乳豬原料檢測(cè)方法匯編-六和中心化驗(yàn)室內(nèi)部資料

1、 山東六和集團(tuán)中心化驗(yàn)室內(nèi)部資料 第一部分 :乳豬料用原料檢測(cè)方法 山東六和集團(tuán)技術(shù)部編輯2006-01-05目 錄1: 飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定 3 2: 油脂碘價(jià)的測(cè)定 4 3: 油脂的酸價(jià)及過(guò)氧化值的測(cè)定 . 6 4: 魚(yú)粉中酸價(jià)的測(cè)定 . 8 5: 乳清粉中乳糖的測(cè)定 . 9 6: 油脂 TBA 值的測(cè)定方法 . 11 7: 嘔吐毒素 (DON的檢測(cè) ELISA 法 . 13 8: 黃曲霉毒素的測(cè)定 ELISA 法 . 18 9: 魚(yú)粉中組胺的測(cè)定 . 22 10:揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 (VBN . 24 11:飼料中免疫球蛋白 lgG 的測(cè)定 . 25 12:玉米副產(chǎn)品中二氧化硫殘留量的

2、測(cè)定 . . 29 13:魚(yú)粉中脲醛聚合物的鑒別 . 30 14:谷物中淀粉含量的測(cè)定 . 32 15:次粉中泥沙及礦物質(zhì)的測(cè)定 . 35 16:鏡檢過(guò)程中的定性實(shí)驗(yàn) (魚(yú)粉、 肉骨粉、 玉米蛋白粉、 豆類(lèi)蛋白粉、 大米蛋白粉 36 17:淀粉糊化度分析方法 . 39 18:大豆制品中尿素酶活性分析方法 (PH增值法 . 42 19:油脂定性試驗(yàn) . 43 20:乳糖測(cè)定附表 . 45一 . 飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定1. 試劑:1.1 KOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液 C(KOH=0.01mol/L取 KOH 溶液 C(KOH=0.1mol/L 100ml,用乙醇(95%稀釋到 1 升,然后按 GB601標(biāo)定

3、。1.2 酚酞指示劑:2g/l乙醇溶液1.3 無(wú)水乙醇2 步驟:將平均樣品按四分法制得約 80g 樣品粉碎, 過(guò) 0.45mm 孔徑篩 (40目 ,立即稱(chēng)取 10g 樣品(精確到 0.01g ,于 150ml 具塞三角瓶?jī)?nèi), 加 50ml 無(wú)水乙醇,加塞振動(dòng) 10分鐘,過(guò)濾,并用無(wú)水乙醇洗 3次, 每次 15ml ,然后加酚酞 3滴,用 0.01mol/lKOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到 溶液呈微紅色,同時(shí)取 90ml 乙醇作空白。3計(jì)算 :脂肪酸值 (mgKOH/100g按下式計(jì)算(V-V 0×C ×56.1脂肪酸值 ×100m式中:V -樣品耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積, ml

4、V 0空白耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積, mlC -KOH 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度, mol/lm -樣品質(zhì)量 ,g二、油脂碘價(jià)的測(cè)定1 試劑與溶液1.1 韋氏液的配制:稱(chēng)取三氯化碘 7.9g 和純碘 8.7g 分別溶于冰乙酸 中,合并兩液,再用冰乙酸稀釋至 1L ,貯于棕色瓶?jī)?nèi)。 1.2 KI 溶液 150g/L1.3硫代硫酸鈉標(biāo)液滴定溶液 C (NaS 2O 3 =0.1mol/L 1.4 三氯甲烷 CHCl 3 AR 2 步驟:按附表稱(chēng)取試樣 (準(zhǔn)確至 0.0002g 于干燥的碘量瓶中,加 20ml CHCl 3溶解試樣,加 25.00ml 韋氏液立即加塞,以 KI 溶液封口,搖勻 后, 在 20&#

5、177;5條件下, 置黑暗處 30min (碘價(jià)在 130以上時(shí)放置 1h , 到時(shí)立即加入 KI 溶液 20ml 和水 100ml, 用 C (NaS 2O 3 =0.1mol/L硫 代硫酸鈉標(biāo)液滴定至淺黃色時(shí),加入 1ml 5g/L淀粉指示劑,滴定至 蘭色消失。同樣條件做空白兩個(gè),取平均值。 3 結(jié)果的表示和計(jì)算: 碘價(jià)按下式計(jì)算碘價(jià) =(V 0-V 1×C ×0.1269m×100式中:V 1試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積; mlV 2空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積; ml C -硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度; mol/L m -試樣的質(zhì)量; g0.1269

6、與 1.00ml 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 (C(NaS 2O 3 =1.000mol/L的相當(dāng)?shù)囊钥吮?示的碘的質(zhì)量。 附表:碘價(jià)數(shù)值與試樣用量 三、油脂的酸價(jià)及過(guò)氧化值的測(cè)定 一 . 油脂的酸價(jià)的測(cè)定 :1 試劑與溶液1.1乙醚 -乙醇溶液(2+1配制時(shí)加入酚酞,并用堿調(diào)至中性1.2 NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C (NaOH =0.1mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2 步驟將需用的錐形瓶烘干; 分別移取油脂上層、 中層、 下層液各 12ml置于烘干的錐形瓶中精密稱(chēng)量。加入 50ml 乙醚 -乙醇溶液使其溶解, 可以微熱,加入酚酞指示劑 3-5滴 , 然后用 NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定 至粉紅色,

7、且 1分鐘不褪色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白4計(jì)算 :酸價(jià) (mgKOH/g按下式計(jì)算酸價(jià) =C×(V-V0 ×56.1/m式中:C NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度; mol/LV 消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積; mlm 樣品的重量; g56.1與 1.00mlC (NaOH =1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊?mg 表示的 KOH 的質(zhì)量。 5說(shuō)明 :酸價(jià)是指中和 1.0g 油脂所含游離脂肪酸所需 KOH 的毫克數(shù) , 同一 種油若酸價(jià)高,表明油脂因水解而產(chǎn)生更多的游離脂肪酸。二 . 油脂的過(guò)氧化值的測(cè)定1原理:油脂氧化過(guò)程產(chǎn)生過(guò)氧化物,與 KI 作用,生成游離碘,以淀粉 作指示劑,用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶

