國產(chǎn)琥乙紅霉素組分和有關(guān)物質(zhì)的分析

1、國產(chǎn)琥乙紅霉素組分和有關(guān)物質(zhì)的分析                  作者：楊亞莉 王晨 王明娟 胡昌勤【摘要】  目的 考察國產(chǎn)琥乙紅霉素原料和制劑的組分和有關(guān)物質(zhì)，為修訂中國藥典2005年版琥乙紅霉素質(zhì)量標準提供依據(jù)。方法 采用美國藥典30版收載的HPLC法測定6個廠家的紅霉素原料、琥乙紅霉素原料和制劑共16批樣品的組分和有關(guān)物質(zhì)，并采用歐洲藥典5.0版收載的方法測定琥乙紅霉素樣品中游離紅霉素的含量。結(jié)果 國產(chǎn)紅霉素以紅霉

2、素A為主組分，含有少量的紅霉素B、紅霉素C和紅霉素E組分，有關(guān)物質(zhì)主要為脫水紅霉素A，其它有關(guān)物質(zhì)含量較少。以紅霉素為原料合成的琥乙紅霉素中的主要有關(guān)物質(zhì)為游離紅霉素。結(jié)論 建議將中國藥典2005版琥乙紅霉素有關(guān)物質(zhì)的薄層色譜法修訂為高效液相色譜法，便于更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。 【關(guān)鍵詞】  琥乙紅霉素； HPLC； 組分和有關(guān)物質(zhì)； 游離紅霉素   ABSTRACT  Objective  To investigate the related substances profiles of the domestic erythromycin eth

3、ylsuccinate bulk material and preparation, and provide data for the monograph of erythromycin ethylsuccinate in the Chinese Pharmacopoeia 2005.  Method  The ingredient and the related substances of totally 16 batches of erythromycin ethylsuccinate bulk material and preparation of 6 manufac

4、turers were determined using the HPLC method of USP 30, and the erythromycin free base were determined using the method of EP 5.0. Results  The major ingredient of domestic erythromycin was erythromycin A and there were minor amount of erythromycin B, C and E. The main related substances was an

5、hydroerythromycin A and the content of other impurities were relatively small. The major related substances of erythromycin ethylsuccinate synthesized by using erythromycin as starting material was erythromycin free base.  Conclusion  To ensure better quality control for the products, it i

6、s recommended that the TLC method involved in the Chinese Pharmacopoeia 2005 to determine the related substances of erythromycin ethylsuccinate to be replaced by the HPLC method.   KEY WORDS  Erythromycin ethylsuccinate;  HPLC;  Related substances;  Erythromycin free ba

7、se   琥乙紅霉素是以紅霉素為原料合成的琥珀酸乙酯衍生物，其組分和有關(guān)物質(zhì)與紅霉素原料中的組分和有關(guān)物質(zhì)及廠家的生產(chǎn)工藝密切相關(guān)。琥乙紅霉素質(zhì)量標準在中國藥典2005版1、美國藥典30版2和歐洲藥典5.0版3均有收載，中國藥典2005版系采用薄層色譜法測定有關(guān)物質(zhì)，對琥乙紅霉素各組分及有關(guān)物質(zhì)的定性和定量結(jié)果均比較差。USP30版和歐洲藥典5.0版則采用HPLC法進行定量測定。USP30版采用雜質(zhì)對照品對已知雜質(zhì)進行定量，控制紅霉素A烯醇醚不得超過3.0%，N去甲基紅霉素A不得超過3.0%，任意單個雜質(zhì)不得超過3.0%；歐洲藥典則采用相對保留時間確定各組分及已知雜質(zhì)，控制

8、任意單個雜質(zhì)不得超過3.0%，總雜質(zhì)不得超過5.0%，并對合成工藝和貯藏條件下產(chǎn)生的游離紅霉素進行了限度要求。目前國內(nèi)對琥乙紅霉素有關(guān)物質(zhì)的研究較多46，但大多僅限于對單個游離紅霉素的測定或有關(guān)物質(zhì)總量的測定，對琥乙紅霉素組分及各有關(guān)物質(zhì)未作系統(tǒng)研究。本文參考USP30版和歐洲藥典5.0版的標準，對國內(nèi)6個廠家的琥乙紅霉素原料及其制劑的組分和有關(guān)物質(zhì)及游離紅霉素進行了定性和定量測定，為了解國內(nèi)琥乙紅霉素產(chǎn)品質(zhì)量和修訂中國藥典2005版標準提供依據(jù)。    1  儀器與試藥   液相色譜儀采用Shimadzu高效液相色譜儀(LC20AT

