干細(xì)胞治療糖尿病的研究近況

1、干細(xì)胞治療糖尿病的研究近況關(guān)鍵詞糖尿病干細(xì)胞胰島 健康訊：魏雪峰 史小林100054首都醫(yī)科大學(xué)生殖醫(yī)學(xué)研究中心【摘要】本文對(duì)本世紀(jì)以來(lái)干細(xì)胞治療糖尿病的若干研究，包括胰島的體內(nèi)發(fā)育、分化及其標(biāo)志物，以及應(yīng)用胰導(dǎo)管干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化為胰島對(duì)糖尿 病進(jìn)行細(xì)胞治療的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了綜述。隨著干細(xì)胞技術(shù)的不斷完善，人類(lèi)最終能治 愈糖尿病。 全球糖尿?。╠iabetes mellitus , DM患者約億（我國(guó)也已 達(dá)4000萬(wàn)），預(yù)計(jì)2025年將達(dá)3億1,已成為嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的重大疾病 之一，特別是久病引發(fā)的多系統(tǒng)損害，及最終的腎功能衰竭。DM發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及遺傳、環(huán)境、免疫調(diào)控和化學(xué)

2、因子。自1922年發(fā)現(xiàn)了胰島素至今，DM勺治療以藥物和注射胰島素為主，目前，學(xué)者們開(kāi)始關(guān)注經(jīng)胰島移植恢復(fù)患 者體內(nèi)代謝紊亂的方法，但因組織來(lái)源匱缺，制約了胰島移植研究的開(kāi)展，因此 尋找合適的胰島移植物的研究便成為了當(dāng)務(wù)之急。隨著分子、細(xì)胞和發(fā)育生物學(xué) 技術(shù)的進(jìn)展，增加了干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化成胰島的可能性但由于這一技術(shù)還處于 實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)階段，而且方法也并不統(tǒng)一，因此有必要將近期研究進(jìn)行匯總，希望能對(duì)在這方面進(jìn)行研究的同僚們有所幫助。1胰島體內(nèi)的形成、發(fā)育、分化與鑒定胚胎胰島分化 胚胎胰島的分化分4個(gè)階段：（1）胚胎910周為零散的多激素細(xì)胞階段；（2）胚胎1115周為未成熟的多激素階段；（3）胚

3、胎 1619周為單激素核心胰島階段；（4）胚胎30周后為多形胰島階段（Bocian, Histochem Cell Biol , 1999）。在胰島形成過(guò)程中，內(nèi)胚層細(xì)胞形成許多小導(dǎo)管， 其末端膨大部分的細(xì)胞團(tuán)發(fā)育為外分泌腺泡，與此同時(shí)，一些細(xì)胞群或細(xì)胞索不出現(xiàn)管腔，卷曲成團(tuán)并與其他細(xì)胞索分離開(kāi)，分散在腺泡之間，內(nèi)含豐富的毛細(xì) 血管，最后發(fā)育成具有內(nèi)分泌功能的胰島。胰島細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)Ferber 2認(rèn)為胚胎發(fā)育早期的信號(hào)源于脊索，后期的信號(hào)源于問(wèn)質(zhì)，經(jīng)誘導(dǎo)的胰管上皮細(xì) 胞增殖分化形成胰島細(xì)胞，但至今為止其誘導(dǎo)因素并無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。PDX1l種同源框轉(zhuǎn)錄因子（homeoboxtran scripti

4、on factor ）,即胰十二指腸同源異 型盒基因（pa-ncreatic and duodenal homeobox1 ）,編碼胰腺十二指腸同源框 蛋白 1,又稱(chēng) IPF-1、IDX-1、IUF-1。Lu （Lu, Endocrinology , 1996）認(rèn)為 PDX1 是胰腺發(fā)育及胰島素基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，即決定于胰腺前體細(xì)胞向 B、A、D細(xì)胞的分化。Mckinnon 3 認(rèn)為PDX1 寸于腸內(nèi)胚層背胰芽和腹胰芽的生長(zhǎng)、分化起重要作用。Dutta 4 認(rèn)為早期胰腺表達(dá)的PDX-1對(duì)胰腺 上皮的形成和分化是必需的。Gu 5 認(rèn)為所有胰腺細(xì)胞均來(lái)源于PDX1表達(dá) 的前體細(xì)胞，是最