8、液滴定。2試劑與溶液2.1三氯甲烷冰乙酸的混合液(4+62.2硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C (Na 2S 2O 3 =0.01mol/L2.3淀粉指示液 10g/L2.4碘化鉀 KI AR3 步驟:稱(chēng)取 2- 3g(準(zhǔn)確到 0.0002g 混勻的樣品,置于 250ml 烘干的碘 量瓶中,加入 30ml 三氯甲烷冰乙酸(4+6的混合液,使樣品完全 溶解,加入約 2g 的碘化鉀,緊密塞好瓶塞,并輕輕振搖 30秒鐘,然 后在暗處放置 3分鐘,取出加 100ml 水,搖勻,立即用的硫代硫酸鈉 標(biāo)準(zhǔn)溶 (C(Na 2S 2O 3 =0.01mol/L液滴定至淡黃色時(shí),加 1ml 淀粉指 示液(10g/L

9、,繼續(xù)滴定至蘭色消失為終點(diǎn),同樣條件做空白。 4計(jì)算:過(guò)氧化值(I 2%按下式計(jì)算過(guò)氧化值(I 2% =(V 1-V 0×C ×0.1269×100/m式中: V1 -樣品消耗硫代硫酸鈉的體積; mlV 0 -空白消耗硫代硫酸鈉的體積; mlC -硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度; mol/Lm -樣品的重量; g0.1269與 1.00mlC (Na 2 S2O3=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮淼?I2的質(zhì)量 g5 過(guò)氧化值二種單位的換算 :meq/kg = I2 % * 78.9四、魚(yú)粉中酸價(jià)的測(cè)定1 試劑與溶液1.1乙醚 -乙醇溶液(2+1配制時(shí)加入酚酞,并用堿調(diào)

10、至中性 1.2 NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C (NaOH =0.05mol/L 1.3酚酞指示劑 1g/L 2 步驟稱(chēng)取 23g (準(zhǔn)確到 0.0002g 魚(yú)粉于干燥帶塞的三角瓶中,加 40ml 乙醚與乙醇(2+1混合溶液,在振蕩器上振搖 30min ,干過(guò)濾 于 150ml 三角瓶中, 并用少量乙醚乙醇溶液洗滌三角瓶三次, 加 3滴 的酚酞, 用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 C(NaOH =0.05mol/L滴定至粉紅色, 半 分鐘內(nèi)不褪色為終點(diǎn),同樣條件做空白。 3 結(jié)果的表示和計(jì)算: 酸價(jià)(mgKOH/g按下式計(jì)算酸價(jià)(mgKOH/g = 56.1×C ×(V-V 0m 式中:C N

11、aOH 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度; mol/L V 魚(yú)粉消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積; ml V 0空白消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積; ml m 魚(yú)粉樣品的質(zhì)量; g56.1與 1.00mlNaOH 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 C(NaOH =1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊?mg 表示的 KOH 的質(zhì)量。 mg五、乳清粉中乳糖的測(cè)定1 試劑與溶液1.1酒石酸銅甲液:34.639gCuSO 4溶于水,加入 0.5ml 濃 H 2SO 4,稀釋 到 500ml 。酒石酸銅乙液:173g 酒石酸鉀鈉,加 50gNaOH ,稀釋到 500ml 。 1.2 氫氧化鈉溶液 c(NaOH= 1mol/L1.3硫酸鐵溶液 50g/L1.4高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)

12、滴定溶液 c (1/5 KMnO 4 =0.1mol/L2 步驟 :稱(chēng) 2g 樣品(準(zhǔn)確到 0.0002g 于 200ml 燒杯中,加 50ml 水,電 爐加熱到 80,加酒石酸銅甲液 10ml ,加 NaOH (1mol/L 5ml ,攪 拌后放置到室溫,用水定容于 250ml 容量瓶中,搖勻,靜止 1h 后干 過(guò)濾。吸取濾液 25.00ml 于三角瓶中,加 25ml 酒石酸銅甲液,再加 25ml 酒石酸銅乙液, 在電爐上加熱并煮沸 2min (要保證在 3min 內(nèi)煮 沸 , 取下過(guò)濾, 并用水洗滌沉淀 45次, 之后將濾紙及沉淀物 (Cu 2O 一起放入三角瓶中,加入硫酸鐵(50g/L

13、25ml ,再加 25ml 水,用玻 璃棒攪拌并微熱到看不到 Cu 2O 的紅色為止,然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴 定溶液 (c (1/5 KMnO 4 =0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到呈微紅色為終點(diǎn)。 同樣條件做空白3結(jié)果的表示和計(jì)算 :乳糖含量按下式計(jì)算a Cu 2O=(V-V 0×C ×71.54b 由 Cu 2O 的質(zhì)量查表求乳糖的質(zhì)量 m 乳 :c 樣品中乳糖的含量 :乳糖 %=m 乳 /m樣 ×100 式中:m 乳 樣品中乳糖的質(zhì)量; gm 樣 -樣品的質(zhì)量;V -樣品消耗 KMnO 4的體積; ml V 0 -空白消耗 KMnO 4的體積; ml 71.5

14、4常數(shù);C -KMnO 4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度, mol/L六、油脂 TBA 值的測(cè)定方法1原理油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發(fā)生酸敗反應(yīng),分解出醛、 酸之類(lèi)的化合物。 丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種, 它能與硫代巴比妥酸 (TBA作用生成粉紅色化合物,在 532nm 波長(zhǎng)處有吸收高峰,利用此 性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量,從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。2試劑2.1硫代巴比妥酸 (TBA水溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取 TBA 0.288g溶于水中,并 稀釋至 100ml (如 TBA 不易溶解,可加熱至全溶澄清,然后稀釋至100ml ,相當(dāng)于 0.02mol/L;2.2 三氯乙酸混合液:準(zhǔn)確稱(chēng)取三氯乙酸(分析純 7.5g 及

15、0.1g EDTA ,用水溶解,稀釋至 100.00ml ;2.3 氯仿(分析純 ;2.4 丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱(chēng)取 0.315g 1, 1, 3, 3-四乙氧基丙烷,溶 解后稀釋至 1000.00ml ,此溶液每 ml 相當(dāng)于丙二醛 100g ,置于冰 箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取 10ml ,稀釋至 100.00ml ,此溶液每 ml 相當(dāng)于丙 二醛 10微克 (g ,備用。3操作步驟3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取每 ml 相當(dāng)于丙二醛 10g 的標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.0、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6ml 置于納氏比色管中,加水至總體積為 5ml ,加入 5ml TBA 溶液,然后按

