非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)基因表達(dá)對(duì)化療的影響(正文)

1、非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)基因表達(dá)對(duì)化療的影響130021吉林省人民醫(yī)院腫瘤科 郭洪斌 李惠娟 劉意 白曉龍 王娟 葛寒冰長(zhǎng)春市工農(nóng)大路1183號(hào)【摘要】目的 探討非小細(xì)胞肺癌耐藥相關(guān)基因表達(dá)對(duì)化療的影響。方法 應(yīng)用免疫組化SP 法檢測(cè)化療前肺癌組織標(biāo)本中P-gp、GST-、Topo表達(dá)，應(yīng)用NP方案進(jìn)行化療，觀察患者的療效，分析肺癌相關(guān)耐藥基因與化療療效的關(guān)系。結(jié)果P-gp、GST-、Topo在NSCLC中的表達(dá)分別是61.0%、75.6%、68.3%，在鱗癌中的表達(dá)高于腺癌，在低分化性NSCLC中的表達(dá)高于中高分化的NSCLC。本組有效率39.0%，腺癌的有效率高于鱗癌，中高分化的NSCLC化療

2、療效高于低分化NSCLC。結(jié)論NSCLC耐藥是多途徑、多基因參與的過(guò)程；耐藥相關(guān)因子陰性的NSCLC化療有效率高于耐藥相關(guān)因子陽(yáng)性的NSCLC，耐藥因子的檢測(cè)對(duì)NSCLC的化療療效、預(yù)后的評(píng)估具有指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞 非小細(xì)胞肺癌 多藥耐藥 P-糖蛋白 谷胱甘-S-轉(zhuǎn)移酶- DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 化療Relationship between chemotherapy respond and expression of resistance related genes in Non-small Cell Lung Cancer Guo Hong-Bin，Li Hui-Juan, Liu Yi, Bai

3、Xiao-Long, Wang Juan Department of Oncology, The Peoples Hospital of Jilin Province, Changchun 130021,China Abstract Objective: To investigate the effect of expression of resistance related genes on chemotherapy respond in Non-small Cell Lung Cancer. Methods: Expression of P-glycoprotein(P-gp), Glut

4、athione S transferases-(GST-) and DNA-Topoisomerase(Topo) in Non-small Cell Lung Cancer tissue from untreated 41 cases was measured by immunohistochemistry technique. These patients were treated by Vinorelbine (NVB) 25mg/m2, Cisplatin (DDP) 60mg/ m2. Results: the positive rates of P-gp, GST-and Topo

5、 was 61.0%, 75.6%、68.3%，respectively. The expression of resistance related genes were more in squamous carcinoma compared with adenocarcinoma. In poorly differentiated NSCLC theses were more than in well or /and moderately differentiated NSCLC. Respond rate was 39.0%. Respond rate of adencarcinoma w

6、as more than squamous carcinoma. In NSCLC the respond rate was more in well or /and moderately than in poorly differentiated differentiated. Conclusion: Multidrug resistance of NSCLC is a process involved in polygenes and multiple pathways. The respond rate is more in negative of resistance related

7、genes compared with positive of resistance related genes. It is helpful to the judgment of chemotherapeutics effects and prognosis examination of resistance related genes in NSCLC. Key words Non-small cell lung cancer Multidrug resistance P-glycoprotein Glutathione S transferases- DNA-Topoisomerase

8、Chemotherapy 化療是非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）綜合治療手段之一，在惡性腫瘤的化療過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥（multi-drugs resistance, MDR）是普遍存在的1、2,化療失敗的主要原因是MDR3。我們從2002年7月2003年12月對(duì)41例NSCLC 患者的P-gp（P-糖蛋白 P-glycoprotein）、GST-(谷胱甘-S-轉(zhuǎn)移酶-，Glutathione S transferases-)、Topo(DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶，DNA-Topoisomerase)表達(dá)和化療效果之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，結(jié)果如下。1.資料與方法1.1入選標(biāo)準(zhǔn) 年齡1872歲，經(jīng)過(guò)病理證