5、先發(fā)現(xiàn)的胰腺發(fā)育決定基因，隨著胰腺發(fā)育 PDX1的表達(dá)逐漸 減弱，如缺失將導(dǎo)致胰腺無(wú)法形成。 Docherty 6 的研究證實(shí)小鼠PDX1基 因的純合子缺失、突變會(huì)導(dǎo)致胰腺無(wú)法形成。ngn3:ngn3即神經(jīng)元素3(neurogenin3 ),是胰腺發(fā)育過(guò)程中短暫表達(dá)的蛋白， 可能是胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞系 的定向因子，且在成熟胰島中不存在。用PDX1啟動(dòng)子促進(jìn)轉(zhuǎn)基因小鼠中早期胰腺前體細(xì)胞中ngn3表達(dá)，會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌細(xì)胞數(shù)增加，外分泌細(xì)胞數(shù)減少。ngn3缺失的純合子小鼠中胰島細(xì)胞和 nestin+胰島前體細(xì)胞在發(fā)育各階段都缺失6。Lee 7認(rèn)為ngn3基因與胰島分化有密切關(guān)系，因?yàn)?ngn3基因缺陷小鼠

6、不能表達(dá)胰島其他特異性轉(zhuǎn)錄因子，包括islet1 、PAX4 PAX6而缺乏PAX6 Neu- roD1、或的動(dòng)物胰腺中表達(dá)ngn3,表明ngn3位于這些因子的上游， 且對(duì)啟動(dòng)內(nèi)分泌細(xì)胞分化必不可少，而分化后期關(guān)閉。Gasa 8通過(guò)表達(dá)的腺病毒感染胰腺導(dǎo)管細(xì)胞，建立了體外調(diào)控分化模型，發(fā)現(xiàn) ngn3和NeuroD1活 化胰島分化的基因并不重疊，表明這兩個(gè)bHLH蛋白在胰島發(fā)育活動(dòng)中具有不同的功能。Mellitzer 9 通過(guò)將cDNA雨入至U前體細(xì)胞的3'端非翻譯區(qū)，通 過(guò)EYFPt位NGN-3s達(dá)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)分泌前體細(xì)胞在缺乏問(wèn)充質(zhì)信號(hào)刺激情況下， 可在體外擴(kuò)增，向內(nèi)分泌細(xì)胞分化為其默認(rèn)

7、的途徑。Leon 10用抗新霉素基因篩選用含前體基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼠胚胎干細(xì)胞。培養(yǎng)后用篩選陽(yáng)性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞分泌胰島素，注入糖尿病鼠體內(nèi)可使其血糖恢復(fù)正常。Fox a 2:內(nèi)分泌的關(guān)鍵調(diào)控基因是forkhead基因Fox a 2。Guo 11 誘導(dǎo)內(nèi)胚層分化的研 究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ox a 2可被Foxd3激活，而被Oct4抑制。內(nèi)胚層分化可通過(guò)抑制 Oct4 表達(dá)實(shí)現(xiàn)。Fox a 2基因關(guān)鍵參與肺、肝、胰發(fā)育。缺乏 Fox a 2基因，鼠不能產(chǎn) 生前、中腸內(nèi)胚層(Ang, Cell , 1994)。HNF:HNF參與肝、腸、胰分化，缺失可致年輕人成熟期發(fā)病的糖尿病( Maturity onset d

8、iabetes melli - tus in young, MODYt HNF1a (TCF1) HNF賊 Fox a 2 及 Pdx-1 雙雜合缺失，導(dǎo)致 0 細(xì)胞功能缺陷，提示這些基因構(gòu)成B細(xì)胞發(fā)育的基因絡(luò)(Yamagata, Nature ,1996) 0HNF6-/-鼠，腹胰發(fā)育缺陷及膽管發(fā)育異常，該基因需ngn3激活(Yamagatq Nature , 1996)。HNF6®激活 Fox a 2a 基因。Pax:Pax-4 和 Pax-6 同屬 Pax基因家族，其在胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞分化中起關(guān)鍵作用。Sosa (Sosa, Nature , 1997) 將Lac-Z插入到Pax