16、樣品測(cè)定步驟進(jìn)行,測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線。3.2樣品測(cè)定:準(zhǔn)確稱(chēng)取融化均勻的油脂樣品 30.0g , 置于 100ml 具塞三角瓶?jī)?nèi), 加入 20.0ml 三氯乙酸混合液,振搖半小時(shí)(保持油脂融溶狀態(tài),如 冷結(jié)可在 70水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖用雙層濾紙過(guò) 濾,除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過(guò)濾一次。準(zhǔn)確移取上述濾液 5.0ml 置于 25ml 比色管內(nèi),加入 5.0 mlTBA溶液,混勻,加塞,置于 90水浴內(nèi)保溫 40min ,取出,冷卻 1h , 移入小試管內(nèi), 離心 5min , 上清液傾入 25ml 納氏比色管中, 加入 5.0ml 氯仿,搖勻,靜置,分層,吸出上清液于 53

17、2nm 波長(zhǎng)比色,對(duì)照標(biāo)準(zhǔn) 曲線得到微克數(shù)(同時(shí)作空白試驗(yàn) 。4 計(jì)算丙二醛含量(mg/kg按下式計(jì)算丙二醛含量(mg/kg =m C 520式中 :C -從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù) (ugm-樣品質(zhì)量(g 七 、 嘔吐毒素 (DON的檢測(cè) ELISA 法測(cè)試前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明在 2 8冷藏不要凍結(jié)1. 簡(jiǎn)介 DON毒素脫氧瓜萎鐮菌醇(DON , 是單端孢菌素烯烴中的一種,它通常是 由生長(zhǎng)在谷類(lèi)物品(如小麥、玉米、大麥和秣草霉菌鐮紅菌素生成 的。脫氧瓜萎鐮菌醇的毒性效應(yīng)包括:嘔吐、不想進(jìn)食、胃腸炎、腹 瀉、免疫抑制和血液病。研究表明豬對(duì)脫氧瓜萎鐮菌醇很敏感。 當(dāng)脫氧瓜萎鐮菌醇含量 1ppm

18、時(shí),它們就拒絕進(jìn)食。其毒性也會(huì)對(duì)其他物種產(chǎn)生毒性效應(yīng), 各種物種對(duì)脫氧瓜萎鐮菌醇的敏感性各不相同。 研究表明脫氧瓜萎鐮 菌醇會(huì)使已加工食物發(fā)生問(wèn)題, 包括使可吃的谷類(lèi)制品產(chǎn)生臭味、 對(duì) 生面團(tuán)質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響。 因此, 精確測(cè)定可能含有脫氧瓜萎鐮菌醇 的食物和食品就現(xiàn)得十分重要。 FDA (美國(guó)食品和藥品管理局已經(jīng) 制定了脫氧瓜萎鐮菌醇含量的強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)。美國(guó)食品藥物管理局已經(jīng)頒布的 DON 毒素建議限量如下: 2. 方法原理本測(cè)試盒的測(cè)試原理是一種競(jìng)爭(zhēng)性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)試 方法(ELISA ,可準(zhǔn)確檢測(cè)出樣品中 ppm 級(jí)的 DON 毒素。樣品和標(biāo)準(zhǔn)控制液中游離的 DON 毒素與軛合物中的

19、 DON 毒素競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位置。 清洗后,加入底物,底物與軛合物反應(yīng)出現(xiàn)蘭色,蘭色越深表明 DON 毒素越少。 將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度, 以控制標(biāo)準(zhǔn)液的 透光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣品的透光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中 DON 毒素的準(zhǔn)確濃度。3. 貯存要求本試劑盒存放在 28時(shí),可以一直使用到標(biāo)簽上注明的到期日期。 4. 試劑與儀器4.1已提供的材料1. 48個(gè)包被了抗體的孔。2. 48個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔。3. 5瓶 1.5ml 濃度為 0、 0.25、 0.5、 1、 3 ppmDON 毒素控制標(biāo)準(zhǔn)液 (黃色標(biāo) 簽 。4. 1瓶 DON 毒素 -HRP 軛合物溶液 (蘭色標(biāo)簽 。5.

20、 1瓶 24ml 底物溶液 (綠色標(biāo)簽 。4.2需要但未提供的材料1 提取材料:a. 蒸餾水或去離子水。b. 100ml 量筒c. 150ml 的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗2. 粉碎機(jī)3. 稱(chēng)量為 525克的秤4. 帶 450nm 濾光片的微型孔閱讀器5. 200l 移液器6. 200l 吸咀7. 紙巾或等效的吸水材料8. 計(jì)時(shí)器9. 防水記號(hào)筆10. 洗瓶11. 移液器用的試劑槽12. 蒸餾水或去離子水13.C (1/2H 2SO 4 =1mol/L的硫酸終止液5. 注意事項(xiàng)1. 本測(cè)試盒不使用時(shí)應(yīng)在 28下存放。2. 不要使用過(guò)期的測(cè)試盒。3. 不要把不同測(cè)試盒中

21、的試劑混合使用。4. 遵守正確的移液技術(shù),包括取液前先用該液潤(rùn)洗一次。5. 放置時(shí)間與本說(shuō)明不一致時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。6. 測(cè)試盒應(yīng)先恢復(fù)到室溫狀態(tài) (1830 后才開(kāi)始使用。7. 避免測(cè)試盒在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。8. 不要使測(cè)試盒凍結(jié)。9. 待測(cè)樣品的 pH 值應(yīng)為 68。酸堿過(guò)大的樣品應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。應(yīng)將包括樣 品提取液在內(nèi)的所有廢液和實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行處理(如同已被 DON 毒素污染 一樣 。應(yīng)始終穿戴手套和其它防護(hù)服。10. 為了避免交叉污染,每個(gè)樣品應(yīng)使用清潔的吸咀和玻璃器皿,并在樣品 之間徹底清洗所有的玻璃器皿。6. 程序性的提示底物:底物隨時(shí)可用,底物為清亮的淺蘭色,如果變成了深蘭,則

22、棄去。使 用時(shí),只倒出所需量到試劑槽中, 未用完的不要再倒回試劑瓶中。 不使用時(shí)應(yīng)蓋 住試劑槽,以避免光的照射。7. 操作步驟7.1樣品制備和提取1. 待測(cè)樣品應(yīng)按公認(rèn)的采樣技術(shù)采集。 樣品應(yīng)磨碎并充分混合后再提 取。測(cè)試前,將樣品在 28存放。2. 將 30ml 硫酸緩緩注入 1000ml 水中,冷卻搖勻,配成的硫酸 (C (1/2H 2SO 4 =1mol/L終止液。3. 取 1份代表性樣品。研磨樣品至至少有 75%的樣品通過(guò) 20目的篩 子,顆粒尺寸大約相當(dāng)于細(xì)的速溶咖啡。4. 將 10克研磨過(guò)的樣品加入 50ml 水或去離子水中,用手或震蕩器 劇烈混合 15分鐘。5. 將靜置 2-3分