9、實(shí)為NSCLC，全部病例是喪失或拒絕手術(shù)的a期初治患者, KPS70，預(yù)計(jì)生存期3個(gè)月，臨床上有可供客觀測(cè)量的指標(biāo)（CT或X線），無(wú)嚴(yán)重的心、肝、腎功能障礙。1.2一般資料 入選患者41例，其中男24例，女17例，年齡28-70(58.8±11.4 中位年齡59.5)歲，腺癌24例(中高分化13例，低11例)，鱗癌17例 (中高分化9例，低分化8例)，標(biāo)本來(lái)源于41例患者的支氣管鏡所取病理標(biāo)本，均以石蠟包埋。1.3試劑 鼠抗人P-gp、GST-、Topo基因單克隆抗體購(gòu)自北京中山生物有限公司，一抗為小鼠抗人耐藥基因單克隆抗體，顯色免疫組化應(yīng)用SP法，二抗（SA-HRP）上標(biāo)辣根過(guò)氧化

10、物酶，底物選擇DAB。染色步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。1.4方法 測(cè)定41例NSCLC的P-gp、GST-、Topo表達(dá)。應(yīng)用NP方案化療，蓋諾（NVB）和順鉑（DDP）為連云港豪森制藥有限公司產(chǎn)品。NVB25mg/m2第1、8d靜脈滴注，DDP60mg/m2第12d靜脈滴注,同時(shí)水化、支持對(duì)癥治療，21d為1周期，每例患者至完成3個(gè)周期。1.5判斷標(biāo)準(zhǔn) 耐藥因子陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞膜/或細(xì)胞漿、核呈黃色顯色，為P-gp、GST-、Topo陽(yáng)性，隨機(jī)記數(shù)5個(gè)高倍視野(記數(shù)200個(gè)細(xì)胞)，按染色細(xì)胞數(shù)量及著色強(qiáng)度分為：，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%；+，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%50%；+，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%75%；+，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

11、75%4。以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照。療效判定按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為：完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）、進(jìn)展（PD）。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用x2檢驗(yàn)。2.結(jié)果免疫組化檢測(cè)顯示P-gp、GST-主要表達(dá)在胞膜和/或胞漿，Topo主要表達(dá)在細(xì)胞核，三種耐藥相關(guān)基因與病理類型及分化程度的關(guān)系見(jiàn)表-1。低分化NSCLC 與中高分化NSCLC 比較P-gp 、Topo差別有顯著性意義（P-gp x2=7.99 P0.01， Topox2=5.73 0.05P 0.01）。P-gp、GST-和Topo在腺癌與鱗癌中的表達(dá)比較差別無(wú)顯著性意義（P-gp：x2=1.11，p0.05

12、；GST-：x2=0.78，p0.05；Topo：x2=2.65，p0.05）。低分化腺癌 GST-和Topo表達(dá)與中高分化腺癌間差別具有顯著性意義（GST- x2=3.93 0.05P 0.01 ，Topox2=4.67 0.05P 0.01 ）。 低分化鱗癌P-gp與中高分化間差別具有顯著性意義（x2=6.03 0.05P 0.01）?；煰熜б?jiàn)表-2。本組41例患者的有效率（RR%）為39.0%，腺癌和鱗癌、中高分化NSCLC 和低分化NSCLC、腺癌中的中高分化和低分化、鱗癌中的中高分化和低分化的有效率比較（x2=0.15、x2=2.46、x2=1.77、x2=0.66）差別無(wú)顯著性意

13、義?；煰熜cP-pg GST- Topo-的關(guān)系見(jiàn)表-3。3.討論化療是惡性腫瘤治療的重要手段之一，腫瘤細(xì)胞一旦對(duì)一種化療藥物產(chǎn)生耐藥，對(duì)其他許多結(jié)構(gòu)不同、作用機(jī)制不同的化療藥物也產(chǎn)生耐藥，即MDR5，NSCLC耐藥機(jī)制復(fù)雜，由多種機(jī)制相互制約、相互作用產(chǎn)生。P-gp是一種雙向泵，由ATP提供能量將藥物泵出細(xì)胞而使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低6。GST-是腫瘤細(xì)胞和正常組織中最常見(jiàn)的同功酶，與細(xì)胞內(nèi)解毒密切相關(guān)，在許多耐藥細(xì)胞系中較高水平表達(dá)7。Topo是DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄必需的酶，化療藥物通過(guò)該酶與DNA雙鏈形成復(fù)合物，引起DNA損傷，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，當(dāng)該酶減少、活性降低，復(fù)合物形成減少而產(chǎn)生耐藥8

