生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA對(duì)碧桃幼嫩莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響

1、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA對(duì)碧桃幼嫩莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響一、 選題依據(jù)及基本內(nèi)容碧桃 ( Prunus persica Batsch. var. duplex Rehd )，別名:  粉紅碧桃、千葉桃花、花桃科屬：薔薇科(Rosaceae)，李屬。落葉小喬木，高可達(dá)8米，一般整形后控制在3-4米，小枝紅褐色，無(wú)毛；葉橢圓狀披針形，長(zhǎng)7-15厘米，先端漸尖。花單生或兩朵生于葉腋，重瓣，粉紅色。其它變種有白色、深紅、灑金（雜色）等。為保持優(yōu)良品質(zhì)，必須使用無(wú)性繁殖的方法，故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA對(duì)幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的研究，來(lái)初步確定愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基激素成分。二、步驟、方法及措

2、施 1、以陜西師范大學(xué)長(zhǎng)安校區(qū)格物樓門(mén)前碧桃為試材。2、外植體的采集與消毒:幼莖用自來(lái)水流水沖洗小時(shí) , 無(wú)菌水漂洗 次,75% 酒精滅菌30s， 0. 1 %升汞滅菌 min , 無(wú)菌水漂洗3 次;3、愈傷組織的誘導(dǎo): 莖段截取長(zhǎng)1 cm左右。所有外植體分別接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基（以MS為基本誘導(dǎo)培養(yǎng)基,附加定量的2，4-D 1.0mg/L，6-BA 0.1mg/L和不同濃度的NAA，pH5.8，高壓滅菌。NAA的不同濃度分別為：0.1mg/L、0.3 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L。）培養(yǎng)室溫度為（25±2）。每天光照時(shí)間101

3、2h，光強(qiáng)20003000Lx。培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)其生長(zhǎng)情況每天進(jìn)行觀(guān)察，若有污染要及時(shí)處理。4、15d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)出愈傷組織數(shù)量并計(jì)算誘導(dǎo)率，同時(shí)記錄愈傷組織的質(zhì)地，顏色及生長(zhǎng)情況。愈傷組織按以下公式計(jì)算： 誘導(dǎo)率=（長(zhǎng)出愈傷組織的外植體數(shù)/總接種外植體的塊數(shù)）×1003三、實(shí)驗(yàn)用品1、材料：陜西師范大學(xué)長(zhǎng)安校區(qū)格物樓門(mén)前碧桃2、藥品及試劑：（1）HgCl2、75%酒精等（2）MS培養(yǎng)基母液、激素母液用以前配制的3、器材：培養(yǎng)瓶40個(gè)，玻璃棒，電爐，天平，搪瓷杯，燒杯，皮筋，牛皮紙，pH試紙，稱(chēng)量紙，藥匙，容量瓶，燒杯，廣口瓶，量筒，移液管，超凈工作臺(tái)及其操作用具，無(wú)菌水等四、污染預(yù)防及其

4、處理污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。 一開(kāi)始就要十分重視，防止污染，否則會(huì)前功盡棄，不僅浪費(fèi)時(shí)間，而且浪費(fèi)人力、物力，甚至造成無(wú)法彌補(bǔ)的損失。造成污染的原因很多,從時(shí)間角度可以將污染發(fā)生原因歸納為3 個(gè)階段: 前期準(zhǔn)備階段。包括培養(yǎng)基滅菌不徹底、器皿的滅菌不完全,外植體的選擇不當(dāng)與消毒不徹底; 無(wú)菌操作階段。包括無(wú)菌操作室滅菌和超凈工作臺(tái)有問(wèn)題,操作不規(guī)范,操作工具的消毒不徹底等; 培養(yǎng)階段。培養(yǎng)環(huán)境不清潔和培養(yǎng)體系意外開(kāi)放等。污染處理:1、通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)及建立規(guī)范的操作規(guī)程，可以減少環(huán)境中物理因素對(duì)細(xì)胞的影響。2、若發(fā)現(xiàn)污染情況，應(yīng)及時(shí)將同一瓶中未污染的材料接入新的培養(yǎng)瓶中。五、工作進(jìn)度 序號(hào)時(shí)間內(nèi)容備注12天藥品的準(zhǔn)備、培養(yǎng)基的配制及滅菌王嬋媛：藥品的準(zhǔn)備，稱(chēng)取及培養(yǎng)基的配制劉 潔：洗培養(yǎng)瓶，分裝，滅菌21天接種每人接種一半3每天培養(yǎng)及觀(guān)察每天觀(guān)察一次，可同時(shí)去也可兩人輪流觀(guān)察，遇到污染情況應(yīng)及時(shí)處理415天后統(tǒng)計(jì)計(jì)算六、參