23、鐘,使一些物質(zhì)沉淀下來(lái)。6. 用濾紙過(guò)濾出至少 5ml 的提取液。收集該濾液即為樣品的待測(cè)液。7.2測(cè)試程序測(cè)試前應(yīng)將所有的試劑恢復(fù)至室溫(1830 。1. 從箔包中取紅色標(biāo)記的混合孔,放在孔架上。2. 取同樣數(shù)量的包被了抗體的孔。 把暫不使用的孔放回到箔包中, 并 重新密封,以保護(hù)抗體。在帶子的一端標(biāo)上“ 1” ,然后放到孔架上, 將有標(biāo)記的一端放在左邊。不要在孔的里面和底部寫(xiě)標(biāo)記。3. 在使用之前搖動(dòng)試劑瓶,混合每種試劑。4. 從蘭色標(biāo)簽的瓶?jī)?nèi)吸取 100l 軛合物加到每個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔 內(nèi)。5. 每次使用新吸咀,吸取 100l 控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品液按下列順序 加到紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi)6.

24、 用移液器吸入、排出 3次使孔內(nèi)溶液徹底混合,吸取 100l 加 到相應(yīng)的包被了抗體的孔內(nèi), 在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混 合 1020秒鐘,不要濺出試劑, 混合后于室溫下 (1830 放置 5分鐘 。棄去紅色標(biāo)記孔。7. 倒掉包被了抗體孔內(nèi)的溶液。 在每個(gè)孔內(nèi)加滿(mǎn)蒸餾水或去離子水, 再倒出,如此重復(fù) 5次,將板朝下,在吸水材料上拍擊以去除所有的 水滴。8.從綠色標(biāo)簽試劑瓶中倒出所需量的試劑到綠色試劑槽中。9.用移液器和新吸咀,吸取 100l 底物加到每個(gè)孔內(nèi),在平的表面 上將板前后滑動(dòng)確保充分混合 1020秒鐘。10. 混合后放置 2.5分鐘 。11.從試劑瓶中倒出所需量的硫酸 (C

25、(1/2H 2SO 4 =1mol/L終止液到試 劑槽中。12.吸取 100l 終止液加到每個(gè)孔內(nèi),在平的表面上將板前后滑動(dòng) 確保充分混合。13. 用干凈的布擦凈板底, 將板置于微型孔閱讀器于 450nm 濾光片下 讀數(shù)。由于氣泡會(huì)影響結(jié)果,應(yīng)削除溶液中氣泡。應(yīng)在加入紅色終止 劑后 20分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。14.用 Log/logit軟件計(jì)算結(jié)果。8. 特性參數(shù)檢出限:0.1 ppm(10次陰性樣品的平均值加 2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差 。定量檢測(cè)限:0.25 ppm(以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)表示 。定量范圍:0.25-2.5 ppm(大于 2.5 ppm 時(shí) , 見(jiàn)樣品制備和提取程序 八、黃曲霉毒素的測(cè)定 EL

26、ISA 法測(cè)試前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明在 2 8冷藏不要凍結(jié)1. 簡(jiǎn)介 黃曲霉毒素黃曲霉毒素是一種劇毒且致癌的物質(zhì), 它是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌 A 的某 些菌株產(chǎn)生的。黃曲霉毒素有四種類(lèi)型:B1, B2, G1和 G2。黃曲霉毒素 B1是毒 性最大且最常有的。最容易產(chǎn)生黃曲霉毒素污染的物質(zhì)是谷物、花生、棉子、高 梁和大多數(shù)的樹(shù)果。動(dòng)物食入過(guò)量黃曲霉毒素的影響從慢性健康直到死亡, 已經(jīng)證明黃曲霉毒素 能引起肝損壞或癌癥、降低奶和蛋的產(chǎn)出、免疫抑制和干擾再生效率。美國(guó)食品藥物管理局已經(jīng)規(guī)定了食品和飼料中最大黃曲霉毒素限量。因此, 準(zhǔn)確測(cè)定黃曲霉毒素的含量, 對(duì)于監(jiān)測(cè)可能發(fā)生黃曲霉毒素污染的食品和飼料的

27、 質(zhì)量來(lái)說(shuō),是非常重要的。測(cè)試程序包括仔細(xì)的采樣、化學(xué)提取、衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)和 定量分析。 2. 方法原理本 測(cè) 試 盒 的 測(cè) 試 原 理是 一 種 競(jìng) 爭(zhēng) 性 的 直 接酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 劑 測(cè) 試 方 法 (ELISA , 可準(zhǔn)確檢測(cè)出樣品中 ppb 級(jí)的黃曲霉毒素。 樣品和標(biāo)準(zhǔn)控制液中游離 的黃曲霉毒素與軛合物中的黃曲霉毒素競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位置。清洗后,加入底物, 底物與軛合物反應(yīng)出現(xiàn)蘭色, 蘭色越深表明黃曲霉毒素越少。 將其置于微型孔閱 讀器中可讀出透光度, 以控制標(biāo)準(zhǔn)液的透光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線, 將樣品的透光度與標(biāo) 準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素的準(zhǔn)確濃度。3. 貯存要求本試劑盒存放在 2

28、8時(shí),可以一直使用到標(biāo)簽上注明的到期日期。 4. 試劑與儀器4.1提供的材料4.2需要但未提供的材料a. 70%甲醇溶液b. 100ml 量筒c. 150ml 的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗5. 注意事項(xiàng)5.1 甲醇易燃, 其容器應(yīng)密閉并遠(yuǎn)離熱、 火花、 明火和煙。 如果吞下或吸入蒸氣, 它是有毒的。應(yīng)避免與皮膚接觸。5.2 本測(cè)試盒不使用時(shí)應(yīng)在 28下存放。5.3 不要使用過(guò)期的測(cè)試盒。5.4 不要把不同測(cè)試盒中的試劑混合使用。5.5 遵守正確的移液技術(shù),包括取液前先用該液潤(rùn)洗一次。5.6 放置時(shí)間與本說(shuō)明不一致時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。5.7 測(cè)試盒應(yīng)先恢復(fù)到室溫狀

