實(shí)驗(yàn)6-a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測

1、第二部分第二部分 : :酶的應(yīng)用酶的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1.制備固定化制備固定化a-淀粉酶淀粉酶2.進(jìn)行淀粉水解的測定進(jìn)行淀粉水解的測定知識(shí)回顧：知識(shí)回顧：1 1、在果汁生產(chǎn)中利用、在果汁生產(chǎn)中利用_，可以提高果汁的，可以提高果汁的產(chǎn)量和質(zhì)量，其原理是產(chǎn)量和質(zhì)量，其原理是_。2 2、洗衣粉中添加、洗衣粉中添加_，可以更有效地清除，可以更有效地清除頑漬。常用的酶制劑有頑漬。常用的酶制劑有_四類。四類。在食品、化工、輕紡、醫(yī)藥等領(lǐng)域大規(guī)在食品、化工、輕紡、醫(yī)藥等領(lǐng)域大規(guī)模使用酶制劑，說明酶制劑使用有很多模使用酶制劑，說明酶制劑使用有很多優(yōu)點(diǎn)，你能思考后舉出一些嗎？優(yōu)點(diǎn)，你能思考后舉出一些嗎？催化

2、效率高、低能耗、低污染等。催化效率高、低能耗、低污染等。酶制劑的使用有缺點(diǎn)嗎？酶制劑的使用有缺點(diǎn)嗎？ 1 1、通常對(duì)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑、通常對(duì)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑等條件非常敏感，容等條件非常敏感，容易失活易失活； 2 2、溶液中的酶很、溶液中的酶很難回收難回收，不能被再次利，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；用，提高了生產(chǎn)成本； 3 3、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。質(zhì)量。( (難分離難分離）1 1、固定化酶技術(shù)。即將酶固定在一定空間、固定化酶技術(shù)。即將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)（如固定在內(nèi)的技術(shù)（如固定在不溶于水的載體不溶于水的載體上）。上

3、）。2 2、固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：、固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：（1 1）使酶既能與反應(yīng)物接觸，又）使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物能與產(chǎn)物分離分離；（2 2）固定在載體上的沒可以被）固定在載體上的沒可以被反復(fù)利用反復(fù)利用。交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法 酶酶物理吸附法物理吸附法交聯(lián)法交聯(lián)法包埋法包埋法酶的固定化方法酶的固定化方法共價(jià)偶聯(lián)法共價(jià)偶聯(lián)法實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)是用本實(shí)驗(yàn)是用吸附法吸附法將將a-淀粉酶固定在淀粉酶固定在石英砂石英砂上，上，一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示劑溶液測試，精，用淀粉指示劑溶

4、液測試，流出物呈紅色流出物呈紅色表明水解產(chǎn)物糊表明水解產(chǎn)物糊精生成精生成這里使用的是這里使用的是枯草桿菌的枯草桿菌的a-淀粉酶淀粉酶，其作用的最適溫度為，其作用的最適溫度為5075；最適；最適PH為為5.57.5遇碘顯藍(lán)色遇碘顯藍(lán)色遇碘顯紅色遇碘顯紅色遇碘不顯色遇碘不顯色四、四、“-淀粉酶固定化淀粉酶固定化”實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模?、制備固定化的、制備固定化的設(shè)備及用品：設(shè)備及用品：5ml塑料注射器塑料注射器 50ml燒杯燒杯 滴管滴管 自行車自行車用氣門心及夾子用氣門心及夾子 注射器架注射器架 試管及微量離心管試管及微量離心管3支支實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料: :1、a-淀粉酶的固定化：淀粉酶的

5、固定化：在燒杯中將在燒杯中將5mg a-淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml蒸餾水中。由于酶不純，可能有些不溶物。再加入蒸餾水中。由于酶不純，可能有些不溶物。再加入5g石英砂石英砂，不時(shí)攪拌，不時(shí)攪拌，30min后裝入后裝入1支下端接有氣門支下端接有氣門心并用夾子封住的注射器中心并用夾子封住的注射器中(石英砂體積約石英砂體積約4ml)。用。用10倍倍體積的蒸餾水體積的蒸餾水洗滌洗滌此注射器，流速為此注射器，流速為1ml/min。2、可溶性淀粉溶液：、可溶性淀粉溶液：取取50ml可溶性淀粉溶于可溶性淀粉溶于100ml熱水熱水中，攪拌均勻。中，攪拌均勻。3、5mmol/L KI-I2溶液：溶液：稱取稱取0.