9、基因中作標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)Pax-4失活的新生鼠經(jīng)免疫組織化學(xué)法 顯示缺少B細(xì)胞和6細(xì)胞，a細(xì)胞排列不規(guī)整。Pax-6缺失，a細(xì)胞缺如， 而胰島素和生長(zhǎng)抑素分泌細(xì)胞卻可出現(xiàn)(St-Onge, Nature , 997)。由此推斷出 Pax-6是a細(xì)胞發(fā)育所必需，而非B、6細(xì)胞發(fā)育所必需。Chiang 12為分析單個(gè)胰腺細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄模式，改進(jìn)了基于PCR勺cDNAT增方法，即將單個(gè)胰腺細(xì)胞中的cDNAf含有95個(gè)常見(jiàn)胰腺細(xì)胞表達(dá)基因的 DNA5片進(jìn)行雜交，芯 片上的基因包括轉(zhuǎn)錄因子，信號(hào)傳導(dǎo)分子以及對(duì)照基因。研究者觀察了胚胎小鼠 的胰腺分離出的單個(gè)細(xì)胞中的基因表達(dá)模式。在這個(gè)時(shí)期上皮細(xì)胞的形態(tài)均一， 而基

10、因表達(dá)模式分析可分為6個(gè)不同的亞型。I型只表達(dá)Pdx1,和，II型還表 達(dá)P48, III型還表達(dá)ngn3。因?yàn)镻dx1是最早表達(dá)的胰腺臟細(xì)胞標(biāo)記蛋白，因 此研究者認(rèn)為I型細(xì)胞是最好的胰腺干細(xì)胞候選者。II型細(xì)胞表達(dá)的P48是外 分泌胰腺細(xì)胞的標(biāo)記，而和是內(nèi)分泌細(xì)胞分化所必須的。 研究者根據(jù)這些研究結(jié) 果推測(cè)出一個(gè)胰腺細(xì)胞分化的模型， 每一個(gè)階段都對(duì)應(yīng)相應(yīng)的基因表達(dá)模式。此外，成體的胰島內(nèi)分泌細(xì)胞4050d更新一次，其過(guò)程包括細(xì)胞凋亡和胰導(dǎo)管干 細(xì)胞增殖分化成新的胰島細(xì)胞。給予葡萄糖或高血糖素樣肽( Glucagon-like peptied , GLP1等促胰島因子48h后，胰島細(xì)胞數(shù)量可增

11、加一倍，說(shuō)明機(jī)體胰 島在一定的條件與需求下進(jìn)行著不斷更新與增殖的(Rosenberg, Cell Transplant , 1995)。胰島前體細(xì)胞的標(biāo)記 Jindal (Jindal ,Transplan ration Proceeding , 1997)認(rèn)為胰臟的外分泌細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞都 來(lái)源于具有導(dǎo)管細(xì)胞特征的未分化上皮細(xì)胞， 提示胰導(dǎo)管細(xì)胞可能是胰島的前體 細(xì)胞。Berger 13也發(fā)現(xiàn)胰腺中存在干細(xì)胞，認(rèn)為胰腺干細(xì)胞是胚胎發(fā)生中沒(méi)有進(jìn)行終末分化的胰腺細(xì)胞，具有自我更新和分裂能力。應(yīng)用HE染色顯示該細(xì)胞是一種嗜堿性的單核細(xì)胞， 直徑約8mi呈圓形，細(xì)胞核為圓形或腎形， 較大，多含2個(gè)核

12、仁，染色質(zhì)細(xì)膩而分散，胞質(zhì)中不含顆粒，在形態(tài)上與小淋巴 細(xì)胞極為相似。近年來(lái)的研究揭示了胰島前體細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，這對(duì)胰島前體細(xì)胞的提取將有很大的幫助，目前較為公認(rèn)的特異性標(biāo)記物有以下幾種， 還有很多標(biāo)記物有待于發(fā)現(xiàn)。酪氨酸羥化酶(tyroxine hydroxy - lase , TH): 在大鼠胰腺發(fā)生中表現(xiàn)出發(fā)育依賴(lài)性變化。第16天胚胎的導(dǎo)管細(xì)胞可見(jiàn)TH的表 達(dá)，但成熟的內(nèi)分泌細(xì)胞中卻難以檢測(cè)到 TH,胎兒和剛出生幼兒的胰島細(xì)胞和 一些導(dǎo)管細(xì)胞TH呈陽(yáng)性。成年大鼠胰腺中，TH僅在B細(xì)胞中表達(dá)。TH的這種 表達(dá)模式可用于鑒別內(nèi)分泌前體細(xì)胞14 o葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子2 (glucosetrans