9、泵、SPDM20A檢測器、SIL20AC自動進樣系統(tǒng))，Shimadzu LC Solution色譜工作站。   紅霉素對照品(LOT 24200M)、紅霉素B對照品(LOT G1C080)、紅霉素C對照品(LOT 24202F3)、N去甲基紅霉素A對照品(LOT 24202F2)購自美國藥典委員會，叔丁醇、乙腈、甲醇為色譜純，水為雙蒸水。   2  實驗方法   2.1  溶液的制備   (1)有關(guān)物質(zhì)測定   對照品溶液  取50mg紅霉素對照品，精密稱定，置2

10、5ml容量瓶中，加甲醇12.5ml，振搖使溶解，用水解液磷酸氫二鉀(2到100)，用磷酸調(diào)pH為8.0稀釋至刻度，搖勻。   對照品溶液  分別取紅霉素B對照品和紅霉素C對照品各5mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振搖使溶解，加對照品溶液2.5ml，用水解液稀釋至刻度，搖勻。   系統(tǒng)適用性溶液  取2mg N去甲基紅霉素A對照品，加至20ml對照品溶液，混勻。   紅霉素A烯醇醚溶液  取紅霉素USP對照品10mg，加甲醇2ml溶解，加pH3.5磷酸鹽緩沖液20ml，放置30min后使

11、用。   供試品溶液  精密稱取紅霉素約100mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度。   供試品溶液  精密稱取琥乙紅霉素約115mg(制劑按標示量計算取相當量細粉)，置50ml容量瓶中，加甲醇25ml，振搖使溶解，加水解液20ml，混勻，在室溫放置12h使水解，用水解液稀釋至刻度，立即進樣。   (2)游離紅霉素測定   對照品溶液  取紅霉素對照品(中國藥品生物制品檢定所，130307200215，紅霉素A92.3%，紅霉素B0.9%，紅霉素C1.2%)約16mg，至50ml容量

12、瓶中，加流動相至刻度(立即使用)。   樣品溶液的制備  稱取琥乙紅霉素約125mg(制劑按標示量計算取相當量細粉)，置25ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，立即進樣。   2.2  試驗條件   (1)有關(guān)物質(zhì)  色譜柱為Polymer Laboratories 1000A(250mm×4.6mm，8m)，S/N：8MRPS10436A38；流動相為pH8.0緩沖液50ml，加400ml水，加175ml叔丁醇和30ml乙腈，用水稀釋至1000ml，混勻；檢測波長215nm；柱溫70；流速

13、1.0ml/min，進樣50l。   (2)游離紅霉素  色譜柱為phenomenex Dose: Gemin C18 110A(250mm×4.6mm， 5m)；流動相為含2.0g/L的乙腈3.4g/L磷酸二氫鉀(3565)溶液，用磷酸調(diào)pH3.0；檢測波長195nm；柱溫為室溫；進樣量20l。             3  結(jié)果及討論   3.1  琥乙紅霉素有關(guān)物質(zhì)峰的歸屬   通

14、過對照品可以確定紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、N去甲基紅霉素A和紅霉素A烯醇醚，并參考歐洲藥典以相對于紅霉素A保留時間確定了水解物(RRT小于0.3)、N琥珀酸乙酯紅霉素(RRT 1.3)、脫水紅霉素A(RRT 1.4)和假紅霉素A烯醇醚(RRT 1.5)，琥乙紅霉素有關(guān)物質(zhì)的典型色譜圖見圖1。   3.2  產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)分析結(jié)果   (1)原料  表1結(jié)果顯示，國產(chǎn)紅霉素以紅霉素A為主組分，紅霉素B和紅霉素C的含量較少，與國外紅霉素組分不同，國外藥典將紅霉素B和紅霉素C組分作為活性組分，對其限度較寬，規(guī)定紅霉素B組分不得超過12%、