6、127g碘和碘和0.83g碘化鉀。加碘化鉀。加蒸餾水蒸餾水100ml完全溶解后裝入滴瓶中。完全溶解后裝入滴瓶中。除去未吸附的除去未吸附的游離淀粉酶游離淀粉酶反應(yīng)柱反應(yīng)柱固定化酶固定化酶氣門心氣門心夾子夾子5ml注射器注射器步驟步驟:1.將灌注了固定化酶的將灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液用滴管滴加淀粉溶液,使使淀粉溶液以淀粉溶液以0.3ml/min的的流速過柱流速過柱.在流出在流出5ml后后接收接收0.5ml流出液流出液,加入加入12滴滴KI-I2溶液溶液,觀察顏觀察顏色色.用水稀釋用水稀釋1倍后再觀倍后再觀察顏色察顏色.反應(yīng)柱反應(yīng)柱固定化酶固定化酶

7、氣門心氣門心夾子夾子5ml注射器注射器淀粉淀粉2.實(shí)驗(yàn)后實(shí)驗(yàn)后,用用10倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱,放放置在置在4冰箱中冰箱中,幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),看是看是否有相同的結(jié)果否有相同的結(jié)果.課后練習(xí)課后練習(xí) 1.如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒有淀粉酶如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒有淀粉酶?2.耐高溫的淀粉酶有哪些可能的用途耐高溫的淀粉酶有哪些可能的用途?可在試管中加入可在試管中加入1ml可溶性淀粉，再加幾滴淀粉酶柱可溶性淀粉，再加幾滴淀粉酶柱流出液，保溫幾分鐘后用碘液檢驗(yàn)。如仍顯藍(lán)色，則流出液，保溫幾分鐘后用碘液檢驗(yàn)。如仍顯藍(lán)色，則流出液中沒有淀

8、粉酶了。流出液中沒有淀粉酶了?？梢栽诟邷叵率沟矸鬯饪?，而且酶不會(huì)因高溫上可以在高溫下使淀粉水解快，而且酶不會(huì)因高溫上而失活，所以可在一些需要高溫加熱同時(shí)又要水解而失活，所以可在一些需要高溫加熱同時(shí)又要水解淀粉的反應(yīng)中使用。淀粉的反應(yīng)中使用。1 1、研究認(rèn)為，用固定化酶技術(shù)處理污、研究認(rèn)為，用固定化酶技術(shù)處理污染物是很有前途的。如將從大腸桿菌得染物是很有前途的。如將從大腸桿菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制劑，可以用來降解殘留在土壤中的有機(jī)劑，可以用來降解殘留在土壤中的有機(jī)磷農(nóng)藥，與用微生物降解相比，其作用磷農(nóng)藥，與用微生物降解相比，其作用不需要適宜的（不

9、需要適宜的（ ）A A、溫度、溫度 B B、PHPHC C、水分、水分 D D、營養(yǎng)、營養(yǎng)D2 2、目前，日用化工廠大量生產(chǎn)的酶、目前，日用化工廠大量生產(chǎn)的酶制劑，其中的酶大都來自制劑，其中的酶大都來自A A、化學(xué)合成、化學(xué)合成 B B、動(dòng)物體內(nèi)、動(dòng)物體內(nèi) C C、植物體內(nèi)、植物體內(nèi) D D、微生物體內(nèi)、微生物體內(nèi) D3.3.酶的固定方法不包括酶的固定方法不包括( )( )。A. A. 將酶吸附在固體表面上將酶吸附在固體表面上 B B將酶相互連接起來將酶相互連接起來C C將酶包埋在細(xì)微網(wǎng)格里將酶包埋在細(xì)微網(wǎng)格里 D D將酶制成固體酶制劑，如加酶洗衣粉將酶制成固體酶制劑，如加酶洗衣粉中的酶中的酶D5. 5. 關(guān)于固定化酶的敘述不