13、porter , Glu T-2 ):可在大鼠胚胎的背胰芽和腹胰芽細(xì)胞中檢出，并在胰 芽發(fā)育中持續(xù)表達(dá)。孕17d,可檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)表達(dá) GluT-2和胰島素，以后，這 些細(xì)胞聚集形成胰島的B細(xì)胞群，而那些將轉(zhuǎn)變成腺泡細(xì)胞的細(xì)胞不再表達(dá) GluT-2 15。細(xì)胞角蛋白20 (cytokeratin , CK20 :CK20是成熟胰腺導(dǎo)管細(xì)胞的一個(gè)特異標(biāo)志。在胎鼠和幼鼠的導(dǎo)管細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞中表達(dá)，而在成年動(dòng)物的導(dǎo)管細(xì)胞中有CK20表達(dá)則提示能定向分化成內(nèi)外分泌細(xì)胞的胰腺未分化 細(xì)胞。誘導(dǎo)與導(dǎo)管連接的B細(xì)胞再生時(shí)，CK2她可在內(nèi)分泌細(xì)胞中表達(dá)，顯示了未分化細(xì)胞分化為內(nèi)分泌細(xì)胞的過(guò)程15 °

14、PDX-1:是B細(xì)胞成熟的標(biāo)志。在哺乳動(dòng)物中，這種同源域蛋白(homeodomain protein )是一種調(diào)節(jié)胰島素和 抑生長(zhǎng)素表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，也作為胰島素啟動(dòng)因子-1 (IPF-1)、抑生長(zhǎng)素活化因 子-1 (STF-1)和胰島十二指腸同源域蛋白(IDX-1)而存在。PDX-1也可在尚未 形成胎兒胰腺上皮細(xì)胞的所有胰島素分泌細(xì)胞中短暫表達(dá)(Bouwens, 1998)。 Kit:Kit在胰島素細(xì)胞系中表達(dá)，認(rèn)為在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面起作用。胎鼠和成鼠的胰 島中均可檢測(cè)到Kit ,經(jīng)Kit基因表達(dá)的標(biāo)記物gal證實(shí)，Kit在胰島素細(xì)胞中 特異表達(dá)，在其他內(nèi)分泌細(xì)胞和外分泌細(xì)胞中不表達(dá)16 o ng

15、n3:ngn3陽(yáng)性細(xì)胞散在于胎鼠胰腺的導(dǎo)管細(xì)胞，胚胎達(dá)高峰，成熟胰島細(xì)胞則轉(zhuǎn)為陰性17o由于胰島激素或成熟內(nèi)分泌細(xì)胞不表達(dá) ngn3,因此ngn3陽(yáng)性細(xì)胞可作為胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞的前體細(xì)胞的標(biāo)記物18。波形蛋白(vimentin ) :Schmied 19將長(zhǎng)期培養(yǎng)的胰島細(xì)胞去分化得到未分化的導(dǎo)管樣上皮細(xì)胞，這些細(xì)胞可分化成胰腺內(nèi)外分泌細(xì)胞，并限制性表達(dá)波形蛋白， 所以波形蛋白可作為胰島祖細(xì)胞的分子標(biāo)志。但在此需說(shuō)明的是，最近研究人員用小鼠做了詳細(xì)的追蹤研究，Matthews 20通過(guò)孕鼠及乳鼠喂養(yǎng)不同劑量的維生素A,發(fā)現(xiàn)缺乏維生素A, B細(xì)胞數(shù)量和體積明顯下降。ChenY 21 等發(fā)現(xiàn)SOCS-