29、態(tài) (1830 后才開(kāi)始使用。5.8 避免測(cè)試盒在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。5.9 不要使測(cè)試盒凍結(jié)。5.10應(yīng)將包括樣品提取液在內(nèi)的所有廢液和實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行處理(如同已被黃曲 霉毒素污染一樣 。應(yīng)始終穿戴手套和其它防護(hù)服。5.11為了避免交叉污染,每個(gè)樣品應(yīng)使用清潔的吸咀和玻璃器皿,并在樣品之 間徹底清洗所有的玻璃器皿。5.12待測(cè)樣品的 pH 值應(yīng)為 68。酸堿過(guò)大的樣品應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。關(guān)于 pH 值的調(diào) 整,請(qǐng)與 Neogen 代表或技術(shù)服務(wù)部門(mén)聯(lián)系。6. 程序性的提示K-蘭底物隨時(shí)可用,底物為清亮的淺蘭色,如果變成了深蘭,則棄去。使用 時(shí), 只倒出所需量到試劑槽中, 未用完的不要再倒回試劑瓶中。 不

30、使用時(shí)應(yīng)蓋住 試劑槽,以避免光的照射。7. 操作步驟7.1樣品制備和提取待測(cè)樣品應(yīng)按公認(rèn)的采樣技術(shù)采集。 樣品應(yīng)磨碎并充分混合后再提取。 測(cè)試 前,將樣品在 28存放。按以下程序進(jìn)行:1 將 7份分析級(jí)甲醇與 3份蒸餾水或去離子水混合配成 70%的甲醇溶液。2 將 30ml 硫酸緩緩注入 1000ml 水中, 冷卻搖勻, 配成硫酸 (C(1/2H 2 SO4=1mol/L的終止液。3取 1份代表性樣品。研磨樣品至至少有 75%的樣品通過(guò) 20目的篩子,顆粒尺 寸大約相當(dāng)于細(xì)的速溶咖啡。4把 5克研磨過(guò)的樣品加入到 25ml 70%的甲醇中,然后用力搖動(dòng) 15分鐘。 5用濾紙過(guò)濾出至少 5ml

31、的提取液。該濾液即為樣品的待測(cè)液。6該待測(cè)液即可用于測(cè)試。7.2測(cè)試程序測(cè)試前應(yīng)將所有的試劑恢復(fù)至室溫(1830 。1. 從箔包中取紅色標(biāo)記混合孔,放在孔架上。2. 取同樣數(shù)量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中,并重新密封, 以保護(hù)抗體。3. 在使用之前搖動(dòng)試劑瓶,混合每種試劑。4. 從蘭色標(biāo)簽瓶?jī)?nèi)吸取 100l 軛合物加到每個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi)。 棄去吸咀。5. 每次使用新吸咀,吸取 100l 控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品液按下列順序加到紅色標(biāo) 記的混合孔內(nèi)6. 用移液器吸入、排出 3次使孔內(nèi)溶液徹底混合,吸取 100l 加到相應(yīng)的包被 了抗體的孔內(nèi),在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合 1

32、020秒鐘,不要濺 出試劑, 混合后于室溫下 (1830 放置 2分鐘 。7. 倒掉包被了抗體孔內(nèi)的溶液。 在每個(gè)孔內(nèi)加滿(mǎn)蒸餾水或去離子水, 再倒掉, 如 此重復(fù) 5次,將板朝下,在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8. 從綠色試劑瓶中倒出所需量的試劑到試劑槽中。9. 用移液器和新吸咀,吸取 100l 底物加到每個(gè)孔內(nèi),在平的表面上將板前后 滑動(dòng)確保充分混合 1020秒鐘。10. 混合后放置 1.5分鐘 。11. 從試劑瓶中倒出所需量的硫酸 (C(1/2H 2 SO4=1mol/L終止液到試劑槽中。12. 用移液器吸取 100l 終止液加到每個(gè)孔內(nèi), 在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保 充分混合。13

33、. 用干凈的布擦凈板底,將板置于微型孔閱讀器于 450nm 濾光片下讀數(shù)。由于 氣泡會(huì)影響結(jié)果,應(yīng)削除溶液中氣泡。應(yīng)在加入終止液后 20分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。 14. 用 Log/logit軟件計(jì)算結(jié)果。8. 特性參數(shù)檢出限:2ppb(10次陰性樣品的平均值加 2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差 。 定量檢測(cè)限:5ppb(以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)表示 。 定量范圍:5-50 ppb(大于 50 ppb時(shí)應(yīng)稀釋 九 、 魚(yú)粉中組胺的測(cè)定原理簡(jiǎn)介 :魚(yú)粉中組胺用三氯乙酸提取,之后調(diào) PH=9,將游離的組胺用正戊 醇提取出,之后再用 HCl 反萃取,用偶氮試劑顯色。組胺 +三氯乙酸鹽 (溶于水 -PH=9-組胺 (溶于正戊醇 -

34、HCl-正戊醇 (組 胺溶于稀 HCl 1試劑與溶液1.1偶氮試劑的配制甲液:稱(chēng)取 0.5g 對(duì)硝基苯胺,加 5ml 鹽酸(1+1溶解,再加水釋到 200ml ,置 冰箱中(28度保存。乙液:亞硝酸鈉溶液 5g/l,臨用現(xiàn)配甲液 5ml 、乙液 40ml 混合后立刻使用。1. 2三氯乙酸 100 g/L1.3氫氧化鈉 250g/L1.4鹽酸 1mol/L1.5正戊醇 分析純1. 6碳酸氫鈉溶液 50g/L1.7磷酸組胺(Sigma 公司步驟2.1樣品處理稱(chēng)取 1-3克魚(yú)粉于具塞三角瓶?jī)?nèi), 加入 25.0ml 三氯乙酸 (100g/L 每隔 30分鐘搖動(dòng)一次, 提取 3小時(shí), 過(guò)濾, 取濾液 2

35、.00ml 或 1.00ml 于 15ml 試管內(nèi),加氫氧化鈉(250g/L 5滴,振蕩一下,再加 5ml 正戊醇振蕩 2分鐘,靜止分層(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加 2-3滴無(wú)水 乙醇 ,用移液槍小心吸取上清液(正戊醇層于 50ml 分液漏斗內(nèi), 下層沉淀再下層沉淀再分別用正戊醇 5ml 、 3ml 、 3ml 反萃取 3次。將 正戊醇全部收集到 50ml 分液漏內(nèi) , 分別用鹽酸 (1mol/L6 ml、 6 ml、3 ml反萃取 3次 , 收集水相(下層于 20ml 刻度試管內(nèi),用水定容 至刻度 (20.00ml,搖勻,吸取 1.00ml (或 2.00ml 鹽酸提取液于 10 ml 比色管中,