15、紅霉素C組分不得超過5%。企業(yè)產(chǎn)品中紅霉素B含量略高于企業(yè)產(chǎn)品，其脫水紅霉素A雜質(zhì)也相對較高，紅霉素E組分兩個原料廠家均有，說明不同廠家、不同批次產(chǎn)品，由于菌種不同、發(fā)酵工藝和培養(yǎng)條件變化，產(chǎn)品中各組分的含量也不同。企業(yè)琥乙紅霉素中脫水紅霉素A較其原料紅霉素略有增加，提示合成工藝中會引入脫水紅霉素A雜質(zhì)。   (2)制劑  表2是琥乙紅霉素制劑有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果。琥乙紅霉素制劑中的有關(guān)物質(zhì)主要為脫水紅霉素A、紅霉素A烯醇醚和未知雜質(zhì)(RRT 0.77)，各企業(yè)產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)含量不同，企業(yè)產(chǎn)品中脫水紅霉素A和假紅霉素A烯醇醚的含量較高，使有關(guān)物質(zhì)總量(除紅霉素B和紅霉

16、素C組分外各有關(guān)物質(zhì)之和)較高。企業(yè)琥乙紅霉素制劑與琥乙紅霉素原料中的脫水紅霉素A含量相當，提示制劑工藝中不再產(chǎn)生脫水紅霉素A。   3.3  產(chǎn)品中游離紅霉素的測定結(jié)果   測定游離紅霉素要求在琥乙紅霉素未水解成紅霉素的條件下進行測定，故歐洲藥典5.0版采用兩種色譜系統(tǒng)測定琥乙紅霉素有關(guān)物質(zhì)，一是采用聚合柱，將琥乙紅霉素水解成紅霉素后測定其組分和有關(guān)物質(zhì)，二是采用C18柱系統(tǒng)將琥乙紅霉素樣品溶解后直接測定游離紅霉素。國內(nèi)文獻5報道的測定游離紅霉素方法中紅霉素峰旁有1個較難分開的未知成分峰，影響游離紅霉素的準確定量。而歐洲藥典5.0版收載的方法

17、分離效果好(圖2)。表3顯示采用歐洲藥典5.0版方法測定琥乙紅霉素制劑中游離紅霉素的結(jié)果，企業(yè)產(chǎn)品原料的游離紅霉素含量小于膠囊和片劑，由于游離紅霉素易在高溫和高濕下產(chǎn)生，提示生產(chǎn)企業(yè)在表2  琥乙紅霉素制劑有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果典型色譜圖生產(chǎn)工藝和儲存條件上應(yīng)加以控制。15批樣品中企業(yè)的游離紅霉素含量超過限度，提示在藥品標準中控制游離紅霉素含量的必要性。    4  小結(jié)   國產(chǎn)紅霉素由于菌種和發(fā)酵工藝與國外產(chǎn)品不同，最后產(chǎn)品以紅霉素A為主組分，含有少量的紅霉素B、紅霉素C和紅霉素E組分，有關(guān)物質(zhì)主要為脫水紅霉素A，其它有關(guān)物質(zhì)

18、含量較少。以紅霉素為原料合成的琥乙紅霉素由于生產(chǎn)廠家和工藝不同，所含各組分的量也不同， 通過對各有關(guān)物質(zhì)的定性和定量分   表3   琥乙紅霉素中游離紅霉素的測定結(jié)果   劑  型企業(yè)和批次游離紅霉素(%)原料10.62原料20.61原料30.49膠囊42.63膠囊52.18膠囊61.93片劑72.02片劑82.25片劑92.56原料13.65原料23.36片劑  1.67片劑  6.59片劑  4.22顆粒  2.40   析，可以判定產(chǎn)品的優(yōu)劣。同時對產(chǎn)品中游離紅霉素的考察，也可以發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)間產(chǎn)品的差異。建議進一步提高中國藥典2005版琥乙紅霉素質(zhì)量標準，以更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量?！緟⒖嘉墨I】  1 國