16、K-/-)鼠感染后外分泌部細(xì)胞死亡高于內(nèi)分泌部，可能 T干擾 素或月中瘤壞死因子促進(jìn)內(nèi)分泌部增生分化。Gesina 22通過(guò)糖皮質(zhì)激素治療通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)使激素受體缺陷的鼠，發(fā)現(xiàn)胰島素分泌細(xì)胞減少是外分泌細(xì)胞的 2倍，提示糖皮質(zhì)激素有利于向外分泌分化。表達(dá) Pax-1, Pax-6,處下游調(diào)控序 列，而paf-1-p48和Hes-1的mRNAf高。選擇非活化激素受體基因，在鼠0細(xì) 胞無(wú)明顯效果。而對(duì)于缺乏糖皮質(zhì)激素受體，且表達(dá) Pdx-1則B細(xì)胞群增長(zhǎng)加 倍。胰島細(xì)胞數(shù)量和體積均增大而a細(xì)胞除外。提示糖皮質(zhì)激素在胰腺B細(xì)胞分化中具有重要作用。2誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為胰島的研究近況應(yīng)用生物工程技術(shù)獲取胰

17、島素分泌細(xì)胞可從以下幾個(gè)途徑：(1)胰導(dǎo)管干細(xì)胞；(2)胚胎干 細(xì)胞；(3)利用基因工程技術(shù)。但將這些細(xì)胞誘導(dǎo)成胰島，僅是實(shí)驗(yàn)室研究的初 級(jí)階段，并不是最終的成果。胰導(dǎo)管干細(xì)胞應(yīng)用(1) Peck 23和Ramiya 24 分離、提取出了存在于胰腺導(dǎo)管中的胰島干細(xì)胞，經(jīng)體外誘導(dǎo) 培養(yǎng)形成了胰島樣細(xì)胞。(2) Bonner 25發(fā)現(xiàn)角質(zhì)化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(keratinocyte growth factor , KGF 和煙堿(nicotine )對(duì)導(dǎo)管干細(xì)胞分化 為胰島產(chǎn)生作用。(3) Ramiya 26從胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到“產(chǎn)生胰島的干細(xì)胞(islet producing stem c

18、ells , IPSCs) ”，這些 IPSCs 呈較 典型的胰島樣結(jié)構(gòu)，并對(duì)高濃度葡萄糖有胰島素釋放應(yīng)答反應(yīng)，免疫組織化學(xué)染色證實(shí)有胰島素和胰高糖素的表達(dá)，RT-PCF®示這些細(xì)胞能表達(dá)許多胰島細(xì)胞的標(biāo)志性基因，如胰島素基因，胰高糖素，生長(zhǎng)抑素，GLUT級(jí)谷氨酸脫竣酶等。 將分化成熟的胰島細(xì)胞移植到 NODI體內(nèi)，可完全逆轉(zhuǎn)其DM犬態(tài)25。由 IPSCs可誘導(dǎo)分化得到“產(chǎn)生胰島的細(xì)胞” (islet producing cells , IPCs), IPCs可分化成有組織結(jié)構(gòu)的胰島細(xì)胞團(tuán)，包括A、B、D細(xì)胞，表達(dá)一系列胰島標(biāo)志，分泌胰島素并受葡萄糖誘導(dǎo)。將這些細(xì)胞移植到NODS體內(nèi)

19、，可穩(wěn)定其血 糖水平。胚胎干細(xì)胞應(yīng)用(1) Lumelsky 27采用胚胎干細(xì)胞體外擴(kuò)增后，篩選巢蛋白(nestin )陽(yáng)性細(xì)胞，加入堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor , bFGF及B27和尼可酰胺，誘導(dǎo)成為能分泌胰島素 的胰島樣結(jié)構(gòu)，將其植入糖尿病鼠體內(nèi)，可使血糖降低且有血管形成，只是胰島 素分泌量較低。(2) Assady 28 從ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到可分泌胰島素的細(xì) 胞，他們的方法是先將 ES細(xì)胞在有白血病抑制因子(leukaemia inbibitory factor , LIF)存在，但無(wú)滋養(yǎng)層的條件下培養(yǎng)，此時(shí)有 PDX1 (pa

