蛋 白 作 校 準(zhǔn) 物 測 出 反 應(yīng) 中 甲 月替 的 生 成量從而得出血清果糖胺的濃度。2. 標(biāo) 本 ：2.1病人準(zhǔn)備：無特殊。2.2 類型：血清、肝素或 EDTA處理的血漿。應(yīng)使用新鮮標(biāo)本。標(biāo)本必須避光保 存 ！3. 標(biāo)本存放：標(biāo)本在 28可穩(wěn)定 7天，20保存至少穩(wěn)定 6個月。4. 標(biāo)本運輸：常溫條件下保存運輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本溶血、細菌污染的標(biāo)

2、本。6. 實驗材料6.1試 劑南 京 波 因 特 GSP 測 定 試 劑 盒 （ 試 劑 1 × 70ml ）6.1.1試劑組成：硝基四氮唑藍、碳酸鹽、穩(wěn)定劑。6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑在 28保存，自生產(chǎn)日起可穩(wěn)定 12 個月。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.5注意事項：試劑和樣品可因儀器要求不同，按比例增減；間隔時間可按儀器不同進行調(diào)整，但為減少樣本中還原物質(zhì)的干擾，延遲時間不應(yīng)低于300 秒。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑6

3、.2 校準(zhǔn)品：使用南京波因特提供的糖化血清蛋白校準(zhǔn)品對自動分析儀進行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。6.3質(zhì)控品：具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。7. 儀器：貝克曼 AU680 生化分析8. 操作步驟8.1項目基本參數(shù)：參見 AU680 生化分析儀項目測定參數(shù).SOP 文件8.2儀器操作步驟：參見 AU680 生化分析儀操作規(guī)程.SOP 文件9. 檢驗結(jié)果的判斷與分析：10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平 I 與 II 質(zhì)控做為未知標(biāo)本進行分析，以 2S 為質(zhì)控警告限，3S 為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SO

4、P 文件。11. 計算方法：南京波因特提供的糖化血清蛋白校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié) 果 可 報 告 范 圍 內(nèi) ， 儀 器 直 接 報 告 可 靠 的 檢 測 結(jié) 果 ， 以 mmol/L報 告 。12. 參 考 值 范 圍 2 , 3 ： 1.40-2.95mmol/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義：血清糖化蛋白是葡萄糖與血清蛋白質(zhì)進行非酶促化作用而形成的一種具有酮胺結(jié)構(gòu)物質(zhì)，其生成量與血糖濃度有關(guān)。糖尿病人血清果糖胺含量明顯高于正常及非糖尿病人，血清果糖胺的代謝周期與血清蛋白相同，半衰期為 17 天左右，在

5、 1-3 周內(nèi)發(fā)生代謝變化，因此，測定血清果糖胺可反映被側(cè)前 10-20 天內(nèi)連續(xù)變化的血糖濃度的平均水平。實驗研究表明：血清果糖胺是糖尿病診斷、病情監(jiān)測和治療過程中療效觀察的一項重要指標(biāo)。14. 操作性能14.1線 性 范 圍 ： 0-6mmol/L 。14.2精密度：精密度的評估是根據(jù) NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU680批內(nèi)精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。 測定 GSP的變異系數(shù) <4.0% 。14.3方 法 學(xué) 比 較 ： 本 公 司 的 試 劑 盒 (y)與 某 商 品 化 試 劑 盒 (x)，同時對 20 個樣品進行

6、GSP檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計結(jié)果如下：y=0.95x+1.05mmol/L； r=0.992 。14.4靈 敏 度 ： 本 試 劑 的 檢 測 限 為 0.2mmol/L 。14.5病 人 結(jié) 果 可 報 告 范 圍 ： 0.2-6mmol/L。15.超 出 范 圍 結(jié) 果 處 理 ： 本 法 的 檢 測 范 圍 上 限 值 為 6mmol/L。當(dāng)樣品測定值超 過 上 限 時 ，應(yīng) 將 樣 品 用 9g/L 氯 化 鈉 溶 液 作 1+1 稀 釋 ，重 新 測 定 ，結(jié) 果 乘 以 2 。16. 病危報警值的處理：無。17. 方法局限性17.1本 法 的 檢 測 范 圍 上 限 值 為 6mmol/L 。 當(dāng) 樣 品 測 定 值 超 過 上 限 時 ， 應(yīng) 將 樣品 用 9g/L 氯 化 鈉 溶 液 作 1+1稀釋，重新測定，結(jié)果乘以 2。17.2干