36、加入碳酸氫鈉溶液(50g/L 3.0ml 搖勻,振蕩下加 入偶氮試劑 3.0ml ,用水定容到刻度,室溫下顯色 10min ,用 1cm 比 色皿于 480nm 下測(cè)定吸光度。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線稱(chēng)取磷酸組胺樣品(Sigma 公司 2.7671mg ,置于 100ml 容量瓶 內(nèi),用水溶解并定容到刻度,此液組胺含量為 10ug/ml,分別取此標(biāo) 液 0.00、 1.00、 2.00、 4.00、 6.00ml 于 5支 10ml 比色管內(nèi),各加鹽 酸(1mol/L 1.0ml ,振蕩,用水定容到刻度,搖勻后放置 10min (室 溫下 ,用 1cm 比色皿于 480nm 下測(cè)吸光值。參比液:試劑空白

37、3計(jì)算魚(yú)粉中組胺按下式計(jì)算公式: 實(shí)例 :魚(yú)粉 2.3455,取三氯乙酸提取液 1.00ml ,吸光度 A=0.257標(biāo)準(zhǔn)曲線 :A=0.012380*C+0.01310計(jì)算 : C =(A-0.0131/0.012380=19.70ug組胺 =(19.70*100/(2.3455/25*(1.0/15*1000=315mg/100g=3150ppm應(yīng)用:進(jìn)口白魚(yú)粉:組胺 <10mg/100g(1-5mg/100g進(jìn)口水產(chǎn)級(jí)蒸汽魚(yú)粉 <100mg/100g(50mg/100g優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)魚(yú)粉 <150mg/100g(50-150mg/100g新鮮度差的魚(yú)粉 (國(guó)產(chǎn) , 進(jìn)口 組胺

38、 200340mg/100g用于乳豬料的魚(yú)粉 組胺 <100mg/100g十 、 揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 (VBN原理簡(jiǎn)介 :蛋白質(zhì)分解時(shí),氨基酸脫胺基生成氨,氨基酸脫羧基生成胺,氨 與胺 (揮發(fā)性的胺 在堿液 (氧化鎂 中被蒸發(fā)出來(lái), 用硼酸吸收, 用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸反滴 定,測(cè)出其含量。1試劑與溶液1.1氧化鎂溶液 10g/L2. 步 驟稱(chēng)取 5-10g 樣品于 250ml 具塞三角瓶?jī)?nèi), 加入 100.0ml 水, 振蕩 30min ,過(guò)濾,取慮液 10.00ml ,按粗蛋白蒸餾操作,但加入的堿為 氧化鎂溶液(10g/L 7-10ml 。3. 計(jì)算:揮發(fā)性鹽基氮(VBN (mg/100g按下式

39、計(jì)算VBN (mg/100g = C(V-V 0 *14/m*(10/100 *100 實(shí)例 :魚(yú)粉樣品 8.6706g , V HCl =0.0200mol/L V=3.93ml V0=0.15ml VBN=0.0200*14* (3.93-0.15/8.6706*(10/100*100 =122.1mg/100g應(yīng)用 :新鮮度好的魚(yú)粉 VBN<100mg/100g(40-80 mg/100g新鮮度差的魚(yú)粉 VBN>150mg/100g(180-350 mg/100g乳豬料魚(yú)粉 VBN<100mg/100g十一 、 飼料中免疫球蛋白 lgG 的測(cè)定 (高效液相色譜法 1 范

40、圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法儀測(cè)定飼料中免疫球蛋白 IgG 含量的方法本標(biāo)準(zhǔn)適用配合飼料、濃縮飼料、含 Ig 的飼料原料(包括血漿 蛋白粉、雞蛋粉等中免疫球蛋白 IgG 的測(cè)定本方法檢出限:當(dāng)取樣 1g ,稀釋至 25ml ,進(jìn)樣量 20ul ,檢出濃 度為 0.2mg/ml2 原理根據(jù)高效親和色譜的原理,在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白 IgG 與配基連接, 在 PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白 IgG 。 3 試劑除非另有說(shuō)明, 在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑, 水為去離 子水或相當(dāng)純度的水,應(yīng)符合 CB/T6682三級(jí)用水的規(guī)定3.1磷酸二氫鉀3.2 磷酸氫二鉀3.3流動(dòng)相

41、A :PH6.5, 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液3.4流動(dòng)相 B :PH2.5, 0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液3.5 IgG儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液:稱(chēng)取 IgG 標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma 公司 0.0100g ,用流動(dòng)相 A (3.3溶 解并定容至 10ml ,搖勻,濃度為 1.0mg/ml3.6 IgG工作標(biāo)準(zhǔn)溶液:取 IgG 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相 A (3.3稀釋成含 IgG 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。4 儀器和設(shè)備4.1 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備4.2 PH計(jì)4.3超純水裝置4.4勻漿機(jī)4.5高效液相色譜儀:具紫外檢測(cè)器和梯度洗脫裝置5 試樣制備按

42、GB/T14699飼料采樣,選取飼料樣品至少 500g ,四分法縮減 至少 100g , 磨碎, 通過(guò) 0.28 um(80目 孔篩, 混勻, 裝入密閉容器中, 避光低溫保存?zhèn)溆谩? 分析步驟6.1試樣處理:稱(chēng)取一定量試樣(精確至 0.0001 ,配合飼料、濃縮飼料時(shí),稱(chēng) 取試樣 25g;血漿蛋白粉稱(chēng)取試樣 0.1g ;雞蛋粉稱(chēng)取試樣 0.5g ,于 茄形瓶中,準(zhǔn)確加入 25ml 流動(dòng)相 A (3.3 ,用勻漿機(jī)勻漿 5分鐘, 取溶液 10ml 于離心管中, 以 3500 r/min離心 10min , 通過(guò) 0.45um 微 孔濾膜后進(jìn)樣6.2 測(cè)定:色譜柱:Pharmacia HI-Tra

43、p Protein G柱, 1 ml波長(zhǎng):280nm進(jìn)樣量:20ul梯度洗脫見(jiàn)表 1表 1 6.2. 3測(cè)定先用 5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱,再用 10倍柱體積 流動(dòng)相 A (3.3平衡柱,按洗脫程序進(jìn)行洗脫。分別取 6.1試樣處理液和 3.6標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測(cè)定,以色譜峰面積積 分值做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)定量。7 結(jié)果計(jì)算7.1試樣中 IgG 含量 (g/100g按下式計(jì)算:P 1×V ×c ×V st ×100P st ×m ×Vi ×V 1×100式(1中:-試樣中 IgG 含量, g/100g;=Vst 標(biāo)