20、ncreatic and duodenal homeobox1)表達(dá)，然后在無(wú)LIF的條件下促進(jìn)ES細(xì)胞增殖分化為擬 胚體(EmbryoBodys, EBs),再在無(wú)血清環(huán)境下培養(yǎng)，提高nestin+細(xì)胞的比例， 加入bFGF繼續(xù)培養(yǎng)，得到類(lèi)胰島組織細(xì)胞。這些細(xì)胞表達(dá)145pgN g的鼠胰島素 I和H,而且其表達(dá)受葡萄糖誘導(dǎo)，還表達(dá)胰島淀粉多肽(isleta myloid polypep tide ) , GLUT冷胰島細(xì)胞標(biāo)志。但將這些細(xì)胞移植入糖尿病小鼠后， 未能使其血糖正常化。(3) Sori a 29通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將基因插件插入到小 鼠胚胎干細(xì)胞中，經(jīng)潮霉素(hygromycin )篩

21、選，獲得含上述基因插件的干細(xì)胞， 擴(kuò)增后用G418篩選，從而獲得純化的胰島。參考文獻(xiàn) 1 Dochertyand development of theislets of Langerhans:implica tions for thetreatment of diabetes Opinionin Pharmacol。 gy, 20XX, 1:641-650.2Ferber S , Halkin , Cohen H, et and duodenal homeobox gene1in duce expression if insulin genes in liver and ameliorates

22、 strepto otoc ininduced , 20XX, 6:568-572.3 Mckinnon CM Docherty duodenal homeobox1PDX1 a- majorregulator of 0 cell function and , 20XX, 44:1203-1214.4Dutta S , Gannon M Peers B , et :PBX plexe sare required for normal proliferation of pancreatic cells during , 20XX, 98 (3) :1065-1070.5Gu G, Dubausk

23、aite J , Melton D evidence for the pancreatic lin eage:NGN3+cells are islet progenitors and are distinct from duct pro - , 20XX 129:2447-2457.6 Docherty and development of the isletsof Langerhans:implica tions for the treatment of diabetes Opinionin Pharmacolo - gy, 20XX, 1:641-650.7 Lee JC, SmithSB

24、, WatadaH et ulationof the pancreaticpro en - docrine gene , 20XX 0:928936.8 Gasa R,Mrejen C , Leachman N et genes coordinate the pancreatic islet differentiation program in Natl Acad Sci U S A, 20XX, 7101(36) :13245-13250.9 Mellitzer G, Martin M, Sidhoum-Jenny M, et isletpro genitor cells in Neurog

25、enin3-YFP knock-add- on En _ docrinol , 20XX 5.10 Leon-Quinto T , Jones J , Skoudy A, et vitro directeddifferenti ation of mouse embryonic stem cells into insulin- producing - betologia , 20XX, 29.11 GuoY, Costa R, RamseyH,et embryonic stem cell transcription factors Oct-4and FoxD3interact to regula

26、te endodermal-sp ecific pro moter Natl Acad Sci USA , 20XX 99:3663-3667.12 Chiang MK Melton transcript analysis of pancreas ,20XX, 4 (3):383-3.13 pancreatic stem cells can reverse diabetesin ,20XX, 320 (3) :736.14 G nterK , differentiation and growth of theendocrine pan - Arch , 20XX 436:527-538.15

27、Peters J , Jurgensen A ,Kloppel , differentiation and growth of the endocrine Arch, 20XX,436:527-538.16 Rachdi L , Ghazi LE , Bernex F , et of the receptortyrosine kinase KIT in mature cells and in the pancreas in betes , 20XX 50 (9) :2021-2028.17 Schwitzgebel VM ScheelDW； Conners J R, et ofneuro ge

28、nin3reveals an islet cell precurs or population in the opment, 20XX, 127:3533-3542.18 Gradwohl G, Dierich A, LeMeurM, et requiredfor the development of the four endocrine cell lineages of the Natl Acad Sci USA, 20XX, 97:1607-1611.19 Schmied BM, Liu GZ , Matsuzaki H, etof islet cells in long , 20XX,

29、20 (4) :337-347.20 Matthews KA, RhotenWB Driscoll HK , et A deficiency impairs fetal islet development and causes subsequent glucose intolerance in adult Nutr, 20XX 134(8) :1958-1963.21 ChenY, ChongMM Darwiche R, et pancreatitis withex ocrine destruction and increased islet neogenesis in mice with suppressor of cytokine J Pathol , 20XX, 165 (3) :913-921.22 GesinaE, Tronche F, Herrera P, et the role of glucocorti _ coids on pancreas , 2