14、、9。本組P-gp、GST-、Topo在NSCLC中表達(dá)不同；不同類型NSCLC P-gp、GST-、Topo表達(dá)程度不同；同一類型的肺癌分化程度不同P-gp、GST-、Topo的表達(dá)程度也不同，低分化NSCLC P-gp Topo顯著高于中高分化NSCLC（x2=7.99 P0.01，x2=5.73 0.05P 0.01）；低分化腺癌的GST-、Topo表達(dá)顯著高于中高分化腺癌（x2=3.93 0.05P 0.01，x2=4.67 0.05P 0.01）；低分化鱗癌的P-gp表達(dá)顯著高于中高分化鱗癌（x2=6.03 0.05P 0.01）。 耐藥基因陰性的NSCLC化療有效率69.2%，陽(yáng)性

15、NSCLC有效率 25%（x2=21.98，P0.01）；耐藥因子陰性腺癌化療有效率60.7%，陽(yáng)性腺癌化療有效率29.6%差異高度顯著（x2=6.75 P0.01）；藥因子陰性鱗癌化療有效率90.9%，藥因子陽(yáng)性腺癌化療有效率20%差異高度顯著（x2=18.86 P0.01）?；熡行Р⒉粌H僅發(fā)生在耐藥因子陰性的NSCLC，在耐藥因子陽(yáng)性的NSCLC也存在有效反應(yīng)，但是耐藥因子陰性化療有效高于陽(yáng)性，具有高度顯著差異；從臨床化療看NSCLC有效率（RR%）為 39.0%，腺癌的RR 41.7%，鱗癌 35.3%1013，與不論耐藥因子陰性還是陽(yáng)性的病例數(shù)化療有效率之和相同?？傊覀冋J(rèn)為：NS

16、CLC耐藥是多途徑、多基因參與的過(guò)程；低分化NSCLC耐藥相關(guān)基因表達(dá)高于高中分化NSCLC，耐藥相關(guān)因子陰性的NSCLC化療有效率高于耐藥相關(guān)因子陽(yáng)性的NSCLC，耐藥因子的檢測(cè)對(duì)NSCLC的化療療效、預(yù)后的評(píng)估具有指導(dǎo)意義。參考文獻(xiàn)1Bellamy WT. Pglycoproteins and multidrug resistance. Ann Rev Pharmcol toxcol J.1996,36:161183.2Pastan I, Gottesman MM,Lovelace UK,et al. Aretrovirus carrying an MDR CDNA confers mul

17、tidrug resistance and polarized expression of Pglycoprotein in MDCK cellsJ. Proc Natl Sci USA ,1988,85:44864490.3Schinkel AH,Borst P. Multidrug resistance mediated by Pglycoproteins J. Semin Cancer Biol, 1991,2,213.4Izquierdo MA,van-derZee AG,Vermorken JB,et al. Drug resistance-associated marker LRP

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19、levance J. J Natl Cancer Inst, 1989, 81 (12): 907-910.7Daniel V. Glutathione-s-stransferases structre and regulation of expression J.Crit Rev Biochem Mol Biol, 1993,28(3):173-207.8Boldogh I, ramana CV,Chen ZP,et al. Regulation of expression of the DNA repair gene O6-methyguanime-DNA methyltransferas

20、e via protein kinase C-mediated signaling J.Cancer Res,1998,58(17):3950-3956.9Ma J,Maliepaard M, Nooter K, et al. Reduced cellular accumulation of topoteacan: a novelo mechanism of resistance in a human ovarian cancer cell line J. Br J Cancer, 1998,77(10): 1645-1652.10張湘茹 孫燕 孔維紅 等 去甲長(zhǎng)春花堿加順鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌42例J。中華腫瘤雜志1998,1(22), 60-62.11Antoinette JW, Growley JJ, Balcerzak SP, et al . Randomized trail comparing cisplatin with cisplatin plus vinorelbine in the treatment of advanced non-small cell lung cancer: A southwest oncology group study J. J Clin Oncol, 1998,3,239.12Depierre A, Jacoulet P,