44、準(zhǔn)工作液進(jìn)樣體積, ul ;P st 試樣峰面積值;Vi -試樣進(jìn)樣體積; ul ;V -試樣體積, ml ;m -稱(chēng)取試樣的質(zhì)量, g ;7.2 平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平行值表示,保留小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。8 重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的測(cè)定值的絕對(duì)差值 不得超過(guò)算術(shù)平均值的 15%。十二 、 玉米副產(chǎn)品中二氧化硫殘留量的測(cè)定 方法 1:GB/T5009.34-1996方法 2:稱(chēng)取樣品 10g 于三角燒瓶?jī)?nèi) , 加入少量水 (約 10ml, 加入 20ml 濃鹽 酸 ,5g 鋅粉 , 瓶口用乙酸鉛試紙?jiān)o , 放在沸水浴上加熱 , 若瓶中變黑則 含 SO 2 , 標(biāo)準(zhǔn)樣品可用無(wú)

45、水亞硫酸鈉 (Na2SO 3 代替 , 同上操作 , 根據(jù)黑班 的大小 , 確認(rèn)含量 .方法 3:稱(chēng)樣品 20g 于具塞三角瓶?jī)?nèi) , 準(zhǔn)確加入 100ml 水 , 振蕩 5分鐘 , 靜止 待瓶?jī)?nèi)液體澄清后 , 準(zhǔn)確吸取上清液 20ml, 置于 250ml 碘量瓶?jī)?nèi) , 加入 1mol/L NaCl 25ml, 振蕩 2分鐘 , 靜止 10分鐘 , 然后加入硫酸 (1+310ml,邊 加 邊 振 蕩 , 之 后 加 淀 粉 (10g/l1ml,用 碘 標(biāo) 準(zhǔn) 滴 定 溶 液 (C(1/2I 2=0.1mol/L滴定到溶液呈蘭色 , 同時(shí)作空白試驗(yàn) .SO 2 % =C×(V-V0 &#

46、215;0.032/(m×1/5×100十三 、 魚(yú)粉中脲醛聚合物的鑒別 1原理脲醛聚合物在濃硫酸的作用下分解成甲醛與氨,甲醛與變色酸 (鉻變酸 ,1.8 二羥基萘 3.6二磺酸的濃硫酸溶液一起微熱,形 成一種紫色 紫紅色化合物2試驗(yàn)部分試劑與儀器立體顯微鏡(160倍可連續(xù)變焦,帶光源眼科鑷子燒杯 50 ml變色酸 2g/L稱(chēng)取變色酸 0.2g 于 200ml 干燥的燒杯中,加入 100ml 濃硫酸, 電爐上微熱 (50-60 2min 并攪拌使之溶解,冷卻后,移入 120ml 棕 色滴瓶?jī)?nèi)。試驗(yàn)步驟取約 3g 試樣于燒杯中,用石油醚(或乙醚脫脂,吹干溶劑后 將樣品移至培養(yǎng)

47、皿內(nèi),在體視鏡下(放大倍數(shù)為 10 20倍將白色 或淺黃色易碎的無(wú)定形固體可疑物,用眼科鑷子小心夾取數(shù)粒于 50ml 干燥燒杯內(nèi),再將燒杯放到體視鏡下,確認(rèn)可疑物已移放到燒 杯內(nèi), 然后滴加 0.5 1ml 變色酸, 并把燒杯放在電爐上微熱 1 2min , 如溶液變成紫色(或紫紅色 ,則樣品中含有脲醛聚合物“蛋白精” 。 3結(jié)果與討論反應(yīng)的干擾情況和檢出限量變色酸的濃硫酸溶液對(duì)乙醛、丙醛、丁醛、異丁醛、異戊醛、庚 醛、巴豆醛、水合氯醛、乙二醛及芳香族醛類(lèi)物均無(wú)此反應(yīng),與甘油 醛、糠醛、阿拉伯糖、果糖及蔗糖反應(yīng)顯黃色,其它糖類(lèi)、丙酮及羧 酸類(lèi)都不與變色酸的濃硫酸溶液發(fā)生反應(yīng)。此方法的檢出限量為

48、 0.05mg (脲醛聚合物 加熱溫度滴加變色酸的濃硫酸溶液后,加熱的溫度應(yīng)在 150 以下,溫 度過(guò)高部分“蛋白精”被炭化成黑色,影響判斷。夾取可疑物時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題由于 “蛋白精” 的粒度很小, 而且易碎, 雖然在體視鏡下看到了, 鑷子也夾到了,但在轉(zhuǎn)移到燒杯的過(guò)程中易丟失,因此,在夾取了數(shù) 粒后, 要將燒杯放到體視鏡下確認(rèn)可疑物已放到燒杯中, 并輕輕振動(dòng) 燒杯或用探針撥動(dòng)可疑物, 使之集中在燒杯底部的某個(gè)點(diǎn)上, 滴加變 色酸時(shí)要對(duì)準(zhǔn)此點(diǎn)。依據(jù)氨基酸總量來(lái)判斷是否摻有“蛋白精”通常根據(jù)魚(yú)粉氨基酸總量明顯偏低(小于粗蛋白質(zhì)的 85% ,而 水溶性非蛋白氮 (NPN為陰性來(lái)判斷魚(yú)粉中有脲醛聚合物

49、“蛋白精” , 這并不能說(shuō)明樣品中一定含有脲醛聚合物“蛋白精” ,只能證實(shí)含有 難溶性的非蛋白氮 (NPN。3.5 此方法也適用于肉骨粉、 玉米蛋白粉、 豆類(lèi)蛋白粉、 大米蛋白粉 中蛋白精的檢測(cè)十四 、 谷物中淀粉含量的測(cè)定1 試劑與溶液1.1 酒石酸銅甲液 (菲林甲液 :34.639gCuSO 4溶于水,加入 0.5ml 濃 H 2SO 4,稀釋到 500ml 。1.2 酒石酸銅乙液 (菲林乙液 :173g 酒石酸鉀鈉,加 50gNaOH ,稀 釋到 500ml 。 1.2 氫氧化鈉溶液 c(NaOH= 1mol/L1.3 硫酸鐵溶液 50g/L1.4 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 c (1/5 K

50、MnO 4 =0.1mol/L1.5 乙醇溶液 85% v/v1.6 HCl 1+1 和 1+3NaOH 溶液 40%乙酸鉛溶液 20%硫酸鈉 10%2 步驟 :稱(chēng)取樣品(粉碎過(guò) 40目篩 2.05.0g ,準(zhǔn)確至 0.0002g ,置于 放有慢速濾紙的漏斗中,用 30ml 乙醚分三次洗去樣品中脂肪,再用 150ml 85%乙醇溶液分?jǐn)?shù)次洗滌殘?jiān)?以除去可溶性糖類(lèi)物質(zhì),濾干 乙醇溶液, 將濾紙連同殘?jiān)徊⑥D(zhuǎn)移至 250ml 錐形瓶中, 加 100ml 水, 加 30ml (1+1 HCl ,在沸水浴上回流 2h ,回流完畢后,立即在流水 中冷卻,待樣品水解液冷卻完全后,加 3滴甲基紅指示劑,先

51、用 40%NaOH溶液調(diào)至黃色,再用 (1+3的 HCl 調(diào)至水解液剛變紅色為宜, 使水解液的 PH 值約為 5,然后加 20ml 20%的乙酸鉛溶液,搖勻,放 置 10min ,再加 20ml 10%的硫酸鈉溶液,搖勻后,將全部溶液及殘?jiān)?轉(zhuǎn)入 500ml 容量瓶中, 用水洗滌錐形瓶, 洗液合并于容量瓶中, 定容, 搖勻,過(guò)濾,棄去初濾液 20ml ,濾液供測(cè)定用。吸取 25.00ml 濾液于三角瓶中, 加 25ml 菲林甲液, 再加 25ml 菲 林乙液,在電爐上加熱 (在 3min 內(nèi)煮沸 并煮沸 2min ,取下過(guò)濾,并 用水洗滌沉淀 45次,之后將濾紙及沉淀物一起放入三角瓶?jī)?nèi),加 入

52、硫酸鐵(50g/L 25ml ,再加 25ml 水,用玻璃棒攪拌到看不到 Cu 2O 的紅色為止,然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 C(1/5KMnO4 =0.1mol/L滴 定到呈微紅色 30s 不褪色為終點(diǎn)。同樣條件做空白。3計(jì)算 :以質(zhì)量百分含量表示的淀粉含量按下式計(jì)算:(1 C u 20=(V-V 0×C ×71.54(2 用 Cu 20的質(zhì)量查表求轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量:淀粉含量 % =轉(zhuǎn)化糖×0.9m×25.00/250.0×100式中: V -樣品消耗 KMnO 4的體積; ml V 0空白消耗 KMnO 4的體積; ml , m -試樣的質(zhì)量 ,g

53、十五 、 次粉中泥沙及礦物質(zhì)的測(cè)定 1 步驟:稱(chēng)取 20g 樣品(準(zhǔn)確至 0.1g 于 250ml 干燥的分液漏斗中,加 約 100ml 的四氯化碳,振蕩幾分鐘,靜止 0.5h 以上,小心地將下層 沉淀物放出到已在 105烘至恒重的小燒杯中,水浴上蒸干溶劑后, 放到 105烘箱內(nèi)烘 0.5h ,取出,冷卻,稱(chēng)重。2 沉淀物分析(定性如沉淀物為白色、灰白色物質(zhì),且不溶于鹽酸,則為滑石粉;反 之,沉淀溶于鹽酸,并放出大量的氣泡,則為石粉。如沉淀物外觀如泥砂狀物質(zhì),則沉淀為混入或摻入的泥砂。 如沉淀外觀很白,并有熒光性,則沉淀物為增白劑。3 計(jì)算:沉淀物 % = m 2-m 1m×100

54、式中:m 2烘后沉淀物+燒杯的質(zhì)量; gm 1燒杯的質(zhì)量; gm 樣品的質(zhì)量; g說(shuō)明 :此方法也適用于豆粕、棉粕及菜粕中泥砂的測(cè)定 。十六 、 魚(yú)粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類(lèi)蛋白粉、大米蛋白粉 鏡檢過(guò)程中的定性實(shí)驗(yàn)定性檢查A . 摻入植物類(lèi)物質(zhì) (如小麥麩、 稻谷粉、 豆類(lèi)蛋白粉和大米蛋白粉 試劑:碘 -碘化鉀溶液配制:稱(chēng) 1g 的碘及 5g 碘化鉀于燒杯內(nèi),加 100ml 水?dāng)嚢?2分鐘,待 溶解后將其移入 120ml 棕色的滴瓶?jī)?nèi)。步驟:取約 5g 樣品放在燒杯內(nèi),加約 70ml 水,在電爐上煮沸,取下 靜止 2分鐘, 滴加碘-碘化鉀溶液1ml , 如溶液變成藍(lán)色則摻 入植物性的物質(zhì)。B

55、. 摻入尿素試劑:(1生黃豆粉 :將大豆磨成粉末(注意 :防止粉碎中升溫 (2酚紅 :1g/L。 稱(chēng)取酚紅 (苯酚紅 0.1g 溶于 100ml 乙醇中。 步驟:取約 0.5g 魚(yú)粉樣品,于 50ml 比色管內(nèi),再加約 0.1-0.2g 生黃豆粉, 3-5滴酚紅, 40ml 水,塞好塞子,搖動(dòng) 30秒,靜止, 如溶液變成紅色,則樣品中摻入尿素。C. 摻入銨鹽類(lèi)物質(zhì)(氨化銨,碳酸氫銨試劑 (130%氫氧化鈉溶液 : 稱(chēng)30g 氫氧化鈉加70ml 水。 (2 PH 試紙步驟:取魚(yú)粉 3-5g 于 100ml 燒杯內(nèi),表皿內(nèi)側(cè)沾一條濕的 PH 試紙, 向燒杯內(nèi)加約 5-10ml 氫氧化鈉,將表皿迅速

56、蓋上,如試紙迅速變藍(lán),則含銨鹽。D. 摻入蛋白精(脲醛聚合物試劑 :變色酸 (0.1%硫酸溶液 稱(chēng)取 0.1g 變色酸于干燥的燒杯內(nèi), 加 入 100 ml濃硫酸,電爐上加熱到(70-80 ,待溶解后,降 溫,移入 120 ml棕色的滴瓶?jī)?nèi)。步驟 : 將可疑物從顯微鏡下夾出數(shù)粒于干燥的小燒杯內(nèi), 滴加約 1 ml 變色酸,電爐上加熱到剛剛產(chǎn)生微煙,取下,加入 20 -30ml水,如變成紫色,則樣品中有蛋白精。E. 摻入植物性物質(zhì)(含大量粗纖維類(lèi)物質(zhì):如鋸末、稻草、麥芽根 試劑 :(1 間苯三酚 2%:稱(chēng)間苯三酚 2 g,加 100 95%乙醇,溶解后 放入棕色滴瓶?jī)?nèi)。(2 濃鹽酸 36% 分析純?cè)噭┎襟E:稱(chēng) 1-2g 魚(yú)粉于培養(yǎng)皿內(nèi), 滴加間苯三酚使樣品濕潤(rùn), 放置 5-10分鐘后,滴加濃鹽酸約 0.5ml ,放置